Metode de cercetare helmintologică... Metodele de diagnosticare a helmintiazelor sunt împărțite în cele directe, bazate pe identificarea directă a helminților înșiși sau a fragmentelor acestora, precum și a larvelor și ouălor de helminți (metode pentru examinarea fecalelor, urinei, bilei și conținutului duodenal, spută, sânge). și țesuturi, material obținut în timpul răzuirii din regiunea perianală și din spațiile subunguale) și indirecte, cu ajutorul cărora apar modificări secundare în corpul uman ca urmare a activității vitale a helminților (studii ale compoziției morfologice a sângelui, imunologice). metode de diagnosticare a helmintiazelor, studii cu raze X etc.). Dintre metodele directe, cele mai frecvente sunt scatologice, care sunt împărțite în macro- și microhelmintoscopice. În unele cazuri, se folosesc metode speciale.
Metode de cercetare macrogelmitoscopică au drept scop căutarea helminților sau a fragmentelor acestora (scolexuri, segmente, părți ale strobilei cestodelor). Ele sunt folosite pentru a diagnostica acele helmintiaza în care ouăle nu sunt excretate cu excrementele pacientului sau sunt excretate în cantități mici și nu întotdeauna (de exemplu, cu enterobiaza, oxiurii se găsesc în fecale, cu teniidoză - segmente).
Pentru a detecta oxiuri sau segmente de cestode în fecale, fecalele sunt examinate cu ochiul liber. Pentru diagnosticul diferențial al teniidozelor, se recomandă vizualizarea fecalelor lichefiate cu apă în porțiuni mici separate în cuve fotografice negre sau în vase Petri pe un fundal întunecat. Formatiuni mari, suspecte de fragmente de helminti, sunt examinate sub lupa intre doua lame de sticla. Dacă, conform indicațiilor clinice, se presupune detectarea helminților mici sau a capetelor de cestode după tratament, atunci particulele suspecte sunt examinate sub o lupă într-o picătură de glicerină și, dacă este necesar, la microscop.
Metode de cercetare microhelmintoscopică(calitativ) care vizează identificarea ouălor și larvelor de helminți. Aplicați metoda unui frotiu gros cu o placă de acoperire din celofan conform Kato. Kato Blend este format din 6 ml Soluție apoasă 3% de verdeață de malachit, 500 ml glicerină și 500 ml soluție de fenol 6%. Plăci Kato (celofanul hidrofil este tăiat în bucăți de 20 × 40 mm) scufundat în 24 hîn amestecul Kato, astfel încât să fie adiacente unul altuia (3-5 ml soluție de Kato la 100 de plăci). o sută mg de fecale este aplicată pe o lamă de sticlă, acoperită cu o placă de acoperire din celofan conform Kato și presată astfel încât fecalele să fie mânjite pe lamă în interiorul plăcii de celofan. Frotiul se lasă la temperatura camerei pentru a se ușura timp de 40-50 min, apoi privit la microscop. În sezonul cald, pentru a evita uscarea preparatului, puneți un burete umed pe farfuria preparatului preparat.
Pentru detectarea completă a tuturor tipurilor de helminți, trebuie utilizată metoda de frotiu gros Kato cu o placă tegumentară din celofan în combinație cu una dintre metodele de îmbogățire. Cele mai comune dintre acestea sunt metoda Kalantariană și metoda Fülleborn.
Metoda Kalantaryan: în sticle cu gura largă, volum 100 ml se amestecă bine cu o baghetă de sticlă 5 G fecale, adăugând treptat o soluție saturată de azotat de sodiu (1 kg azotat de sodiu la 1 l apă clocotită) până la marginea paharului. Particulele mari care plutesc pe suprafață sunt îndepărtate cu o linguriță de hârtie. Se aplică o lamă de sticlă pe suprafața soluției saline ( soluție salină adăugați până când amestecul este în contact complet cu lama). In 20-30 min lama este îndepărtată și filmul este privit la microscop. În absența acestei săruri, se poate folosi o soluție saturată. sare de masă conform lui Fgolleborn (400 G sare in 1 l apă clocotită).
Datorită faptului că ouăle cu o greutate specifică mare (ouă nefertilizate de ascaris, ouă de trematode și cestode mari) nu plutesc, pe lângă examinarea stratului de suprafață al lichidului, atunci când se utilizează metoda Fülleborn, este necesar să se vizualizeze 2-4 preparate din sediment la microscop.
Metode speciale de cercetare de laborator pentru diferite helmintiază.
Metode simple
Metoda macroscopică. La examinarea fecalelor, puteți găsi helminți, capetele lor, segmente, resturi de strobila care sunt eliberate independent sau după deparazitare. Această metodă este recomandată în special pentru depistarea enterobiazei, teniazei și teniarinchiazei.
Mici porțiuni de fecale se amestecă cu apă într-o baie plată sau într-o cutie Petri și, vizând la lumină bună pe un fundal întunecat, folosind o lupă dacă este necesar, se îndepărtează helminții și toate formațiunile albe suspecte cu o pensetă sau o pipetă. Materialul colectat este transferat într-un alt vas cu apă sau pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerol diluat sau soluție izotonică de clorură de sodiu pentru studii ulterioare.
În metoda de decantare, întreaga porțiune de test de fecale trebuie amestecată cu apă într-un cilindru de sticlă, apoi scursă cu grijă. strat superior apă. Acest lucru se repetă de mai multe ori. Când lichidul devine limpede, acesta este scurs, iar precipitatul este privit în porții mici într-o baie de sticlă sau vas Petri, așa cum este indicat mai sus.
Metodele microscopice sunt metoda principală de examinare a fecalelor pentru a detecta ouăle sau larvele de helminți. Diferitele metode de cercetare sunt descrise mai jos. Pentru a crește fiabilitatea examinării, analizele pot fi repetate de mai multe ori pe zi sau cu un interval de 1-3 zile.
Metoda frotiului nativ. Frotiul nativ este cel mai frecvent și tehnic metoda disponibila cercetarea fecalelor. Într-un frotiu nativ, pot fi găsite ouă și larve de helminți de toate tipurile. Cu toate acestea, cu un număr mic de ouă în fecale, nu este întotdeauna posibil să le găsiți. Prin urmare, studiul fecalelor numai cu ajutorul unui frotiu nativ nu este complet și ar trebui completat cu metode de îmbogățire. Eficacitatea studiului frotiului nativ este semnificativ crescută la vizualizarea a patru lame preparate dintr-o probă de scaun pe două lame fără lame de acoperire, ceea ce permite examinarea unui total de aproximativ aceeași cantitate de scaun ca și în cazul metodei Kato (vezi de mai jos).
O cantitate mică (de mărimea unui cap de chibrit) de fecale amestecată este unsă subțire cu un băț de lemn pe suprafața unei lame de sticlă într-o picătură de soluție de glicerină 50%. De obicei, pe un pahar se prepară două frotiuri. Frotiul este vizualizat la un microscop cu mărire redusă (ob. 8, ca. 7). În cazuri îndoielnice, acoperiți-l cu o sticlă de acoperire și examinați-l la mărire mare (rev. 40).
Pentru a pregăti un frotiu nativ mare, 200-300 mg de fecale (de mărimea unui bob de mazăre mare) sunt măcinate pe un pahar de 6x9 cm în 15-20 picături dintr-o soluție apoasă 50% de glicerină. Privit sub un microscop stereoscopic binocular (ob. 4, ca. 12,5 sau vol. 2, ca. 17) în lumină transmisă fără ochelari de protecție. În cazuri îndoielnice, puteți muta obiectivul la o mărire mai mare. În astfel de frotiuri, ouăle mari pictate de helminți sunt clar vizibile, oarecum mai rele sunt ouăle transparente ale unei tenii pitice. Această metodă nu este potrivită pentru detectarea ouălor mici. În același timp, un volum mare de material investigat și un câmp vizual mare la o adâncime mare de câmp asigură o eficiență semnificativă a acestei modificări în comparație cu frotiul nativ obișnuit.
Frotiul gros de celofan (metoda Kato) este mai eficient decât frotiul nativ dar necesită și combinație cu metode de îmbogățire. Sunt detectate ouă de toate tipurile de helminți, însă, pentru a depista ouă de tenie pitic (ouă transparente) sau opistorchus (ouă mici), asistentul de laborator trebuie să fie deosebit de atent să nu le rateze (Fig. 21).
Metoda se bazează pe detectarea ouălor de helminți într-un frotiu gros de fecale, iluminate cu glicerină și colorate cu verde malachit. În prealabil, celofanul hidrofil este tăiat în plăci de 20 x 40 mm și scufundat într-un amestec Kato (6 ml soluție apoasă 3% de verde malachit, 500 ml glicerină, 500 ml soluție fenol 6%). 3-5 ml de amestec sunt suficiente pentru 100 de farfurii, care sunt gata de utilizare într-o zi și pot fi păstrate în același amestec într-un recipient bine închis la temperatura camerei timp de 6 luni. În absența verdelui de malachit (recomandat pentru reducerea oboselii ochilor asistentului de laborator) și a fenolului (dezinfectant), se poate folosi doar o soluție apoasă 50% de glicerină, eficacitatea studiului nu scade.
Orez. 20. Metoda de preparare a unui frotiu gros de scaun cu celofan conform lui Kato
Se aplică 100 mg de scaun pe o lamă de sticlă, acoperită cu o placă de celofan tratată conform descrierii de mai sus și presată cu un dop de cauciuc, astfel încât scaunul să nu se răspândească de sub celofan. Microscopia la mărire mică sau mare a microscopului se efectuează nu mai târziu de 1 oră (pe vreme caldă - 30-40 de minute) după prepararea frotiului. Motivul opacității medicamentului poate fi un strat gros de fecale, procesarea slabă a plăcii în amestecul Kato, timpul de expunere insuficient al medicamentului sub celofan. Curățarea prelungită a glicerinei și uscarea excesivă a preparatului fac, de asemenea, dificilă detectarea ouălor.
Metoda de răsucire conform S.S. Shulman. Metoda a fost propusă pentru depistarea larvelor de helminți, în primul rând a strongiloidului, în fecale. Examinați numai fecalele proaspăt excretate, dintre care 2-3 g sunt transferate într-un borcan de sticlă, amestecate cu o baghetă de sticlă într-o mișcare circulară cu de 3-5 ori cantitatea de soluție salină, fără a atinge pereții vasului. Ouăle și larvele de helminți se acumulează în centru. După terminarea amestecării, picătura de la capătul bețișoarei este transferată rapid pe o lamă de sticlă, acoperită cu o sticlă de acoperire și examinată la microscop.
Metode de îmbogățire. Metodele de îmbogățire se bazează pe diferența de greutate specifică a ouălor și soluția salină aplicată, ceea ce permite depistarea unui număr mic dintre acestea. Dacă greutatea specifică a ouălor este mai mare decât greutatea specifică a lichidului, atunci ouăle sunt concentrate în sediment, care este examinat la microscop. Această metodă de sedimentare (sedimentare) este utilizată pentru ouăle de trematode. Cu o greutate specifică mai mare a soluției, ouăle plutesc la suprafața lichidului și apoi filmul este examinat. Acestea sunt metode de flotație (plutire) și sunt cele mai eficiente pentru detectarea ouălor de anchilostoma, tricocemul și ouăle de tenia pitică.
Metode de flotare. Metoda Fulleborn se bazează pe apariția ouălor de helminți într-o soluție saturată de clorură de sodiu, care are o densitate relativă ridicată (1,2), ceea ce face posibilă detectarea ouălor cu un număr mic de acestea. Metoda este mai eficientă decât studierea frotiului nativ, deși este mai dificilă. Avantajele metodei sunt costul redus și disponibilitatea acesteia. Se recomandă combinarea studiului frotiului nativ cu metoda Fülleborn.
O soluție saturată se prepară prin dizolvarea a 400 g de clorură de sodiu în 1 litru de apă în timp ce se fierbe. Densitatea relativă a soluției este 1,18-1,22. Păstrați soluția într-o sticlă închisă. Pentru analiză se pun 2-3 g de fecale într-un borcan cu un volum de 30-50 ml și, cu agitare, se toarnă aproape până la vârf cu un bețișor o soluție saturată de clorură de sodiu. Particulele mari plutitoare sunt îndepărtate rapid cu o bandă de hârtie. După 45-60 de minute. se depune cu o buclă de sârmă, se îndepărtează pelicula de suprafață și se transferă pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție apoasă 50% de glicerină. În loc să îndepărtați filmul cu o buclă, puteți adăuga soluția din borcan în partea de sus, acoperiți cu o lamă de sticlă, pe suprafața căreia se lipesc ouăle plutitoare. Sunt pregătite mai multe preparate. În plus, se examinează 2-4 preparate din sediment, preluându-le cu o pipetă oculară pe 2 lame de sticlă. Pe lângă pelicula de suprafață, este imperativ să se examineze și sedimentul, deoarece ouăle de trematode, teniide, ouă de ascaris nefertilizate nu plutesc în această soluție... Ouăle unui număr de helminți nu plutesc imediat într-o soluție salină. Deci, dacă numărul maxim de ouă ale unei tenii pitic iese după 15-20 de minute, atunci ascaris - după 1,5-2 ore, tricoc - după 2-3 ore.
Astfel, avantajele acestei metode includ costul redus și disponibilitatea ei, dezavantajele sunt necesitatea de a vizualiza preparatele pe pelicula de suprafață și sediment, precum și durata de decantare.
Metoda lui E. V. Kalantaryan este, de asemenea, o metodă de îmbogățire, dar este mai eficientă și mai simplă decât metoda Fulleborn. Se folosește o soluție saturată de azotat de sodiu cu o densitate relativă de 1,38. Prin urmare, ouăle majorității helminților plutesc și se găsesc în pelicula de suprafață; studiul sedimentului nu este necesar.
Pentru a prepara o soluție saturată de azotat de sodiu, 1 kg de sare de azotat de sodiu (nitrat de sodiu) se dizolvă în 1 litru de apă și se fierbe până când se dizolvă complet și se formează o peliculă la suprafață. Se toarnă într-o sticlă uscată fără filtrare. În absența azotatului de sodiu, acesta poate fi înlocuit cu azotat de amoniu (nitrat de amoniu), dizolvând 1,7 kg la 1 litru de apă. Densitatea relativă a soluției rezultate este de 1,3, ceea ce reduce oarecum eficiența în comparație cu soluția de azotat de sodiu.
Avantajele metodei: ouăle majorității helminților plutesc rapid și se găsesc în pelicula de suprafață, ceea ce elimină necesitatea studierii sedimentului. Dezavantajele acestei metode sunt deficitul de nitrat de sodiu, precum și faptul că ouăle de trematode, oncosferele teniide nu plutesc și rămân în sediment. Trebuie avut în vedere faptul că odată cu păstrarea prelungită (mai mult de 1-2 ore) a fecalelor în soluție, ouăle unor helminți încep să se umfle și să se aseze, dispărând din pelicula de suprafață.
Metode de sedimentare
Metoda lui PP Goryachev se bazează pe principiul depunerii ouălor. În acest caz, frotiul este ușor, fără impurități grosiere, ceea ce facilitează detectarea ouălor mici de trematode (opisthorchus etc.). Greutatea specifică a ouălor de opisthorchus este mare, astfel încât acestea nu plutesc în soluții saline.
Într-un cilindru cu diametrul de 2-3 cm se toarnă 70-100 ml de soluție saturată de clorură de sodiu. Separat, se amestecă bine 0,5 g de fecale în 20-25 ml apă și se filtrează cu grijă printr-o pâlnie cu două straturi de tifon într-un cilindru în soluție salină, evitând amestecarea (astfel încât să se formeze două straturi clar delimitate). După 2-3 ore, stratul superior cu fecale este aspirat cu o pipetă, iar soluția salină rămasă este lăsată să stea 12-20 ore sau centrifugata. Precipitatul este transferat cu o pipetă pe o lamă de sticlă, acoperită cu o sticlă de acoperire și microscopizat.
Metoda Goryachev a fost propusă pentru detectarea ouălor de opisthorchus și s-a dovedit a fi mai eficientă decât studiul frotiului nativ și metoda Fülleborn. În prezent, pentru diagnosticul opistorhiei (clonorchiazei) sunt recomandate metodele Kato și Kalantaryan, deoarece sunt destul de eficiente și mai simple din punct de vedere tehnic.
metoda lui Krasilnikov. Sub influența surfactanților care alcătuiesc detergenti(detergenți), ouăle de helminți sunt eliberate de fecale și concentrate în sediment.
Se prepară în prealabil o soluție de 1% de pulbere de spălat „Lotos”. Pentru aceasta, 10 g de pulbere se dizolvă în 1 litru de apă de la robinet. În absența „Lotus”, puteți folosi alte pulberi de spălat, dar fiecare dintre ele trebuie luată atât cât se va dizolva fără formarea de sedimente în 1 litru de apă de la robinet. Într-un vas de sticlă cu o capacitate de 30-50 ml, turnați 20-30 ml de soluție de detergent, puneți acolo o mică porție de fecale și amestecați bine. Raportul dintre scaun și soluție trebuie să fie de aproximativ 1:20. Fecalele ar trebui să fie în soluție cel puțin o zi. În acest timp se formează un sediment de 2-3 straturi la fund. Stratul inferior este format din particule grele grosiere, ouăle de helminți sunt colectate în stratul mijlociu, stratul superior este fulgi gri-albicios. Apoi, 2-3 picături de lichid sunt colectate din stratul mijlociu cu o pipetă și transferate pe o lamă de sticlă. Se prepară 2 preparate pe un pahar, acoperit cu o sticlă de acoperire și microscopate.
Metoda Krasilnikov vă permite să detectați ouăle tuturor tipurilor de helminți excretate în fecale.
Metoda de sedimentare eter-formalină și metoda de sedimentare chimică cu eficiență ridicată sunt foarte laborioase, mai ales în timpul examinărilor de masă, în acest sens, este mai oportun să se folosească metoda eter-acetică. Permite, după prelucrarea suplimentară a sedimentului cu reactivi chimici, să se obțină în el practic doar ouă de helminți, ceea ce facilitează identificarea ouălor mici de trematode. Această metodă s-a dovedit a fi universală, detectând ouăle tuturor helminților intestinali, chisturilor protozoare intestinale; poate fi folosită și pentru a cuantifica intensitatea invaziei.
Se toarnă 7 ml de soluție de acid acetic 10% în tuburi gradate de centrifugă și se adaugă 1 g de fecale până la marcajul de 8 ml. Fecalele și amestecați bine cu un bețișor până când se formează un amestec omogen, apoi filtrați prin două straturi de tifon într-un alt tub de centrifugă (astfel încât să existe 8 ml într-un tub nou de soluție strecurată, dacă este mai puțin, atunci puteți clăti suplimentar. o pâlnie cu un pansament cu o soluție 10% de acid acetic prin care a filtrat soluția fecală). În acest tub se adaugă 2 ml de eter (până la marcajul de 10 ml), se închide dopul și se agită energic timp de 30 de secunde. Amestecul este centrifugat la 3000 rpm timp de 1 minut (sau 2 minute la 1500 rpm). Stratul de coagulant (sub formă de dop în partea superioară a tubului) este separat de pereții tubului cu un băț și aruncat cu grijă împreună cu lichidul supernatant. Precipitatul (de obicei mic, incolor) se aplică pe lamele de sticlă cu o pipetă, se acoperă cu o sticlă de acoperire și se microscopează.
Metode de viață diagnostic de laborator helmintiaza:
- studii helminticoprologice;
- examene helmintoscopice;
- examene helmintolarvoscopice;
- diagnostic imunobiologic;
- deparazitare diagnostică și alte metode;
Metode de diagnostic post mortem:
- studii patologice;
- disecții helmintologice complete și incomplete de organe și țesuturi (PGV și NPGV).
Înainte de a trece la problemele de mai sus ale acestui subiect, consider că este oportun să dau o definiție a conceptului de „invazie” și „boli invazive”.
Bolile invazive pot evolua la fel de clinic forma pronuntata cu mortalitate semnificativă și într-o formă latentă (latentă).
În diagnosticarea bolilor invazive, cercetare de laborator, în urma căreia este instalat agentul patogen.
Luați în considerare metodele de diagnosticare intravitală a helmintiazelor. Pentru aceasta se folosesc atât examinări macro- cât și microscopice, în primul rând ale fecalelor, urinei, sângelui, dermului, conținutului cavităților corporale etc. Aceste metode sunt helmintice. cercetarea diagnosticului, care vizează găsirea și studierea helminților înșiși, fragmentele lor de ouă și larve Ilia sunt cele mai bazate pe dovezi și sunt utilizate pe scară largă pentru diagnosticul helmintiazelor.
Materialul pentru studiile de diagnostic trebuie să fie lipsit de orice materie străină și contaminare, se recomandă să se preleveze fecale din rectul animalului, acestea trebuie să fie proaspete, trebuie păstrate la rece (nu> 5 ° C), puteți se păstrează de asemenea o soluție de formol 5-10% sau acid carbolic.
Helmintoscopia- este utilizat pentru depistarea exemplarelor întregi de helminți sau a fragmentelor acestora în fecale, în special la examinarea cestodozelor intestinale. Această metodă este folosită și pentru controlul eficienței deparazitării efectuate, pentru a ține cont de numărul de helminți expulzați. Pentru aceste studii, este necesar să se ia întreaga porțiune unică de fecale și, pentru a ține cont de eficacitatea deparazitării, toate excrementele excretate de animale în 2-4 zile după tratament trebuie colectate. Fecalele colectate sunt examinate preliminar cu ochiul liber. Apoi se pun într-un vas metalic, se diluează cu de 5-10 ori cantitatea de apă, se amestecă și se lasă să se așeze o vreme, apoi se toarnă stratul superior (până se sedimentează) și se adaugă din nou apă. Aceste manipulări de spălare și decantare secvențială sunt efectuate de mai multe ori. Sedimentul rezultat este examinat în porții mici în cuve (cuve Petri) pe un fundal alb și negru. Toți helminții vizibili sunt selectați cu un ac și examinați la microscop, stabilind vederea.
Helmintoscopia este o metodă de diagnosticare a helmintiazelor ca urmare a detectării helminților în materialul de ou. Pentru astfel de studii se folosesc următoarele echipamente și mijloace: microscop biologic, lame, vase Petri, pahare din sticlă sau plastic (nu > 4-5 cm în diametru), pahare de 50 ml, sită cu filtru (cu plasă de nailon, ciorapi), sticlă tije , balamale metalice cu un diametru inel de 8-10 mm.
Pentru studiile de diagnostic se folosesc soluții de flotație. Cea mai bună capacitate de flotare o posedă soluțiile la o temperatură de 20-22 o C. Densitatea soluției se precizează cu un densimetru. O soluție saturată de nitrat tehnic sau azotat de amoniu cu o densitate de 1,32 (1500 g la 1 litru de apă clocotită); azotat de sodiu sau azotat de sodiu cu o densitate de 1,38 (raportul dintre sare și apa fierbinte 1: 1); sulfat de magneziu (sulfat de magneziu) cu o densitate de 1,26-1,28 (920 g la 1 litru de apă fierbinte); tiosulfat de sodiu sau hiposulfit de sodiu, densitate 1,38-1,40 (1750 g la 1 litru de apă clocotită); sulfat de zinc cu o densitate de 1,24 (400 g la 1 litru de apă); sare de masă, cu densitatea 1,2 (400 g sare în 1 litru de apă se încălzește până la fierbere), folosită în stare rece.
Cea mai simplă metodă de examinare helmintoscopică a fecalelor este metoda frotiului nativ. O bucată mică de fecale se pune pe o lamă de sticlă, se adaugă 2-3 picături dintr-un amestec de părți egale de glicerină și apă, se amestecă bine, se acoperă cu un pahar de acoperire și se uită la microscop. Această metodă nu este de încredere, deoarece cu o invazie slabă dă un rezultat negativ.
Metoda de spălare secvențială(metoda de sedimentare, sedimentare) este utilizat pentru diagnosticarea trematodelor animalelor, ale căror ouă de agenți patogeni au o greutate specifică mare și nu sunt captate prin metoda plutirii (flotației). Se iau 5 g de fecale, se amestecă cu de 10 ori cantitatea de apă, se filtrează printr-o sită sau tifon, iar filtratul se lasă să stea 5 minute. Apoi lichidul este scurs și sedimentul este adăugat apă curatăși din nou apărat timp de 5 minute. Până când lichidul devine limpede. Lichidul este drenat, iar sedimentul este examinat la microscop pentru prezența trematodelor.
Pentru diagnosticarea nematozelor și cestodozelor se folosesc cel mai des metodele de flotație. Cea mai comună și mai des folosită este metoda Fulleborn. Pentru a face acest lucru, luați 10-20 g de fecale, puneți-l într-un borcan sau pahar cu o capacitate de 100-200 ml, frecați bine cu un băț de sticlă sau lemn într-o soluție saturată de clorură de sodiu. Cantitatea totală de soluție adăugată ar trebui să fie de aproximativ 20 de ori mai multa cantitate fecale. Apoi filtram si lasam 30 de minute. Îndepărtați filmul de pe suprafața lichidului sedimentat cu o buclă de metal și transferați-l pe o lamă de sticlă, acoperiți-l cu un pahar de acoperire și examinați-l la microscop. Metoda Shcherbovich este folosită pentru a detecta ouăle cu mai multe densitate mare(de exemplu, ouă metastrongilid), pentru care se folosește o soluție saturată de sulfat de magneziu. O probă de fecale (3-5 g) este agitată în apă până se obține o suspensie uniformă. Filtrăm printr-o sită într-un tub de centrifugă și centrifugăm timp de 1-2 minute. Stratul superior este turnat și se adaugă o soluție saturată de sulfat de magneziu în sediment, se amestecă bine și se centrifughează din nou timp de 1-2 minute. Apoi, pelicula superioară este îndepărtată cu o buclă de metal, așezată pe o lamă de sticlă, acoperită cu o foaie de acoperire și examinată la microscop.
Metoda lui Kotelnikov și Hrenov. O probă de fecale (3 g) se pune într-un pahar și se toarnă cu o cantitate mică de soluție saturată de azotat de amoniu, se amestecă cu un bețișor de sticlă (de lemn) și se adaugă soluția la 50 ml. Filtram suspensia intr-un alt pahar si lasam 10-15 minute. Îndepărtăm 3-4 picături de pe suprafață cu o buclă, le transferăm pe o lamă de sticlă și microscopăm la o mărire mică de microscop. Găsim ouă de ascaris, trichocephalus, esofagostom, strongyloides, metastrongylid, neoascaris, strongilați ai sistemului digestiv, monesium și tizanesia, parascaris, toxocaris etc.
Metoda N.V. Demidov pentru diagnosticul fascioliazei. Probă de fecale (3 g de la oaie, 5 g de la mare bovine), pus într-un pahar, se toarnă o soluție saturată de clorură de sodiu, se amestecă bine cu o baghetă de sticlă și se lasă timp de 15-20 de minute. Particulele mari sunt îndepărtate de pe suprafață; lichidul se aspira cu o seringă sau se scurge cu grijă, se lasă aproximativ 20-30 ml, se adaugă apă în sediment până la volumul complet al paharului, se amestecă bine, se filtrează printr-o sită sau 1 strat de tifon; aspirați din nou lichidul, lăsând 15-20 ml sediment; sedimentul se toarnă în pahare conice mici, se stabilește timp de 3-5 minute, lichidul este aspirat și sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă, examinându-l la microscop cu mărire mică.
Metoda dragă combină procedurile de sedimentare și flotare. Fecalele se amestecă cu apă și se centrifug timp de 3-5 minute. Supernatantul este decantat, iar lichidul lui Darling (glicerină cu o soluție saturată de clorură de sodiu, 1: 1) se adaugă la sediment, se agită bine și se centrifugă din nou timp de 3-5 minute. Cu o buclă de metal, îndepărtați filmul de pe o lamă de sticlă, acoperiți cu o lametă și examinați.
Există mult mai multe metode de cercetare modificate pentru detectarea ouălor de helminți. Există metode standardizate ale lui Fülleborn, Shcherbovich etc. În toate studiile, se prelevează aceleași vase, se apără și se centrifug probele în același timp, se folosesc bucle de același diametru și, comparând numărul de ouă din domeniul de vedere la microscop sau într-o picătură de film de suprafață înainte și după prelucrarea animalelor, judecați eficacitatea deparazitării efectuate. Cea mai simplă și destul de precisă este tehnica propusă de M.Sh.Akbaev folosind o grilă realizată din film fotografic după fotografiile cu raze X. În plus, se folosesc studii cantitative helmintice.
Metoda tabelului. Mai întâi se toarnă 56 ml de apă într-un balon de 100 ml și se marchează în exterior la nivelul meniscului acestuia. Apoi se toarnă încă 4 ml de apă și se face un nou semn. Se toarnă apă și se toarnă 56 ml de soluție de hidroxid de sodiu 0,1 N într-un balon gradat, se adaugă atât de multe fecale încât nivelul lichidului să ajungă la 60 ml. (4 cm 3 fecale), adăugați 10-15 mărgele, agitați bine. Imediat după agitare cu o pipetă gradată, se colectează 0,075 ml sau 0,1 ml din amestec, se aplică pe o lamă de sticlă și se examinează la microscop, numărând numărul de ouă de helminți. Numărul de ouă în 1 cm 3 (1 g) de fecale, numărul de ouă găsite se înmulțește cu 200 (dacă s-a examinat 0,075 ml de amestec) sau cu 150 (dacă 0,1 ml de amestec).
Studiile helmintolarvoscopice sunt utilizate pentru a diagnostica dictiocauloza, mullerioza și alte protostrongilidoze, precum și strongiloidoza tractului digestiv al rumegătoarelor și strongiloidoza diferitelor animale.
Metoda Berman și Orlov. 10 g de fecale se pun în pâlniile aparatului Berman pe o plasă metalică sau se înfășoară în bucăți de tifon. Se toarnă apă la temperatura camerei și se lasă 3-6 ore. În acest timp, larvele ies din probă în lichid și coboară prin tub până la fundul eprubetei. Lichidul din eprubetă este scurs și aspirat. Precipitatul după agitare este turnat pe o lamă de sticlă și microscopat la o mărire mică a microscopului. Larvele de nematode sunt mobile și ușor de detectat.
Modificare simplificată a metodei lui Berman (după Shilnikov). Probele de fecale sunt plasate într-un pahar cu apă și învelite în șervețele de tifon. După 3-6 ore, probele se scot, lichidul se depune timp de 10-15 minute, apoi se aspira cu o pipetă un strat transparent de apă. Apoi o picătură de sediment este pipetată pe o lamă de microscop.
Metoda de sedimentare centrifuga.(metoda expresă conform lui Kotelnikov etc.). 3-5 g de fecale se pun in eprubete cu apa (20-25 o C) si se centrifug (1000-1500 rpm) timp de 2 minute. Apoi scurgem apa, iar precipitatul, scuturându-l, este turnat pe o lamă de sticlă și examinat pentru prezența larvelor.
metoda lui Weid. Mai multe bile de fecale de la oi, capre sunt așezate pe o lamă de sticlă sau sticlă de ceas și se adaugă apă la o temperatură de 40 ° C. După 4 ° minute, bilele sunt îndepărtate și lichidul rămas pe sticlă este examinat la microscop pentru prezența larvelor de nematode. Larvele găsite prin diferite metode trebuie diferențiate.
Test de sânge conform lui Kulikov. Din vena jugulară se iau 20 ml de sânge și se adaugă 2 ml dintr-o soluție apoasă 3,8% de acid citric sodic și se lasă timp de 20-25 de minute. Se formează 3 straturi: cel inferior este eritrocite sedimentate, cel mijlociu este leucocite și larve de nematode, iar cel superior este ser. Cu o pipetă subțire, luați conținutul stratului mijlociu, aplicați-l în picături pe o lamă de sticlă, acoperiți cu o foaie de acoperire și priviți la microscop.
Studiul sângelui vitelor (după Steward). Eliberăm pielea de păr, dezinfectăm locul. Trageți pielea cu penseta și tăiați stratul de suprafață cu foarfecele curbate. Așezat pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție salină și împărțit cu grijă cu ace de disecție. Lichidul este examinat la microscop.
Studiul pielii de cal după R.S. Chebotarev. La greabăn, umăr și alte locuri, se selectează o zonă de piele de 5 cm 2, dezinfectată cu alcool. Prindem pielea într-un pliu, tăiem o bucată de 3-4 mm grosime și o suprafață de 2-3 cm2. Secțiunile se pun într-o eprubetă și se umplu cu 2-3 ml de soluție salină și se lasă câteva ore într-un termostat la 36-37 o C sau la temperatura camerei. Apoi, conținutul eprubetei este turnat pe un pahar de ceas și examinat la microscop pentru a detecta larvele de onchocerci.
Diagnosticul imunobiologic.În practică, reacțiile alergice sunt utilizate pentru a diagnostica helmintiaza tisulară sau așa-numitele cestodoze larvare, cum ar fi echinococoza, cenuroza, cisticercoza, precum și nematozi precum trichineloza. Pentru aceasta, se folosește un test intradermic. Ca antigen, se recomandă un lichid din larve (bule) sau extracte din Trichinella și larvele acestora.
În prezent, se acordă multă atenție dezvoltării și utilizării reacțiilor serologice, folosind ca antigene larve de helminți vii. Conform acestui principiu, reacțiile de microprecipitare sunt stabilite pe larvele vii de nematode cu nematode, pe cercarii - cu trematode, pe oncosfere și scolex - cu cestodoze larvare. Un alt principiu al reacțiilor serologice este asociat cu utilizarea antigenelor somatice. Se aplică reacția de hemaglutinare și floculare (aglutinare) cu antigene adsorbite. Carminul, bentonita și rășina sintetică din latex sunt utilizate ca adsorbanți.
O varietate de reacții serologice sunt: reacția de scolexoprecipitare (RSKP), dezvoltată de R.S. Shultz și R.G. Ismagilova pentru diagnosticul echinococozei la ovine. Alte reactii: RNGA, RZGA, etc.
Deparazitarea diagnostică este o metodă de examinare macrohelmintică. Este utilizat pentru suspiciunea de moneziaza, tizanioza, avitellinoza rumegătoarelor, anoplocefalidoza cailor, teniidoza carnivorelor, drepanidotenioza păsărilor de apă, ascariaza porcilor, ascariaza găinilor și alte grupuri mici de animale; cel mai suspect de boală, introduceți antihelminticul corespunzător într-o doză terapeutică sau mică. Animalele sunt monitorizate și toate excrementele excretate sunt verificate pentru a depista helminții sau fragmentele acestora, care sunt investigate în continuare.
Și, în sfârșit, metode de cercetare a altor organe.
Examenul urinei: cu dioctofimoză a rinichilor, capilarizare Vezica urinara... Urina trebuie examinată macroscopic sau cu lupă pentru prezența helminților sau a fragmentelor acestora. Urina se diluează în jumătate cu apă distilată și se centrifuge timp de 2-3 minute, se scurge lichidul, iar precipitatul se aplică pe lame de sticlă și se examinează.
Examinarea conținutului traheei păsărilor: syngamuses sau citostoame sunt clar vizibile în ea, care au de obicei o culoare roșie aprinsă.
Examinarea camerei oculare. Diagnosticul intravital al setariozei ochilor cailor și bovinelor se realizează printr-o examinare macroscopică a camerei anterioare a ochiului afectat, unde se observă setaria care înotă liber (5-10 cm) și este bine vizibilă chiar și prin corneea opaca. .
Examinarea răzuirii superficiale din pliurile perianale: un băț sau un chibrit umezit cu o soluție apoasă 50% de glicerină este răzuit din pliurile perianale din partea interioară a rădăcinii cozii și din perineu. Răzuirea este transferată pe o lamă de sticlă în 2-3 picături de glicerină (1: 1 în apă), acoperită cu un pahar de acoperire și examinată la microscop pentru prezența ouălor de oxiurat.
Metode de diagnostic post-mortem al helmintiazelor
- studii patologice și histologice. Diagnosticul post-mortem de helmintiază diferite etape dezvoltarea lor în organele și țesuturile animalelor. Cea mai avansată tehnică de autopsie helmintologică a fost dezvoltată de K.I. Skryabi. Distingeți autopsia helmintologică completă și incompletă.
Autopsia helmintologică completă este cea mai bună metoda de incredere, care permite înregistrarea atât cantitativă, cât și calitativă a tuturor helminților care infestează animalul.
Esența acestei metode: după îndepărtarea pielii de pe cadavru, examinați cu atenție țesut subcutanat, apoi deschide cufărul și cavitate abdominalăși îndepărtați toate organele sistemelor: digestiv, respirator, circulator, urogenital etc.
Organele se separă și se examinează separat, folosind metoda spălărilor succesive. Organe parenchimatoase(ficat, plămâni, pancreas, rinichi etc.) se pun într-un vas separat și se transformă în carne tocată, rupând cu mâinile sau tăindu-se în bucăți mici cu un cuțit sau foarfece. În plus, acest detritus este spălat cu apă sau soluție salină, folosind metoda spălărilor succesive. Sedimentul rezultat este examinat în porțiuni mici, mai întâi în negru și apoi în cuve albe sau în vase Petri pe fond alb-negru. Helminții mari sunt selectați vizual, iar cei mici - folosind o lupă de mână cu mărire de 8-10x. Colectați helminți doar cu o perie sau cu ace de disecție, dar nu cu penseta și Nepal.
NPGV este o autopsie helmintologică simplificată, în timpul căreia sunt îndepărtați din organe și țesuturi numai helminții individuali care se disting clar ca mărime. De asemenea, este folosit pentru obținerea de materiale muzeale.
Cercetarea helmintologică a obiectelor mediului extern. Colectarea, conservarea și expedierea helminților. Fixarea, colorarea helminților și prepararea micropreparatelor permanente din aceștia. Pregătirea macropregătirilor muzeale. Diagnosticul de laborator al trematodelor. Diagnostice: fascioloza, dicrocelioza, opistorhia, paramfistomiaza, prostogonimoza pasarilor, echinostomiaza ratele si gastele.
Introducere
Capitolul I. Clasificarea helmintiazelor
Capitolul II. Patogenia helmintiazelor
1 Principalele faze ale helmintiazelor în patogeneză și clinică
2 Factorul de influență a agentului patogen asupra sistemului imunitar al gazdei
Capitolul III. Principiile de bază ale diagnosticului helmintiazelor
Capitolul IV. Metode de cercetare macroscopică
Capitolul V. Metode de cercetare calitativă
1 frotiu nativ
2 Metoda Kato
3 Metode bazate pe principiul depunerii ouălor
4 Metode de îmbogățire bazate pe principiul ouălor plutitoare
5 Metodă de depistare a ouălor de helminți în fecale prin îmbogățire
6 Metode de flotare
7 Metoda benzii adezive
Capitolul VI. Metode de cercetare cantitativă
1 metoda Stoll
2 Metoda Krasilnikov-Volkova
CAPITOLUL VII. Metode de diagnosticare a invaziilor protozoare
1 frotiu nativ
Concluzie
Bibliografie
INTRODUCERE
Dezvoltarea afacerilor mici în industria alimentară cu control tehnologic insuficient a dus la scăderea calității și siguranței produselor alimentare. Au apărut abatoare ilegale și producția clandestină de produse din carne care nu au trecut controlul veterinar. Înrăutățirea situației este facilitată și de eliberarea de certificate de control veterinar pentru produsele alimentare „pe bază comercială”, scăderea calității examinărilor medicale și angajarea persoanelor fără fișă medicală.
O creștere a numărului de animale domestice se înregistrează anual în lume. Potrivit Federației Ruse, circa 5 mln. câinii de rasă pură sunt înregistrați în Rusia. În general, probabil, în țara noastră sunt aproximativ 30 de milioane de câini, mai mult, mulți dintre ei sunt neglijați. Potrivit diferitelor studii, până la 80% dintre câinii domestici sunt infectați cu viermi. Problema poluării mediului cu fecalele acestor animale devine din ce în ce mai acută. Sondajele efectuate în diferite țări au stabilit o contaminare semnificativă a solului în aşezări ouă de helminți cu fluctuații de până la 60% din probele pozitive. Cele mai contaminate cu ouă de helminți sunt locurile din apropierea containerelor de gunoi, curțile, cutiile cu nisip ale grădinițelor, piețele, spitalele veterinare ale orașului, subsolurile caselor.
Astăzi, din cauza problemei actuale, diagnosticul de helmintiază este de mare importanță, care este deosebit de important în stadiile incipiente ale bolii.
Scopul lucrării noastre este de a studia teoretic metodele de diagnosticare modernă a celor mai frecvente helmintiază utilizate astăzi în practica clinică.
Sarcini de lucru:
identificarea celor mai eficiente metode pentru studiul helmintiazelor în practica clinică;
Familiarizarea cu statisticile OMS;
identificarea avantajelor și dezavantajelor diferitelor metode;
identificarea celor mai eficiente metode;
studiul istoriei dezvoltării helmintiazelor
studiul metodelor aplicate și promițătoare de depistare a helmintiazelor.
CAPITOLUL I. CLASIFICAREA HELMINTOZELOR
Al doilea grup include helminții (trichinella, trematode), care pot fi infectați prin carne și pește de animale.
Helminții, atunci când se hrănesc, emit substanțe otrăvitoare în corpul gazdei, care sunt absorbite instantaneu în fluxul sanguin, răspândite prin țesuturile gazdei, afectându-i sistemul nervos și toate organele vitale. ...
Helmintiazele se caracterizează prin dezvoltarea ouălor și a larvelor de agenți patogeni numai în mediul extern, fără participarea gazdelor intermediare. Dezvoltarea ouălor de geohelmint are loc în sol sau pe legume și este determinată de factori precum temperatura, umiditatea și aerarea solului.
Tenioza - boli asociate cu utilizarea cărnii crude. Cu aceste boli, o persoană este proprietarul final al helminților și singura sursă de invazie. O persoană se infectează prin consumul de carne infectată cu stadiul larvar al biohelmintului. Există două tipuri de tenia: tenia bovină și tenia de porc. Când se consumă carne contaminată cu larve tenia bovină, o persoană dezvoltă o boală numită teniarinchiază. Când se consumă carne infectată cu larve de tenia de porc, se dezvoltă teniaza.
Trichineloza este o biohelmintiază caracterizată prin febră, dureri musculare și manifestări alergice. Infecția umană apare atunci când se consumă carne care conține larve de Trichinella încapsulate.
Difilobotriaza - biohelmintiază, caracterizată prin afectarea tractului gastrointestinal și având curs cronic... Infecția umană apare atunci când mănâncă pește și caviar care conțin larve de tenia insuficient procesate termic sau ușor sărate.
Opistorhiază - biohelmintiază, caracterizată prin afectarea ficatului, pancreasului și având un curs cronic. Infecția umană apare atunci când se mănâncă pește ușor sărat, prost uscat, crud sau insuficient procesat termic, care conține larvele pisicii.
Geohelmintiazele sunt helmintiazele ai căror agenți cauzali se dezvoltă fără participarea unei gazde intermediare. Ouăle sau larvele de geohelminți eliberate din organism se dezvoltă până la stadiul invaziv în sol. Reprezentanții naturii vii (mediul biotic) aici pot juca doar rolul de purtători mecanici ai larvelor invazive. De exemplu, muștele pot transporta accidental ouă sau larve pe proboscis sau pe tulpină. Geohelmintiaza include ascariaza, tricocefaloza, anchilostomiaza, strongiloidiaza și alte boli. ah, câini - pe membre, păr.
CAPITOLUL II. PATOGENEZA HELMINTOZEI
Potrivit experților OMS, helmintiazele au devenit acum într-o oarecare măsură „boli neglijate” – peste tot în lume există o subestimare a semnificației lor medico-sociale. Chiar și în țările endemice, acestea primesc o atenție insuficientă, atât din partea autorităților sanitare, cât și din partea populației.
2.1 Principalele faze ale helmintiazelor în patogeneză și clinică
În patogeneza și clinica helmintiazelor se disting două faze principale: acută - primele 2-3 săptămâni după invazie, iar în cazuri severe - până la 2 luni sau mai mult și cronică - care durează de la câteva luni la mulți ani.
.2 Factorul de influență a agentului patogen asupra sistemului imunitar al gazdei
Factorul de influență a agentului patogen asupra sistemului imunitar al „gazdei” continuă să joace un rol semnificativ în faza cronica invazie. Unul dintre motive importante leziunile de organ și sistemice, în special în helmintiaza tisulară, este formarea de complexe imune care activează sistemele mediatoare (complement, citokine etc.). Odată cu stimularea răspunsului imun, helminții au un efect imunosupresor, care contribuie la supraviețuirea lor în organismul gazdei. Starea de imunodeficiență în helmintiază afectează negativ rezistența unei persoane la infecții bacteriene, virale și alte infecții, contribuie la cursul prelungit al acestora și la formarea transportului și reduce eficacitatea vaccinărilor preventive. Acest lucru este bine demonstrat de frecvența transportului tifoid, incidența tuberculozei și a altor boli infecțioase cronice în rândul populației cu focare hiperendemice de opistorhiază.
Cu formele clinice de helmintiază, primele semne apar în momente diferite după infecție: cu ascariază, manifestările fazei acute sunt observate deja în a 2-3-a zi, cu majoritatea celorlalte helmintiază - după 2-3 săptămâni, cu filarioză. perioadă de incubație dureaza 6-18 luni. În faza acută precoce a helmintiazelor, manifestările reacțiilor alergice sunt caracteristice: febră, erupții cutanate cu mâncărimi recurente, edem - de la local la generalizat, ganglioni limfatici umflați, mialgie, artralgie, în sângele periferic - leucocitoză cu hipereozinofilie. Pe acest fond, se dezvoltă adesea sindromul pulmonar (de la fenomene catarale minore la afecțiuni astmoide, pneumonie și pleurezie) și sindromul abdominal (dureri abdominale și tulburări dispeptice). Ficatul și splina cresc în dimensiune, posibil grade diferite severitatea simptomelor și sindroamelor centrale sistem nervos(CNS). La unele helmintiază se observă și semne specifice: cu trichineloză, în cazuri tipice, din primele zile ale bolii, se observă un complex de simptome, inclusiv febră, dureri musculare, umflarea pleoapelor și a feței; cu trematode hepatice (opistorhiază, fascioliază) - sindrom icteric, mărirea ficatului și a splinei. Chiar și printre helmintiazele cauzate de tipuri apropiate de agenți patogeni, există diferențe semnificative în severitatea cursului și natura manifestărilor perioadei acute: de exemplu, cu schistosomiaza japoneză, se dezvoltă mult mai des și este mai severă decât în cazul urogenital. și schistosomiaza intestinală.
Polimorfism mare manifestari clinice caracterizată prin strongiloidoză, în care, împreună cu o varietate de simptome alergice și dispeptice, pacienții prezintă adesea semne de disfuncție a tractului biliar. Cu trematode ale ficatului (opistorhiază, clonorhiază, fascioliază), se dezvoltă colecistocholangită cronică, hepatită, pancreatită, pot fi afectate diferite părți ale tractului gastrointestinal și se observă și tulburări neurologice. O trăsătură caracteristică Schistosomiaza genito-urinară este „hematuria terminală” (apariția unei picături de sânge la sfârșitul urinării) și tulburări disurice. La pacienții cu filarioză, este mai mult sau mai puțin pronunțată sindrom alergic, pentru filarioza limfatică (wuchererioză și brugioză), sunt caracteristice limfadenopatiile, limfangita și limfostaza, cu oncocercoză, alături de aceste simptome, se remarcă leziuni oculare grave.
Cestodozele intestinale (difilobotriaza, teniarinchiaza, teniaza, himenolepiaza) sunt in multe cazuri asimptomatice, manifestandu-se doar prin evacuarea segmentelor mature ale helmintului in timpul defecatiei sau independent (numai cu teniarinchiaza). Pacienții cu difilobotriază dezvoltă anemie din cauza deficitului de vitamina B12. Printre helmintiaza, un loc aparte il ocupa cestodozele larvare: echinococoza, alveococoza, cisticercoza. De asemenea, pot fi asimptomatici pentru o lungă perioadă de timp, chiar și în prezența unor chisturi destul de mari. În același timp, ruptura sau supurația chiar și a unei vezici mici echinococice duce la consecințe grave: dezvoltarea șoc anafilactic, peritonită purulentă, pleurezie etc. Ca urmare a compresiei de către o vezică în creștere sau alveococ, se dezvoltă vena cavă portală și inferioară. hipertensiune portală Cu toti manifestări caracteristice si consecintele.
Cisticercoza sistemului nervos central apare sub formă cerebrală, leziuni ale coloanei vertebrale cu o varietate de simptome corespunzătoare; localizarea helmintului în ventriculii creierului este însoțită de semne de hipertensiune intracraniană. Toxocaroza, înregistrată la noi în principal la copii, se exprimă clinic prin sindroame abdominale, pulmonare, tulburări neurologice, leziuni oculare, eozinofilie severă în sângele periferic. ...
În ultimii ani, în studiul mecanismelor de dezvoltare proces patologic mare succes a fost obținut cu helmintiaza.
CAPITOLUL III. PRINCIPIILE DE BAZĂ ALE DIAGNOSTICULUI HELMINTOZEI
Potrivit OMS, acuratețea diagnosticelor bazate pe analizele fecale nu depășește 5-10%.
Principala metodă de diagnosticare de laborator a acestor invazii este detectarea ouălor sau a larvelor de helminți.
Scaunele pentru analize trebuie livrate la laborator nu mai târziu de o zi după izolare, iar dacă se suspectează strongiloidoză, imediat.
În prezent predomină invaziile de intensitate scăzută, mai ales în cazul geohelmintiazelor, prin urmare, este necesar să se utilizeze metode de îmbogățire în timpul coproovoscopiei.
Cu toate acestea, șeful de diagnosticare chiar înainte examen de laborator trebuie furnizate informațiile obligatorii obținute în timpul studiului istoricului epidemiologic, geografic, social și al anamnezei bolii pacientului.
În ciuda, la prima vedere, a cursului aparent asimptomatic al multor invazii helmintico-protozoare, la majoritatea celor infestate cu un examen medical amănunțit, este posibil să dezvăluie simptome importante.
Prin urmare, rezultatele unui sondaj de pacient, cele mai complete date anamnestice, prezența chiar și a simptomelor ușoare în majoritatea cazurilor, 79-80% din probabilitate determină posibilitatea de a pune un diagnostic cu astfel de invazii precum enterobiaza, tenioza, difilobotriaza, adesea cu ascariaza si opistorhiaza. Și, cel mai important, aceste date determină indicații specifice pentru diagnosticul de laborator: alegerea corecta metode, pregătirea corespunzătoare a pacientului, prelevarea de probe pentru studiul materialului biologic necesar (lichide sau excremente).
Astăzi, metodele de diagnostic imunologic sunt foarte populare printre principalele metode de cercetare, precum și PCR - pentru a identifica ADN-ul agenților patogeni. Metode imunologice diagnosticul helmintiazelor se bazează pe detectarea anticorpilor specifici la anumiți helminți în serul sanguin. Pentru cercetarea imunologică se utilizează metoda de hemaglutinare indirectă, imunotest enzimatic, imunoelectroforeză, imunoabsorbție și alte metode serologice de analize de sânge.
Metodele de cercetare imunologică sunt utilizate pentru a diagnostica alveococoza, echinococoza, cisticercoza, ascariaza, schistosomiaza și alte helmintiază ca auxiliare în combinație cu metodele de diagnostic clinic și instrumental. Aceste metode de cercetare pot fi considerate eficiente doar atunci când helminții sunt localizați direct în țesuturile corpului uman.
Materialul biologic pentru cercetările privind prezența helminților, fragmentele acestora, larvele și ouăle sunt fecale, urină, conținut duodenal, bilă, spută, mucus rectal și perianal, sânge, țesut muscular. Având în vedere localizarea predominantă a majorității celor mai obișnuiți helminți în tract gastrointestinal, cel mai adesea obiectul cercetării îl constituie fecalele. Metodele macroscopice sunt utilizate pentru detectarea helminților izolați sau a fragmentelor acestora: capete, fragmente de strobila sau segmente individuale. Scopul examinări microscopice este detectarea ouălor și a larvelor. În prezent, frotiul gros Kato-Miura, metodele de sedimentare, metodele de flotație sunt recomandate pentru utilizare.
Preparate native și concentrate din materiile fecale: ouă de helminți-ascaris, vierme, vierme pitic, vierme lat, toxocara, domul felin, dorlodul siberian etc.
În fecalele native netratate sau lichide, la spălarea cu ochiul liber, pot fi găsite întregi sau fragmente de viermi rotunzi adulți, oxiuri, segmente de tenia bovine, tenia de porc, fragmente de strobila unei tenii late.
În probele de urină: ouă de schistozomi, Trichomonas, ouă de diactofim, capsule fiice de echinococ, cu echinococoză a rinichilor.
În răzuirea pielii din regiunea perianală: ouă de oxiuri, ouă (oncosfere) de tenide.
În spută: larve de strongilid, ascaris, toxocar, capsule fiice de echinococ cu echinococoză pulmonară, amibe cu amibiază pulmonară.
În probele de conținut duodenal (duoden): larve și chiar ouă de strongilide, trofozoide de lamblia, ouă de trematode (feline, chinezești, hepatice, lanceolate cu două frunze).
În mostre fluid cerebrospinal: tripanozomi, larve de nematod angiostrongilid.
În frotiurile din mucusul vaginal: trichomanade, trofozoiți de amibe intestinale, uneori ouă de oxiuri și chiar un adult.
În laptele matern cazuri speciale: Larve de strongylid.
Preparate de țesut nativ (material de aspirație din bronhii, măduvă osoasă, ganglioni limfatici, abcese, răzuire de la mucoase, biopsie), prin prelucrare cu metode speciale, se folosește în plus sau în loc de examene histologice pentru diagnosticul de tripanosomiază, pneumocistoză, trichineloză.
Fecalele pentru analiza fecalelor pentru detectarea helminților trebuie colectate corect, urmând recomandările:
Înainte de colectare, este interzis să faceți o clisma și să folosiți orice laxative;
În timpul mișcărilor intestinale, fecalele trebuie colectate pe folie de plastic sau într-o tavă. În același timp, urina, secrețiile, apa, articolele de igienă personală etc. nu trebuie lăsate să intre pe eșantion;
Dacă este imposibil să trimiteți analizele la laborator imediat, atunci materialul trebuie depozitat la o temperatură de 4-8 grade Celsius. În același timp, analizele ar trebui să ajungă la laborator în aceeași zi.
Dacă este posibil, mai multe probe de scaun ar trebui colectate de la diferite mișcări intestinale în cursul aceleiași zile.
CAPITOLUL IV. METODE DE CERCETARE MACROSCOPICĂ
Examinarea fecalelor cu lupa sau cu ochiul liber.
Progresul cercetării. Fecalele se amestecă cu apă până se obține o suspensie uniformă, după care, sub iluminare, se examinează cu atenție în proporții mici în cuve fotografice negre sau pe un fundal întunecat în vase Petri. Dacă sunt găsite particule suspecte sau când se știe că se suspectează prezența unor forme mici de helminți (de exemplu, oxiuri), toate particulele albe suspecte sunt transferate cu o pensetă sau ace de disecție pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerină, sodiu izotonic. soluție de clorură sau apă și examinată cu ochiul liber sub lupă sau la microscop. Dacă se găsesc formațiuni suspecte, ar trebui să le examinați sub o lupă, strângându-le în prealabil între două lame de sticlă.
Metoda de decontare. Progresul cercetării. Tot materialul investigat (în în acest caz fecale proaspete) se pun în borcane înalte, se diluează cu un jet puternic de apă și se lasă să se depună. Stratul tulbure de deasupra precipitatului se toarnă cu grijă într-un alt vas, precipitatul este din nou diluat și amestecul este apărat. Aceste operațiuni se efectuează până când apa de deasupra sedimentului devine transparentă. Apa este drenată, iar sedimentul este examinat în porții mici în vase Petri pe un fundal întunecat.
Evaluarea rezultatelor obtinute. Diagnostic diferentiatîntre helminți se bazează pe caracteristicile lor anatomice și morfologice. Determinarea apartenenței nematodelor, de regulă, este posibilă numai pentru indivizi întregi, mai rar - pentru fragmente suficient de mari care și-au păstrat caracteristicile de diagnosticare caracteristice. Cestozii sunt cel mai adesea diagnosticați prin scolexuri și segmente maturi sau hermafrodite.
Metode de cercetare microscopică
Scopul metodelor microscopice este de a identifica ouăle și larvele de helminți. Aceste metode sunt clasificate în calitative și cantitative.
CAPITOLUL V. METODE CALITATIVE DE CERCETARE
.1 Frotiu nativ
Metoda propusă de Davenom în 1853. - una dintre cele mai vechi și simple metode ale acestui grup, dar în literatura de specialitate există numeroase afirmații care indică eficiența sa scăzută în comparație cu alte metode.
METODE DE DETECAREA HELMINTILOR.
Ascariaza poate fi detectată prin metode: frotiu coproovoscopic pe Kato, metode unificate de îmbogățire a Fulleborn, Kalantaryan și alte tehnici de flotație.
5.2 Metoda Kato
Metoda Kato ( frotiu gros de celofan ) este un succesor al frotiului nativ. Aceasta metoda foarte la îndemână pentru examinări în masă, tampoanele pot fi pregătite la fața locului. Această metodă se bazează pe detectarea helminților într-un frotiu de fecale iluminat cu glicerină și colorat cu verde malachit. Pentru a implementa această metodă, aveți nevoie de un amestec de celofan de Kato, format din 6 mililitri dintr-o soluție de 3% de verdeață de malachit în apă, 500 de mililitri de glicerină, 500 de mililitri dintr-o soluție de 6% de fenol.
Progresul cercetării. Benzile de celofan mai mici decât o lamă de sticlă sunt tăiate din celofat hidrofil și pretratate prin scufundarea lor într-o soluție Kato: glicerina înmoaie celofanul, luminează preparatul și împiedică uscarea acestuia; fenolul este folosit pentru a proteja tehnicianul de bacterii patogene; verdele de malachit reduce oboseala ochilor. Benzile sunt poziționate în soluția Kato astfel încât să fie adiacente una cu cealaltă (3-5 ml la 100 de benzi). După 24 de ore, benzile sunt gata pentru acțiune ulterioară. Se pot pastra foarte mult timp in amestecul specificat, intr-un recipient ermetic.
Un miligram de fecale este plasat pe o lamă de sticlă într-un strat gros, acoperit cu o bandă de celofan și presat pe lamă cu un dop de cauciuc, astfel încât fecalele să nu fie stoarse de sub celofan.
Examinarea frotiului trebuie efectuată nu mai târziu de o oră după preparare. Pentru o perioadă scurtă de timp (în decurs de o oră) la temperatura camerei, frotiul devine mai transparent.
În absența reactanților pentru prepararea amestecului Kato, acesta poate fi înlocuit cu o soluție apoasă 50% de glicerină.
Identificarea ouălor se efectuează la microscop în întregul frotiu gros.
Valoarea diagnostica. Cea mai eficientă metodă a lui Kato pentru diagnosticul teniarhinchiazei. De asemenea, este posibil să se identifice ouă de viermi rotunzi, tricocemi, trematode și altele. Dar această metodă nu este eficientă în diagnosticul himenolepiazei, anchilostomiei și trichostrongiloidozei.
.3 Metode bazate pe principiul depunerii ouălor
În prezent, aceste metode nu sunt recomandate ca una unificată din cauza eficienței lor scăzute sau a greutății. Din acest grup de metode, se distinge o metodă de examinare a fecalelor pentru ouă de helminți folosind detergenți sintetici (detergenți sintetici de tip „Lotus”). Sub acțiunea agenților tensioactivi care compun detergenții, ouăle de helminți sunt eliberate de fecale și concentrate în sediment.
Ca reactiv se folosește o soluție de pulbere de spălat 1% (pulberea se usucă într-un cuptor la 100 ° C timp de 1-2 ore, 10 g de pulbere se dizolvă în 1 litru de apă de la robinet).
Există două tehnici:
metoda - Se toarna 20-30 ml dintr-o solutie de detergent intr-o sticla cu o capacitate de 30-50 ml si se pune acolo o portie de fecale de marimea unei alune. Este recomandabil să plasați fecale pentru cercetarea unei soluții de detergent nu mai târziu de 1 oră după defecare. Raportul dintre soluție și fecale este de aproximativ 1: 2. Fecalele trebuie să fie în soluție cel puțin o zi. În acest timp, pe fundul sticlei se formează un sediment cu două, trei straturi. Stratul inferior este format din particule grosiere grele, în stratul mijlociu sunt concentrate ouăle de helminți, pe care uneori se depun fulgi ușori. O pipetă Pasteur cu capătul bătut înalt este introdusă în stratul mijlociu al sedimentului, eventual cât mai jos posibil, dar fără a atinge fundul sticlei, se colectează una până la trei picături de lichid și se transferă pe o lamă de sticlă. Picătura este acoperită cu un capac de sticlă sau placă de celofan Kato și examinată la microscop. Două preparate trebuie pregătite pe un pahar.
tehnica - Fecalele se pun intr-o solutie de detergent intr-un raport de aproximativ 1:10 si se amesteca pana se formeaza o suspensie. După 30 de minute, conținutul tubului este agitat timp de 1-2 minute și centrifugat timp de 5 minute la 1000-1500 rpm. Două preparate sunt preparate din sediment pe o lamă de microscop.
Ambele preparate sunt examinate complet la microscop, luând în considerare toate ouăle de helminți găsite.
Valoare diagnostică: Această metodă poate detecta ouăle tuturor tipurilor de helminți.
Metoda lui Fulleborn. Această metodă se bazează pe apariția ouălor de helminți într-o soluție saturată de NaCl cu o densitate relativă ridicată. Pentru a face acest lucru, dizolvați 400 g de NaCl în 1 litru de apă în timp ce fierbeți. Densitatea relativă a soluției este 1, 18-1, 22. Soluția se păstrează într-o sticlă închisă.
Pentru analiză se pun 2-3 g de fecale într-un borcan cu un volum de 30-50 ml și, cu agitare, se toarnă aproape până la vârf cu un bețișor o soluție saturată de clorură de sodiu. Particulele mari plutitoare sunt îndepărtate rapid cu o bandă de hârtie.
După 45-60 de minute. se depune cu o buclă de sârmă, se îndepărtează pelicula de suprafață și se transferă pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție apoasă 50% de glicerină. Sunt pregătite mai multe preparate. În plus, se examinează 2-4 preparate din sediment, preluându-le cu o pipetă oculară pe 2 lame de sticlă.
Necesitatea studierii sedimentului se datorează faptului că ouăle de trematode și teniide plutesc foarte slab și pot rămâne în sediment. Ouăle de nematode (cu excepția ouălor de ascaris nefertilizate), tenia pitică și tenia plutesc bine.
Avantajele acestei metode includ costul și disponibilitatea redusă, dezavantajele - necesitatea de a vizualiza preparatele din pelicula de suprafață și sedimente, precum și durata depunerii.
.4 Metode de îmbogățire a ouălor plutitoare
Metodele acestui grup se bazează pe apariția ouălor de helminți într-o soluție, care, în comparație cu acestea, are o greutate specifică mare.
Metoda Kalantariană . Fecalele sunt suspendate într-o soluție de flotație cu o densitate relativă mai mare decât ouăle de helminți. În acest caz, ouăle de helminți plutesc la suprafață, filmul format este examinat la microscop.
Ca reactiv, se folosește o soluție de flotație conform Kalantaryan (1 kg de azotat de sodiu se dizolvă în 1 litru de apă, amestecul se fierbe până se formează o peliculă și se toarnă fără filtrare în sticle uscate; densitatea relativă a soluției este 1, 38) sau o soluție de flotație conform Brudastov - Krasnonos (900 g de azotat de sodiu și 400 g de azotat de potasiu sunt dizolvate când sunt încălzite în 1 litru de apă; densitatea relativă a soluției este de 1, 47-1, 48) .
Dezavantajul acestei metode este costul ridicat al nitratului de sodiu.
metoda lui Goryachev . Această metodă (metoda de sedimentare) este utilizată pentru a diagnostica opistorhia. Greutatea specifică a ouălor de opisthorchus este mare, astfel încât acestea nu plutesc în soluții saline. Într-un cilindru cu diametrul de 2-3 cm se toarnă 70-100 ml de soluție saturată de clorură de sodiu.
Separat, se amestecă bine 0,5 g de fecale în 20-25 ml de apă și se filtrează cu grijă printr-o pâlnie cu două straturi de tifon într-un cilindru într-o soluție salină, evitând amestecarea. Ouăle de Opisthorchus se așează încet pe fundul cilindrului.
După 2-3 ore, stratul superior cu fecale este aspirat cu o pipetă, iar soluția salină rămasă este lăsată să stea 12-20 ore sau centrifugata. Precipitatul este transferat cu o pipetă pe o lamă de sticlă, acoperită cu o sticlă de acoperire și microscopizat. Această metodă este aplicabilă pentru diagnosticul altor trematode.
.5 Metode de depistare a ouălor de helminți în fecale prin îmbogățire
În pahare, 5-10 g de fecale și 100-200 ml din una dintre soluțiile de flotație se amestecă bine cu o baghetă de sticlă. Imediat după încheierea amestecării, îndepărtați particulele mari care plutesc pe suprafață cu o baghetă de sticlă. Pe suprafața soluției saline se aplică o lamă de sticlă. Dacă există spațiu gol între amestec și lamă, adăugați soluție salină până când amestecul este în contact complet cu lama.
Se lasa sa se aseze 20-30 de minute, dupa care lama se indeparteaza, se pune la microscop cu filmul in sus si se vede intreaga pelicula aderata la suprafata lamei fara acoperire. Pentru a evita uscarea în timpul studiului, filmul poate fi amestecat cu două până la trei picături dintr-o soluție de glicerină 50%.
Se iau în considerare toate ouăle de helminți găsite în preparat.
Valoare diagnostică: metoda descrisă poate detecta infecția cu viermi rotunzi, viermi bici, anchilostoide, teniide, trematode, tenia și alte tipuri de helminți.
5.6 Metode de flotare
În prezent, pentru diagnosticul opistorhiei (clonorchiazei) sunt recomandate metodele Kato și Kalantaryan, deoarece sunt destul de eficiente și mai simple din punct de vedere tehnic.
5.7 Metoda benzii adezive
Metoda benzii adezive este utilizată pentru a diagnostica enterobiaza. O bucată de bandă de polietilenă transparentă lipicioasă de 4-5 cm lungime se aplică cu un strat lipici prin anus până la pliurile perianale, se îndepărtează imediat și se lipește pe o lamă de sticlă. Preparatele obtinute in acest mod sunt microscopate.
Avantajele acestei metode față de răzuirea din pliurile perianale sunt viteza și posibilitatea depozitării destul de lungi a preparatelor.
CAPITOLUL VI. METODE CANTITATIVE DE CERCETARE
Metodele de cercetare cantitativă sunt utilizate pentru a determina intensitatea invaziei, a evalua eficacitatea diferitelor medicamente antihelmintice, a determina calitatea deparazitării, a controla măsurile terapeutice și profilactice în masă în curs etc.
Determinarea cantitativă a ouălor de helminți este studiată prin două metode: metoda Stoll și metoda Krasilnikov și Volkova (1974).
.1 Metoda lui Stoll
Metoda tabelului este utilizată pentru ascariază. Echipament necesar: un microscop, un balon de sticlă cu marca de 56 și 60 de mililitri, un cilindru gradat, mărgele de sticlă, un dop de cauciuc pentru un balon, pipete gradate, lame de sticlă și soluție de hidroxid de sodiu 0,4%.
Progresul cercetării. O soluție decinormală de sodă caustică se toarnă într-un balon cu un cilindru de măsurare la nivelul de 56 de mililitri și se adaugă scaun până când nivelul lichidului crește la marcajul de 60 de mililitri (se obțin 4 mililitri de scaun). Acest amestec se agită cu mărgele de sticlă timp de un minut, după ce în prealabil a închis balonul cu un dop de cauciuc (puteți amesteca cu un bețișor). Imediat după agitare, se ridică cu o pipetă gradată 0,075 mililitri din amestec (conține 0,05 mililitri de fecale), se transferă pe o lamă de sticlă și se numără numărul de ouă din preparat la microscop. Pentru a determina numărul de ouă în 1 gram de fecale, numărul detectat este înmulțit cu 200.
Compararea numărului de ouă dintr-o probă, găsite la un pacient înainte și după tratament, ne permite să vorbim despre eficacitatea deparazitării.
Această metodă este destul de simplă și oferă rezultate comparabile pentru toate helmintiaza, ai căror agenți patogeni eliberează sistematic ouă în intestinele pacientului. Cu toate acestea, metoda are un dezavantaj semnificativ - o sensibilitate relativ scăzută, mai ales cu o intensitate scăzută a invaziei.
.2 Metoda Krasilnikov-Volkova
Când cercetați prin această metodă, luați cel puțin 1 gram de fecale și amestecați într-un balon de sticlă sau o eprubetă mare cu o soluție 1% de "Lotus" (puteți lua 1, 5% soluție de "Ekastra") într-un raport de 1: 10. Suspensia se agită bine până se formează o suspensie omogenă, imediat după aceea se ridică cu o pipetă gradată 0,1 mililitri de suspensie (aproximativ egală cu 0,01 grame de fecale) și se transferă pe o lamă de sticlă. Acest medicament se acoperă cu o sticlă de acoperire sau o placă de celofan (20 x 30 mm), ținută cel puțin o zi într-o soluție apoasă de glicerină 50%.
Numărul de ouă din întregul specimen este numărat la microscop. Pentru a calcula numărul de ouă dintr-un gram de fecale, numărul rezultat este înmulțit cu 100.
Această metodă este mai eficientă decât metoda Stoll. În primul rând, este mai sensibil și permite detectarea helminților când grad slab invazie. În al doilea rând, este foarte convenabil pentru examinări în masă, deoarece soluțiile de detergenți sunt conservanți pentru ouăle de helminți, permit cercetarea și nu materialul complet proaspăt. Cu toate acestea, o condiție prealabilă pentru aceasta este colectarea fecalelor direct în soluția de detergent.
Pentru cercetare cantitativă puteți aplica oricare dintre metodele calitative unificate descrise bazate pe principiul ouălor plutitoare. Dar în acest caz trebuie luată pentru analiză aceeași cantitate de fecale, același volum de soluție de flotație. Se poate face calculul gradului de invazie, cunoscând numărul de ouă în 1 gram de fecale.
CAPITOLUL VII. METODE DE DIAGNOSTIC ALE INVAZIILOR PROTOZOICE
.1 Frotiu nativ
Pe o lamă de sticlă se aplică 1-2 picături de soluție izotonică în două locuri cu un spațiu mic.
Cu un băț de lemn, o bucată mică este selectată dintr-o probă de fecale și transferată într-o picătură pe o lamă de sticlă, amestecând până se formează o masă omogenă. Apoi se pune deasupra un pahar de acoperire și se examinează la microscop.
Textul tipărit trebuie să fie vizibil printr-un preparat bine pregătit.
La examinarea fecalelor la pacienți, se găsesc forme luminale - chisturi. În perioada acută a bolii se găsesc forme vegetative mari de amibe - eritrofage (hematofage), care mor rapid în mediul extern. Datele sunt prezentate mai jos:
ouă Vezi invaziiChislo pe helminților 1g fekaliyChislo în kishechnikeStepen invaziiAskaridoz1-10001-10Slabaya10001-5000011-50Umerennaya50001-1900051-200TyazhelayaSvyshe 190000Svyshe 200OchentyazhelayaTrihotsefalez1-20001-25Ochenslabaya2001-750026-100Slabaya7501-37500101-500Umerennaya37501-75000501-1000TyazhelayaSvyshe 75000Svyshe 1000OchentyazhelayaAnkilostomoz1-25001-25Ochenslabaya2501-1000026-100Slabaya10000 -50000101-500 Moderat 50001-100000501-1000 Sever Peste 100000 Peste 1000 Foarte severă Necatoroză 1-6001-25 Foarte uşoară 601-210026-100 Slab1-6001-25 Foarte uşoară 601-210026-100 Slab
La cercetare serologică determină prezența anticorpilor la helminți (fiabilitatea - aproximativ 60%): cu suspiciune de echinococoză, cisticercoză, trichineloză, toxocaroză, reacții de hemaglutinare indirectă, aglutinare latex, legarea complementului, imunofluorescența sunt utilizate pe scară largă.
Nu în toate cazurile, metodele de determinare a anticorpilor specifici au suficientă specificitate și fiabilitate. Compoziția antigenică a helmintului depinde nu numai de specie, ci și de stadiu; Trecând printr-un ciclu complex de dezvoltare de la ou la adult, helminții își schimbă compoziția antigenică. În plus, anticorpii somatici sunt utilizați în reacțiile de imunodiagnostic, iar în organismul gazdei se produc anticorpi în principal pentru excrețiile și secrețiile helminților. Sensibilizarea nespecifică a organismului, comunitatea unor antigene de trematode, protozoare și oameni creează o proporție mare de reacții fals pozitive în titrurile sub cele de diagnosticare fiabilă.
Metoda de detectare a helminților folosind reacția în lanț a polimerazei este foarte specifică și foarte sensibilă, dar din cauza costului și complexității ridicate, nu poate fi examinată atunci când, de exemplu, trebuie examinat un grup de copii dintr-o instituție pentru copii.
Sistemul imunitar nu reacționează întotdeauna (recunoaște și distruge) ci prezența helminților în organism. Acest lucru se datorează faptului că unii helminți au o capsulă puternică și rezistentă chimic, sau sunt acoperiți cu o substanță care nu este recunoscută de sistemul imunitar; localizat în țesuturile care sunt cel mai protejate de reacțiile inflamatorii, de exemplu, în măduva spinării; multe specii din tractul digestiv secretă antienzime, ceea ce îi salvează de la moarte; au o speranță de viață lungă (de ani de zile și uneori până la moartea persoanei însuși); se hrănește cu glicoliza carbohidraților neți; au astfel de dispozitive precum ventuze, cârlige etc., care contribuie la fixarea în interiorul corpului; multe specii au reproducere sexuală, în care are loc un schimb de informații genetice, ceea ce duce la creșterea populației eterogene, la scăderea vulnerabilității; poseda nivel inalt fertilitate. Aceste metode de cercetare pot fi considerate eficiente doar atunci când helminții sunt localizați direct în țesuturile corpului uman. În acest caz, aplicați: test cutanat și intradermic, reacție de precipitare inelară, hemaglutinare indirectă și așa mai departe.
În sângele indivizilor invadați, există o creștere a titrurilor de anticorpi specifici, mai întâi clasele IgM și apoi IgG. Dacă aceasta nu este o reinvazie, atunci în corpul unui pacient cu manifestări alergice nu există încă helminți în stadiul reproductiv de dezvoltare, iar diagnosticul de helmintiază este imposibil. Perioada de coacere a helmintului poate fi destul de lungă și depinde de mulți factori. !!! În această etapă, diagnosticul bolii este posibil doar prin detectarea anticorpilor la antigenele helminților. Utilizarea unui test imunoabsorbant foarte sensibil legat de enzime în acest scop s-a dovedit a fi foarte eficientă.
Metodele imunologice sunt utilizate pentru depistarea schistosomiazei, alveococozei, cisticercozei, echinococozei, ascariazei și a altor tipuri de helminți.
Examinările concomitente pot confirma, de asemenea, helmintiaza. Helmintiaza se manifestă adesea prin analiza pentru disbioză și un test general de sânge (hemoglobină scăzută, VSH crescut, eozinofilie).
CONCLUZIE
În prezent, nu există o metodă simplă, accesibilă și de încredere pentru diagnosticarea helmintiazelor. Alegerea acestei metode depinde de tipul de helmint, precum și de stadiul bolii.
În concluzie, aș vrea să vă reamintesc că diagnosticul oricărui
Datorită situației actuale, prevenției ar trebui să i se acorde o mare importanță astăzi.
Prevenirea helmintiazelor include un set de măsuri pentru identificarea pacienților, tratamentul acestora, asigurarea condițiilor de viață, a vieții de zi cu zi și a producției, excluderea răspândirii acestor boli, protejarea și îmbunătățirea mediului de agenți patogeni. Volumul și natura măsurilor luate pentru a reduce incidența celei mai frecvente geohelmintiază în rândul populației Federației Ruse sunt determinate de nivelul de infestare, condiții climatice, particularitățile vieții și activității economice a populației și rezultatele monitorizării sanitare și helmintologice, întrucât geohelmintiaza este, în primul rând, o problemă sanitară. Prevenirea trichinelozei, teniarhinhiazei, teniarizei se bazează pe asigurarea siguranței produselor din carne pentru sănătatea umană, iar prevenirea opistorhiazelor, difilobotriazei și a altor helmintiaza transmise prin pești, crustacee, moluște și reptile este de a asigura siguranța garantată a peștilor și alte produse relevante. Prevenirea și controlul echinococozei și alveococozei se realizează prin măsuri care vizează prevenirea infectarii oamenilor, animalelor de fermă, câinilor; este nevoie de educație pentru sănătate, control medical periodic al contingentelor de risc (crescători de reni, crescători de blană, vânători). În prevenirea helmintiazelor transmise prin contact(enterobiaza), măsurile care vizează ruperea mecanismului de transmitere a agenților lor patogeni au o importanță primordială, în timp ce trebuie avut în vedere că aceste helmintiază afectează în principal copiii din grupuri organizate.
Este necesar să respectați măsurile personale de prevenire - spălați-vă mâinile înainte de a mânca, după folosirea toaletei, întoarcerea acasă de pe stradă, după contactul cu animalele. Fructele, legumele, fructele, ierburile trebuie clătite bine cu apă curentă și clătite apa fiarta... Nu încercați carnea crudă sau peștele tocat. Peștele, fructele de mare, carnea trebuie prăjite, înăbușite sau fierte bine. Trebuie să vă amintiți despre animalele dvs. de companie - nu le hrăniți pește crud, carne, organe interne animalelor, efectuează periodic tratamentul preventiv (deparazitare).
BIBLIOGRAFIE
1. M. V. Severin, D. N. Ponamarev, V. M. Borzunov, T. B. Tretyakova. Metode de diagnosticare a celor mai frecvente protozoare și helmintiază Ekaterinburg 1996. -71s.
A. M. Bronstein, N. A. Malyshev. „helmintiaza umană” Moscova 2010 -109s.
Trusa de instrumente Helmintiaza în practica unui medic pediatru Moscova 2008. -30 de ani.
Http: // doctorspb. ru / portal medical pentru medici și studenți.
Biologie editată de academicianul Academiei Ruse de Științe Medicale, profesorul V. N. Yarygin: Volumul 2. Grupul de ediții din Moscova „GEOTAR-Media”, 2012 - 553p.
Slyusarev A.A., Zhukova S.V. - K.: Vishashk. Editura Head, 1987-415s.
Http: // www. pasteur-nii. spb. ru / Helmintologie
12.http: // www. rusnauka. com / 17_APSN_2013 / Biologia / 10_140855. doc. htm
caracteristici clinice şi patogenetice şi de ultimă oră diagnostic, tratamentul helmintiazelor umane
Http: // fersirs. ucoz. ru / știri / klassifikacija_gelmintov_klassifikacija_gelmintozov_po_voz / 2013-12-19- Clasificarea helminților.
Îndrumare
Ai nevoie de ajutor pentru a explora un subiect?
Experții noștri vă vor consilia sau vă vor oferi servicii de îndrumare pe subiecte care vă interesează.
Trimite o cerere cu indicarea temei chiar acum pentru a afla despre posibilitatea de a obtine o consultatie.
Prelevarea probelor și conservarea
Pentru cercetare, fecalele sunt prelevate din diferite locuri în porții de 50 g și trimise la laborator într-un recipient curat de sticlă sau plastic, cu un capac etanș. Fecalele proaspete (nu mai mult de o zi) sunt examinate și, în unele cazuri (când se testează pentru strongiloidoză) imediat după defecare. Au fost propuși o serie de conservanți pentru fecale care conțin ouă de helminți: soluție de formol 4-10%, care trebuie încălzită la 50-60 ° pentru a preveni dezvoltarea ouălor de anchilostoma; un amestec de soluție apoasă 0,2% de azotat de sodiu (1900 ml), soluție Lugol (5 g iod, 10 g iodură de potasiu, 250 ml apă), formol (300 ml) și glicerină (25 ml), într-o tăietură de ouă de helminți se păstrează 6-8 luni; un amestec de glicerină (5 ml), formol (5 ml) și apă (100 ml); soluții de 1-1,5% detergenți „Lotos”, „Extra”, „Barf”, „Tide”, etc. (în raport de greutate dintre fecale și soluție de detergent 1: 5); un amestec de mertiolat 1: 1000 (200 ml), formol (25 ml), glicerină (5 ml), apă distilată (250 ml) cu adăugarea a 0,6 ml de soluție Lugol (la rata de 1 g de fecale la 10 ml de amestec).
Pentru diagnosticul helmintiazelor se folosesc metode macro și microhelmintoscopice pentru examinarea fecalelor.
Examinări macrogelmintoscopice
Metoda de decontare
Porțiunea zilnică de fecale se amestecă bine cu de 5-10 ori cantitatea de apă, se toarnă în cilindri de sticlă înalți (borcane, găleți) și se lasă până când particulele în suspensie s-au depus complet. Stratul tulbure superior este scurs cu grijă și se adaugă apă curată în partea de sus (se repetă de mai multe ori până când apa de deasupra precipitatului devine limpede). După ce ați scurs stratul superior, transferați sedimentul într-o cuvă sau o placă Petri și vizualizați-l (pe un fundal întunecat) sub o lupă sau cu ochiul liber.
Metoda de screening
Fecalele amestecate cu apă se așează pe sita superioară a dispozitivului constând dintr-un sistem de site cu orificii cu diametru descrescător, dispozitivul este conectat la rețeaua de alimentare cu apă și, după ce a deschis robinetul de apă, se spală, iar lichidul rezultat este deversat în canalizare. Helminții mari rămân pe sita superioară, în timp ce cei mai mici persistă pe cele inferioare. Sitele se răstoarnă și, după clătirea conținutului în cuve închise la culoare, se văd cu ochiul liber sau sub lupă.
Examene microhelmintoscopice
Realizat cu scopul detectării ouălor (metode helmintoscopice - culoare. Fig. 1) sau a larvelor de helmint (metode helmintolarvoscopice).
Metode helmintoscopice
Metode calitative fără îmbogățire
Frotiu nativ... O cantitate mică de fecale este frecată pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerină 50% sau apă fiartă. Particulele mari sunt îndepărtate cu grijă, amestecul este acoperit cu o sticlă de acoperire și examinat la microscop (se văd două frotiuri). Este mai convenabil și mai ușor să pregătiți frotiuri lungi între două lame de sticlă. Un frotiu nativ este utilizat numai pe lângă metodele de îmbogățire, deoarece nu este suficient de eficient, mai ales în cazul invaziilor slabe.
Frotiu gros de celofan de Kato(K. Kato, 1954) este o metodă de cercetare foarte eficientă. Bucățile de celofan hidrofil (4x2 cm) se înmoaie timp de 24 de ore într-un amestec de glicerină (50 ml), soluție de fenol 6% (500 ml) și soluție apoasă 3% (6 ml) de malachit verde (acesta din urmă este opțional). O.K. 100 mg de fecale se untează pe o lamă de sticlă și se acoperă cu o bucată de celofan umed, se presează cu un dop de cauciuc nr. 5. Medicamentul este examinat după 30-60 de minute, când se usucă ușor și devine limpede, deoarece rezultatul căruia ouăle de helminți pot fi detectate cu ușurință la o mărire mică la microscop.
Metode calitative de îmbogățire (metode de flotare și sedimentare)
Primele se bazează pe utilizarea soluțiilor saturate de diferite substanțe chimice. substanțe în care ouăle plutesc din cauza diferenței de greutate specifică.
Metoda Kofoid-Bărbier(Ch. A. Kofoid, M. A. Barber) în modificarea lui Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). O.K. 5 g de fecale într-un borcan înalt și îngust (volum de 100 ml) se amestecă cu un băț de lemn în 100 ml de soluție saturată de clorură de sodiu, se bate. greutate to-rogo 1,18 (400 g sare se dizolvă prin fierbere în 1 litru de apă). Particulele mari care plutesc pe suprafață sunt îndepărtate rapid cu un bețișor sau o bucată de hârtie. După decantarea amestecului timp de 45-90 de minute. o buclă de sârmă (diam. 0,8-1 cm) îndepărtați întreaga peliculă de suprafață, transferați-o pe o lamă de sticlă. Când se examinează ouăle de anchilostomid, amestecul este lăsat să stea timp de 10-15 minute. Puteți îndepărta filmul direct cu o lamă de sticlă, acoperiți borcanul până la ochi, astfel încât acesta să intre în contact cu lichidul (se adaugă o soluție saturată de sare pe marginile borcanului). După decantare, lama se îndepărtează, se răstoarnă rapid și se examinează la microscop (fără geam de acoperire) pelicula aderentă cu ouă de helminți. Această metodă este bună la detectarea ouălor tuturor nematodelor și teniei pitice. Ouă grele de trematode; Majoritatea cestodelor și a viermilor rotunzi nefertilați plutesc prost, așa că sedimentul este și el examinat. Pentru a face acest lucru, după îndepărtarea filmului, lichidul din borcan este scurs rapid și câteva picături sunt luate din sediment cu o buclă sau pipetă, transferate pe o lamă de sticlă, se adaugă o picătură de glicerină pentru clarificare și se examinează sub un microscop.
Metoda E. V. Kalantaryan(1938) Este o modificare mai eficientă a metodei Fulleborn. În ea, o soluție de clorură de sodiu este înlocuită cu o soluție saturată de azotat de sodiu, bate. a cărui greutate este de 1,39 (un volum de azotat de sodiu este dizolvat într-un volum egal de apă în timpul fierberii), pelicula se îndepărtează după 20-30 de minute.
Se mai folosesc metodele lui Faust (E.S. Faust, 1939), Brudastova et al. (1970) și alții.
Pentru depunerea ouălor de helminți folosiți substanțe chimice. substanțe care dizolvă grăsimile și proteinele în fecale.
Metoda lui Telemann (W. Telemann, 1908) modificată de Miyagawa (Y. Miyagawa, 1913)... O.K. 5 g de fecale se macină într-un mojar sau borcan, adăugând 5 ml de eter etilic și soluție de acid clorhidric 50%; amestecul este filtrat printr-o sită de sârmă sau păr într-o eprubetă și centrifugat. În eprubetă se formează 3 straturi: în partea de sus - eter cu grăsime dizolvată, dedesubt - acid clorhidric cu substanțe proteice dizolvate, în sediment - părți insolubile de fecale și ouă de helminți. Straturile superioare sunt turnate, iar la precipitat se adaugă apă și se centrifug. Câteva picături de sediment sunt transferate pe o lamă de sticlă și examinate la microscop. Această metodă poate detecta ouăle de toate tipurile de helminți, dar acestea sunt uneori deformate.
Metoda lui Ritchie (L. S. Kitchie, 1948). Formalina și eterul sunt folosite pentru a dizolva grăsimile și proteinele.
Se pot folosi diverși detergenți pentru a precipita ouăle de helminți. Metoda de filtrare în aparatele speciale Bell a devenit larg răspândită în străinătate, care este folosită pentru a studia nu numai fecalele, ci și urina, sângele etc.
Există o serie de tehnici care combină principiile de flotație și de depunere a ouălor. Printre acestea se numără metodele Lane (S. A. Lane), Rivas (D. Rivas), Gorkina, Darling (S. T. Darling). Una dintre astfel de metode de flotație și sedimentare, precum și metoda de descărcare secvențială, a fost propusă de N.V. Demidov (1963, 1965) pentru cercetarea fascioliazelor și dicroceliozei.
Metode cantitative
Metoda Stoll(N. R. Stoll, 1926). Într-o eprubetă sau un balon gradat (cu două semne: 56 și 60 ml), se toarnă o soluție decinormală de sodă caustică până la primul semn, se adaugă fecale până când nivelul lichidului ajunge la al doilea semn, se amestecă bine cu o baghetă de sticlă. iar, asezand 10 margele de sticla sau pietricele mici, inchideti cu un dop si agitati 1 min. Rapid, pentru ca suspensia să nu se depună, se colectează 0,075 ml din amestec (0,005 g fecale) cu o pipetă gradată, se transferă pe o lamă de sticlă cu o grilă aplicată pe ea, se acoperă cu un pahar de acoperire și se numără ouăle de helminți. în prepararea la microscop; înmulțind numărul rezultat cu 200, obțineți numărul de ouă în 1 g de fecale. Pentru un rezultat mai precis, ouăle sunt numărate în două sau mai multe preparate și se ia media. Metoda lui Stoll este insensibilă pentru invaziile ușoare. Prin urmare, se recomandă numărarea numărului de ouă din preparatele preparate prin diverse metode de flotare sau sedimentare, cu condiția să se utilizeze în mod constant o porție egală de fecale și vase de același volum. A fost folosit și un frotiu gros de Kato.
Metoda castorului(R.S. Beaver, 1950). Se prepară un frotiu standard, a cărui densitate este determinată cu ajutorul unui electrofotometru și apoi se numără toate ouăle de helminți în el.
Metode helmintolarvoscopice
metoda lui Bermann(G. Baermann, 1917). 5-10 g de fecale proaspăt excretate se pun pe o grătar metalic într-o pâlnie de sticlă, la capătul îngust al tăieturii se pune un tub de cauciuc cu o clemă. Pentru a evita contaminarea sedimentului cu particule de fecale, se recomandă plasarea hârtiei (pe plasă) sau adăugarea în fecale de cărbune animal sau făină de porumb. Pâlnia se umple cu apă caldă (t ° 45-50 °) până când intră în contact cu fecalele. Datorită naturii termotrope, larvele se deplasează activ în apă caldă și se acumulează treptat în partea inferioară a pâlniei, deasupra clemei. După 3-4 ore, clema este deschisă, lichidul este coborât în 1-2 eprubete, centrifugat timp de 2-3 minute, stratul superior este turnat, iar sedimentul este examinat pe o lamă de sticlă la microscop.
Metoda de identificare a schistozomilor de miracidia. Fecalele sunt spălate la întuneric la t ° 8-10 °, sedimentul este păstrat timp de 45 de minute. în lumină puternică la t ° 28 °, apoi turnat într-un balon întunecat cu un tub pe lateral. Miracidia sunt concentrate într-un tub lateral transparent de unde pot fi culese.
Pentru a identifica larvele de anchilostoma, sunt folosite și metodele lui Fülleborn și altele.
Metode pentru studiul altor secreții, precum și al țesuturilor și organelor
O.K. Se apara 100 ml din urina de examinat timp de 30 de minute. într-un cilindru și, după îndepărtarea stratului superior, se toarnă 10-15 ml de sediment într-o eprubetă, se centrifughează la 1500 rpm timp de 1-2 minute; sedimentul este examinat. Este recomandabil să colectați întreaga porțiune zilnică de urină.
Schistosomiaza genitală este diagnosticată prin identificarea miracidiei. O porțiune de urină proaspătă este centrifugată timp de 5 minute, sedimentul este turnat într-un balon vopsit în negru, un tub de sticlă transparent este lipit în partea de sus a tăieturii. Adăugați apă într-un raport de 1: 5, 1: 10 și puneți într-un termostat timp de 2 ore la t ° 25-30 °. Miracidiile care au ieșit din ouă sunt vizibile prin tubul transparent cu ochiul liber sub formă de puncte care se mișcă rapid. Cu hron, forma de schistosomiază la pacienți până la sfârșitul urinării, sângele este eliberat, dar ouăle sunt rareori găsite în urină, prin urmare, se recomandă să se recurgă la o biopsie a vezicii urinare.
Examinarea sputei. Sputa poate conține ouă de paragonimus, schistozomi, tomynx, larve de nematozi migratori, fragmente de vezică echinococică. Întreaga porțiune de spută livrată este examinată cu atenție cu ochiul liber sau sub lupă, toate resturile vizibile de țesut, acumulări de culoare ruginită etc. sunt selectate și examinate; apoi se examinează întreaga porțiune cu frotiuri. Sputa purulentă se toarnă cu o cantitate egală de soluție alcalină caustică 0,5%, se centrifughează și se examinează sedimentul.
Cu unele helmintiază, se observă modificări caracteristice în spută. Cu paragonimiaza, de exemplu, în spută, puteți găsi acumulări de ouă sub formă de bulgări gălbui, precum și o cantitate mare de mucus, leucocite, eritrocite, celule alveolare, spirale Kurshmann, fibre elastice, cristale Charcot-Leiden. De asemenea, sunt dezvăluite cristale caracteristice în formă de diamant cu capete ascuțite. Prezența unui număr mare de eozinofile face posibilă diferențierea paragonimiazei de tuberculoză.
Examinarea conținutului abceselor și punctatelor... V scurgeri purulente abcese, precum și în tumorile și chisturile îndepărtate în timpul intervenției chirurgicale, puteți găsi helminți, fragmentele lor, larve și ouă (echinococcus, alveococcus, sparganum, cysticercus, dirofilaria, vierme rotunzi, toxocara, paragonimus etc.). Tehnica de cercetare este obișnuită; în unele cazuri, se prepară secțiuni histologice din țesutul tumoral. Conținuturile purulente pot fi tratate cu metoda Telemann; lichidul transparent se examinează la fel ca și conținutul duodenal, adăugându-se eter sulfuric. Lichidul echinococic este centrifugat și sedimentul este examinat pentru prezența scolexurilor și a cârligelor; preparatele sunt colorate cu carbolfuchsin conform Ziehl-Nelsen.
Test de sange. Microfilariile și larvele de nematozi migratori se găsesc în sânge. Se ia o picătură de sânge dintr-un deget sau dintr-un lobul urechii și se examinează în stare proaspătă sau se fac preparate din acesta.
O picătură de sânge este plasată pe o lamă de sticlă acoperită cu un pătrat de vaselin și se presează ușor cu o lamelă. La microscop, microfilariile sunt vizibile în mișcare între celulele sanguine. Sângele poate fi plasat între două straturi de bandă adezivă de celuloză; microfilariile rămân mobile timp de 6 ore; într-un preparat complet uscat, se pot distinge la microscop timp de 30 de zile. Speciile de microfilarii pot fi identificate numai în frotiuri colorate sau picături groase. Preparatele preparate sunt uscate, hemolizate și colorate conform Romanovsky - Giemsa, Wright, Tsilu-Nelsen, Leishman, Papanikolau (vezi metoda de colorare a lui Wright, metoda Romanovsky-Giemsa, metoda Tsil-Nelsen). După ce au găsit microfilarii într-o picătură de sânge colorată conform Romanovsky-Giemsa, preparatul este colorat suplimentar cu hematoxilină Hansen; după 15-60 de minute. spalat timp de 2 minute. v apa curgatoare... Preparatul revopsit se diferențiază în soluție de acid clorhidric 0,2%; capacul microfilariilor devine violet pal, iar substanța nucleară a corpului devine violet închis.
În cazul invaziilor slabe, este necesar să se examineze 2-10 gheață de sânge cu un anticoagulant (de exemplu, cu o soluție de 5% citrat de sodiu) folosind una dintre următoarele metode.
Metoda lui Knott (J. Knott, 1939), modificată de Markell și Foge (EK Markell, M. Voge, 1965). 2 ml de sânge se agită într-un tub de centrifugă cu 10 cutii de acid acetic 1%, se centrifug timp de 2 minute. la 1500 rpm; stratul de suprafață este turnat, precipitatul este distribuit pe mai multe lame de sticlă și examinat la microscop. Preparatele pot fi colorate conform Romanovsky-Giemsa sau alte metode.
Metoda de filtrare a lui Bell (D. R. Bell, 1967). Într-un aparat format dintr-o pâlnie din oțel inoxidabil cu deschidere dreptunghiulară și filtre cu membrană de aceeași formă, de 19 x 42 mm, cu dimensiunea porilor de 0,8 până la 5 μm, sânge hemolizat într-un amestec de 1 ml de detergent Tipol și 9 ml soluție de fiziol (pentru a accelera filtrarea, aparatul este conectat la o pompă de vid). Filtrul se fixează în apă distilată clocotită și se colorează conform Romanovsky-Giemsa sau hematoxilina fierbinte Ehrlich. Filtrul colorat se usucă într-un desicator sau în alcool izopropilic (succesiv în 3 căni), se limpezește pe sticlă cu ulei de imersie și se examinează sub o sticlă acoperitoare. Preparatele colorate durează câteva săptămâni. Metoda lui Bell este cea mai eficientă pentru cuantificarea microfilariilor din sânge.
Se folosește și metoda cu polividonă Goldsmid.
Examinarea pielii.În piele, puteți găsi microfilarii de oncho-biserică și larve de helminți de animale, provocând o formă de piele larva migrans(cm.). Secțiunile de piele sau materialul obținut prin scarificare sunt prelevate de la coapsă, gambe, fese, sau la nivelul mușchiului deltoid. O bucată de epidermă în formă de con se ridică cu un ac entomologic și, după ce a fost tăiată cu un brici, se examinează pe un pahar într-o picătură de fiziol, o soluție. La rezultat negativ preparatul proaspăt este reexaminat după 10 minute; larvele sunt de obicei localizate la marginile preparatului. Materialul rezultat poate fi păstrat în 2 ml soluție de fiziol timp de 1-2 ore. și examinează sedimentul. Se recomandă să luați 5 secțiuni de piele de la pacient.
Este posibil să se pregătească preparate din sânge și fluid tisular eliberat după comprimarea puternică a secțiunilor. Picăturile sunt colorate în funcție de Mayer, Romanovsky-Giemsa sau hematoxilina Delafield.
Metodă standard pentru cuantificarea invaziei. Biopsie zona pielii la dia. Se cântăresc 3-5 mm și se cântăresc cel puțin 1-4 mg, se taie în bucăți mici și se numără larvele la microscop în fiziol. soluție pe o lamă de sticlă; 1-4 larve din câmpul vizual sunt desemnate prin semnul +, 5-9 larve prin semnul ++, 10-19 - prin semnul +++, 20 și mai multe - prin semnul + + + +. Este mai convenabil să se efectueze o contabilitate cantitativă a preparatelor colorate.
Cercetări pentru trichineloză, cisticercoză și schistosomiază
Identificarea larvelor de Trichinella
Metoda de compresie. O bucată de două capete sau mușchi de vițel(lângă tendon), luată chirurgical cu respectarea asepsiei, se împarte cu ace de disecție în fibre subțiri separate, strânse între două lame de sticlă într-o picătură de glicerină astfel încât preparatul să fie subțire și transparent. Larvele de Trichinella sunt clar vizibile la microscop cu un câmp vizual întunecat. Este eficient să studiezi mai multe bucăți de mușchi în compresoarele folosite la veterinar-san. practică, în special în trichineloscoape speciale.
Metoda de digestie a lui Bechman(G. W. Bachman, 1928). 1 și 60 ml de artificial suc gastric(0,5 g pepsină; 0,7 ml acid clorhidric concentrat; 100 ml apă) și se incubează timp de 18 ore. într-un termostat la t ° 37 °; stratul superior al lichidului se scurge, se adaugă apă caldă în sediment (t ° 37-45 °) și se toarnă în aparatul Bermann. O oră mai târziu, lichidul, osul este coborât într-o eprubetă, centrifugat și sedimentul este examinat. Dacă larvele sunt închise în capsule calcificate, acestea sunt pre-decalcificate într-o soluție de sare, azot sau acid sulfuric.
Biotest... Bucăți din mușchii studiati sunt hrăniți la șoareci sau șobolani albi. După 2-3 zile, Trichinella matură sexual poate fi găsită în conținutul duodenal, iar după 2-3 săptămâni - larve în mușchii diafragmei și ai limbii.
Secțiuni histologice. Bucățile de mușchi sunt fixate în fluidul lui Buen, Zenker sau alții; modul obișnuit secțiunile sunt preparate pe microtom și colorate cu hematoxilină Delafield.
Identificarea chisticerilor
O bucată de mușchi extirpat țesut conjunctiv etc se examinează cu ochiul liber, se izolează cu grijă cisticercul - o bulă translucidă albicioasă de 1-2 cm, zdrobită între două lame de sticlă într-o picătură de glicerină și examinată la microscop. Pentru a determina viabilitatea cisticercului izolat din țesuturi, acestea sunt păstrate într-o soluție de bilă 50% pentru fiziol. soluție într-un termostat la t ° 37 °; dupa 10-60 minute. capul unui cisticerc viabil se întoarce spre exterior. Cisticercul calcificat este decalcificat în prealabil cu o soluție de 4% de azot la - dumneavoastră în decurs de o oră.
Identificarea ouălor Schistosom
Cu hron, forme de schistosomiază, când formarea granuloamelor împiedică eliberarea ouălor din țesuturi în lumenul intestinal sau în tractului urinar, se folosește o biopsie a mucoasei rectale, to-Ruya se produce cu o lingură specială folosind un rectoscop, alegând o zonă cu o leziune vizibilă. Piesa de biopsie este zdrobită între două lame de sticlă și examinată la microscop. Dacă rezultatul este negativ, piesele sunt limpezite într-o soluție de 4% alcalii caustice și din acestea se prepară histol. felii. Se efectuează o biopsie a membranei mucoase a jejunului pe cale orală, iar materialul rezultat este examinat prin metoda compresiei sau histol și se pregătesc secțiuni din acesta. În unele cazuri de schistosomiază genito-urinară, diagnosticul poate fi pus doar pe baza unei biopsii endovezicale. În forma hepatolienală a schistosomiazei, se efectuează o biopsie prin puncție a ficatului; din materialul obținut, histol, se prepară secțiuni și se examinează la microscop fluorescent. Microscop cu luminescență cu câmp întunecat de utilizare și pentru examinarea țesutului hepatic pentru ouă de schistozomi. Dacă tractul genital feminin este afectat de schistozomi, secrețiile sunt colectate folosind un speculum vaginal sau bucăți din membrana mucoasă a colului uterin sunt prelevate cu o lingură ascuțită; materialul rezultat este examinat la microscop pe sticlă într-o picătură de soluție de fiziol.
Cercetări asupra enterobiazei și teniidozei
Razuire perianala (se recomanda administrarea seara, la 1 - 1,5 ore dupa ce pacientul s-a culcat, sau dimineata inainte de a folosi toaleta). Cu un chibrit tăiat oblic și înmuiat într-o picătură de lichid (fiziol, soluție, apă fiartă sau soluție 2% de bicarbonat de sodiu), aplicat pe o lamă de sticlă, fac cu grijă? răzuire de pe membrana mucoasă a anusului și pliuri în jurul acesteia (din centru spre exterior). Mucusul colectat la sfârșitul meciului este curățat cu marginea paharului într-o picătură de lichid pe o lamă de sticlă și acoperit cu aceeași sticlă de acoperire, examinat. La examinările în masă, când se prelevează răzuit de la copii sau din alte instituții, un chibrit uzat se pune într-o picătură de lichid pe o lamă de sticlă, după uscare, picăturile se acoperă cu o altă lamă și se livrează la laborator, împachetate în hârtie și asigurate. cu o bandă elastică. Pentru a studia utilizarea mucusului rectal dispozitiv special- Sonda lui Shahmatov sau Ziemann, cu ajutorul căreia se prelevează mucusul din rect și se examinează frotiurile la microscop.
Metoda tamponului de bumbac. Pacienților li se administrează o eprubetă cu un tampon de vată pe un pahar sau baston de lemn; dimineața, pacientul șterge pliurile perianale cu un tampon umezit cu apă fiartă și îl pune într-o eprubetă cu o cantitate mică de apă. În laborator, tampoanele sunt clătite în aceeași eprubetă cu o nouă porție de apă și sedimentul este examinat după centrifugare.
Metoda celofanului lui Hall (M.S. Hall, 1937). O bucată pătrată de celofan este întărită cu o bandă elastică pe un bețișor de sticlă. Razuirea se face cu celofan uscat si se pune intr-o eprubeta. În laborator, celofanul este ușor deplasat de pe băț și, tăindu-i vârful cu foarfecele, îl îndreptați pe o lamă; umezit cu o soluție decinormală de hidroxid de sodiu, acoperiți cu o sticlă de acoperire și examinați la microscop.
Metoda benzii de celuloză Graham (C. F. Graham, 1941). O bandă de bandă de celuloză este presată cu partea adezivă pe pliurile perianale ale subiectului, apoi aceeași parte pe lamă și examinată fără lamelă; puteți adăuga o picătură de toluen. VV Kaledin (1972) a sugerat în aceste scopuri folosirea de discuri de celuloid tăiate din peliculă cu raze X spălate și umezite cu glicerină; discurile se examinează pe o lamă de sticlă într-o picătură de adeziv silicat. Metoda benzii de celuloză poate fi folosită și pentru a examina lenjeria pentru copii.
Razuire subunguala. Marginile unghiei, patul unghiei, spațiile subunguale se umezesc cu o soluție de 0,5-1% de alcali caustici și se șterg cu tampoane umede de bumbac. Tampoanele se pun în tuburi de centrifugare cu aceeași soluție, se centrifughează și se examinează sedimentul.
Metode de studiu a obiectelor de mediu pentru ouă și larve de helminți (studii sanitare și helmintologice)
Se efectuează cercetări pentru a determina gradul de poluare cu ouă și larve de helminți a obiectelor din mediu. Datele obținute sunt folosite pentru aprecierea unei demnități. starea instituțiilor și întreprinderilor și eficacitatea măsurilor luate pentru combaterea helmintiazelor.
Când se studiază gradul de poluare a diferitelor obiecte ale mediului cu ouă și larve de helminți și se evaluează rolul acestora în epidemiologia helmintiazelor, este important să se stabilească nu numai numărul de ouă găsite, ci și viabilitatea și invazivitatea acestora, care determină : a) în aparenţă, la microscop; b) colorarea cu diverși coloranți, inclusiv luminiscenți; de regulă, ouăle și larvele vii nu se pătează; c) cultivare în condiţii optime până la stadiul invaziv; d) contaminarea animalelor de laborator (biotest).
Studii de apă și canalizare. Pentru un studiu, se folosesc 10-25 litri de apă (râuri, mări, iazuri, piscine, apeducte) și 1-2-5 litri de ape uzate.
Metoda 3.G. Vasilkova (1941). Apa sau canalizarea este filtrată prin ultrafiltre cu membrană într-un aparat Goldmann, constând dintr-o pâlnie din sticlă sau metal cu filtre, conectată cu un inel de duză cu un balon Bunsen. Pentru a accelera procesul de filtrare, la aparat este conectată o pompă de vid. După filtrare, filtrele cu membrană sunt privite la microscop, clarificate cu soluție de glicerină 50%; sedimentul acumulat este curățat și privit separat sub formă de frotiuri. Sunt utilizate și dispozitive de filtrare de alte modele.
Metoda G. Sh. Gudzhabidze și G. A. Yudin (1963) pentru studiul fluidului de canalizare. 1 litru de lichid se depune timp de 2 ore într-un cilindru Lysenko; sedimentul rezultat (5-9 ml) se tratează ca în studiul solului (vezi mai jos).
Metoda N. A. Romanenko (1967). La 1 litru de lichid rezidual plasat într-un cilindru de sticlă cu o capacitate de 1200-1500 ml, se adaugă 0,4-0,6 g sulfat de aluminiu sau clorură ferică (în scopul coagulării, accelerarea procesului de sedimentare a particulelor în suspensie) și după 40 de ani. minute. amestecul este centrifugat timp de 3 minute. la 1000 rpm; se toarnă stratul superior și, pentru a dizolva fulgii, se adaugă 1-2 ml de soluție 3% de acid clorhidric, apoi 150 ml de soluție saturată de azotat de sodiu. Sedimentul este examinat ca solul.
Cercetarea solului
Contaminarea solului cu ouă de helminți este determinată pentru a identifica focarele de helmintiază și pentru a evalua eficacitatea lucrărilor de îmbunătățire a acestora.
Metoda 3.G.Vasilkova și V.A.Gefter (1948). 12,5 g de pământ se amestecă în tuburi de oțel inoxidabil sau alamă (100 ml) cu 20 ml de soluție alcalină caustică 5%, adăugând 10 mărgele de sticlă sau pietricele mici. Tuburile se închid cu dopuri de cauciuc și se agită timp de 20 de minute. într-un agitator sau manual. După îndepărtarea dopurilor, tuburile sunt centrifugate timp de 3-5 minute, lichidul de suprafață este scurs, se adaugă 60-80 ml dintr-o soluție saturată de azotat de sodiu în sediment și, după amestecarea temeinică, se centrifug din nou timp de 3-5 minute. . În această suprafață, filmul cu ouă plutitoare este îndepărtat prin atingerea suprafeței amestecului cu o buclă complexă (5-6 bucle conectate pe o tijă comună) și transferat într-un pahar cu apă; agitat cu aceeași soluție, centrifugat; intreaga procedura se repeta de cel putin 3 ori. Conținutul sticlei, unde este transferat filmul, este diluat cu apă și filtrat prin filtre cu membrană, care sunt examinate la microscop într-o picătură de glicerină.
Metoda 3.G.Vasilkova și V.A.Gefter modificat de A.A. și examinați filtrele.
N.A. Romanenko (1968) recomandă studierea probelor de sol și sedimente pentru ouăle de helminți Ape uzate cu ajutorul aparatului propus de G. Sh. Gudzhabidze. 50 g de pământ se amestecă bine timp de 1 min. in 150 ml apa in tuburi de centrifuga (cu o capacitate de 250 ml) cu lame speciale, care sunt actionate de un motor electric. Amestecul este centrifugat timp de 3 minute. la 1000 rpm, apa se scurge și, adăugând 150 ml de soluție saturată de azotat de sodiu, se agită și se centrifuge din nou timp de 3 minute. Se pun eprubete cu probe, se adaugă o soluție de azotat de sodiu până se formează un menisc convex, se acoperă cu lame de sticlă (10 x 6 cm) și se apără timp de 10-15 minute, apoi se scot ochelarii și se examinează; procedura se repetă de cel puțin 4 ori.
Cercetări asupra larvelor de helminți după metoda lui Bermann (1917). 200-400 g de pământ se așează într-o bucată de tifon pe o plasă metalică (cu diametrul de găuri de 1-2 mm), se pune pe o parte largă a unei pâlnii de sticlă, fixată într-un trepied. Un tub de cauciuc cu o clemă este întins peste capătul îngust al pâlniei. Pâlnia este umplută cu apă caldă (t ° 50 °), astfel încât Partea de jos ochiuri cu solul în contact cu apa. Datorită naturii termotrope, larvele se târăsc activ în apă caldă și, stabilindu-se, se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc deasupra clemei. După 3-4 ore, 50 ml din conținut sunt eliberați din pâlnie într-o eprubetă, centrifugat și sedimentul este examinat.
Cercetarea legumelor, fructelor și fructelor de pădure
Ei studiază în principal legumele, fructele de pădure și fructele care sunt consumate fără tratament termic. Metoda 3.G. Vasilkova (1948). 5-10 bucăți de legume sau fructe (aprox. 0,5 kg) sau 100-200 g de verdeață (salată verde, ceapă verde) se toarnă câteva ore cu apă în borcane de sticlă cu gât larg, cu dopuri măcinate și se agită timp de 10-20 de minute. . într-un agitator sau manual. Apa se scurge, obiectele testate se clătesc cu apă curată, iar toată apa de spălare este filtrată în aparatul Goldman; filtrele se examinează prin limpezire cu glicerină. Puteți nuanța filtrele cu soluție de Lugol 25% în glicerină; ouăle helminților devin maro și sunt ușor de recunoscut printre boabele de amidon de culoare albastră. Un sediment mare este tratat ca solul.
Investigarea spălărilor de la obiecte de uz casnic și de la mâini. O perie de lipici (sau un tampon de vată învelit cu o bucată de pânză de nailon) înmuiată într-o soluție 2% de bicarbonat de sodiu este purtată în mod repetat peste obiectul examinat sau pe mâini, după care se clătește în aceeași soluție, se toarnă într-un eprubetă. În laborator, periile și tampoanele sunt clătite cu apă curată; toată apa de spălare este centrifugă și sedimentul este examinat.
Metoda V.A.Gefter (1960). Este mai eficient să colectați praful din inventarul moale folosind un aspirator conectat la o pâlnie, marginea este formată din 2 părți detașabile: pe suprafața părții inferioare este plasat un filtru cu membrană acoperit cu o plasă de metal sau plastic și întărit prin punerea pe partea superioară a pâlniei. Pâlnia asamblată este conectată la furtunul aspiratorului cu un tub de cauciuc. Praful de pe obiect este colectat în 3 minute, după care filtrul este îndepărtat și înlocuit cu unul nou. În laborator, filtrele sunt privite la microscop, clarificate cu glicerină. Dacă stratul de praf de pe filtru este mare, acesta este răzuit și văzut ca pete sau tratat ca pământ.
Metode de diagnostic imunologic
Posibilitatea utilizării imunolului. metodele de diagnosticare a helmintiazelor se datorează capacității helminților de a produce antigeni activi care afectează celulele imune ale gazdei și stimulează producția de anticorpi. Cele mai eficiente metode de imunodiagnostic pentru helmintiaza intestinală, atunci când secrețiile și excrețiile helminților, care au activitate antigenică, intră direct în sângele gazdei. Immunol, reacțiile sunt utilizate pentru a diagnostica ascariaza, trichineloza, filariaza, schistosomiaza, echinococoza și alveococoza, cisticercoza, paragonimiaza, complexul simptomatic larva migrans- (toxocariaza, angiostrongiloza) și altele. ) și intradermic teste alergice... Antigenele sunt preparate din larve și helminți maturi sexual folosind extracte de sare din omogenate din țesuturi proaspăt congelate sau liofilizate, precum și diverse fluide biologic active (fluid din bule de echinococ, fluid cavitar de ascaris etc.). Datorită faptului că helminții au o structură antigenică foarte complexă și mozaicul lor antigenic conține componente și determinanți individuali care reacţionează încrucişat cu alte tipuri de helminţi, bacterii, antigeni gazdă, se dezvoltă metode de purificare a acestora de componente nespecifice. Fracționarea se realizează prin diferite metode: filtrare pe gel în coloane cu Sephadex, cromatografie cu schimb ionic pe DEAE-Sephadex, tratament cu acizi etc. Antigenele fracționate au de obicei o specificitate mai mare decât extractele întregi, activitatea lor fiind aproximativ aceeași. Metodele de imunodiagnostic sunt din ce în ce mai utilizate. Reacțiile sunt utilizate nu numai pentru depistarea cea mai completă și precoce a pacienților, ci și pentru studiul focarelor și studiul epidemiologiei helmintiazelor.
Reacții serologice. Reacția de microprecipitare asupra larvelor vii este utilizată pentru a diagnostica nematozi - faza preimaginală a ascariazei, anchilostomiazei, trichinelozei. Reacția devine pozitivă la 5-10 zile după infecție (ascariază, infecții cu anchilostoma) și durează 90-100 de zile. Larvele vii de nematozi izolate din țesuturile animalelor de laborator infectate experimental servesc drept antigen. Larvele izolate sunt spălate temeinic din proteinele gazdă cu fiziol steril, soluție și apă distilată și câte 10-15 specimene fiecare. plasat cu o pipetă Pasteur pe o lamă de sticlă sterilă cu un godeu. Se aplică 2-3 picături de ser de testare, se acoperă cu o sticlă de acoperire sterilă, se închide într-o cameră umedă (vașă Petri, căptușită cu hârtie de filtru umezită) și se incubează timp de 24-48 de ore. într-un termostat la t ° 37 °. La reacție pozitivă sub o mărire redusă a microscopului, în jurul gurii și anusului larvelor sunt vizibile mase alb-cenușii, ușor opalescente de precipitate de formă sferică sau în zig-zag. Eficiența reacției ajunge la 85-95%.
Reacția de precipitare a inelului a fost dezvoltată de V.P. Pashuk (1957) pentru diagnosticarea trichinelozei. Reacția devine pozitivă la 2-3 săptămâni de boală. Eficiența sa ajunge la 80-90%. Antigenul este un extract de pulbere din larve uscate la t°35°, izolat din mușchii animalelor infectate. În eprubete dia. Se toarnă 0,5 ml în 0,1 ml din fiecare diluție de antigen și se așează cu grijă pe ea (sau se coboară până la fund) o cantitate egală de ser de testare, astfel încât lichidele să nu se amestece. Tuburile se păstrează timp de 30 de minute. într-un termostat la t ° 37 °, apoi 30-60 min. la temperatura camerei. Cu o reacție pozitivă, la interfața dintre antigen și ser apare un inel albicios, delicat, care se dezintegrează ușor atunci când este agitat.
Reacția de precipitare în gel conform Ouchterlony (O. Ouchterlony, 1949) în micromodificarea lui A.I. Gusev și V.S. Tsvetkov a fost propusă de I.A.Ginovker, E.A. fazele opistorhiei. Potrivit datelor preliminare, eficiența sa este de 87%. Antigenul este un extract dintr-un omogenat de opistorhis matur sexual proaspăt congelat izolat din ficatul pisicilor.
Se dezvoltă reacția de hemaglutinare indirectă (vezi) cu un diagnostic - o suspensie de eritrocite de berbec formalinizate și bronzate sensibilizate cu lichid echinococic.
LN Stepankovskaya (1972) pentru diagnosticul echinococozei și alveococozei.
RNGA cu diagnosticum din eritrocite de berbec formalizate sensibilizate cu un extract dintr-un omogenat de cisticerc de tenia proaspăt congelată de porc este propus de LM Konovalova (1973) pentru diagnosticul cisticercozei cerebrale; este eficient 85% din timp.
RNGA cu ascaris diagnosticum este propusă pentru diagnosticul fazei preimaginale a ascariazei.
Reacția de legare a complementului (vezi) este stabilită conform tehnicii obișnuite și este utilizată pentru a diagnostica trichineloza și cisticercoza.
Metoda anticorpilor luminescenți (metoda indirectă). Această metodă cu un omogenat uscat degresat de cisticerc de tenia de porc ca antigen fixat pe o lamă a fost dezvoltată de JI. M. Konovalova (1973) pentru diagnosticul cisticercozei umane. Aceeași reacție cu histol, felii de larve de Trichinella ca antigen este dezvoltată pentru diagnosticarea trichinelozei.
E. S. Leikina, V. A. Gefter.
