Detectarea anticorpilor antivirali (at) în serul sanguin. rtga. rsk. recif. metode de imunosorbție pentru detectarea anticorpilor antivirali. Serologie Esența metodei serologice de cercetare

Bolile infecțioase inițiază producerea anticorpilor corespunzători în sângele unei persoane bolnave. Așa funcționează apărarea imună a organismului.

Determinarea prezenței anticorpilor la un anumit virus sau bacterie face posibilă aflarea apariției bolii înainte de apariția principalelor simptome. Astăzi serologic și oferă cea mai completă imagine. Prin urmare, vom vorbi în acest articol despre analiza pentru cercetarea serologică.

Ce este testarea serologică

Metodele de studiere a materialelor biologice ale oamenilor și animalelor care sunt capabile să detecteze anticorpi sau antigeni în ele pe care organismul le produce sub forma unei reacții de protecție în lupta împotriva infecțiilor se numesc studii serologice. Astfel de metode sunt utilizate pentru a determina agentul cauzal al infecției, precum și în scopul:

• determinarea grupei sanguine,
• studierea imunității prin determinarea nivelului legăturii sale umorale,
• determinarea antigenelor tisulare.

Cui i se atribuie?

De ce o faci

Metoda este apreciată de experți ca o modalitate de a pune un diagnostic de înaltă calitate al bolii.

• Dacă pacientul se află în stadiul bolii, se recomandă efectuarea unor studii repetate la intervale de aproximativ o săptămână pentru a monitoriza eficacitatea tratamentului utilizat.
• Testele serologice sunt adesea folosite pentru a determina care agent patogen a cauzat boala după ce pacientul a suferit-o.

Tipuri de procedură

Metodele de cercetare serologică se bazează pe diverse reacții:

• Reacție de neutralizare se bazează pe proprietatea anticorpilor serului imunitar de a acționa ca un agent neutralizant împotriva toxinelor sau microorganismelor în sine, prevenind efectul lor dăunător.
• Reacție de aglutinare, care, la rândul său, este împărțit în următoarele subspecii:
  • reacții directe - sunt utilizate în studiul serului sanguin pentru prezența anticorpilor. Microbii uciși sunt aruncați în compoziția studiată și, dacă un precipitat sub formă de fulgi cade, înseamnă că reacția la acest tip de microbi este pozitivă;
  • reacția hemaglutinării indirecte se realizează prin introducerea eritrocitelor în serul sanguin, pe care se adsorb antigenele; acești agenți interacționează cu același tip de antigeni prezenți în serul sanguin, rezultând un precipitat cu feston.
• Complement de reacție folosit pentru depistarea bolilor infecțioase. Metoda se realizează prin activarea complementului și observarea reacțiilor care au loc în mediul studiat.
• Reacția precipitațiilor efectuată prin stratificarea unei soluții de antigen pe un mediu lichid - ser imunitar. Pentru această metodă se utilizează antigen solubil. Reacția este că complexul antigen-anticorp suferă precipitații; precipitatul rezultat se numește precipitat.
• Reacția utilizând antigeni și anticorpi marcați bazat pe faptul că microbii sau antigenele tisulare, tratate într-un anumit mod, capătă capacitatea de a emite lumină sub influența razelor ultraviolete. Metoda este utilizată nu numai pentru diagnosticarea antigenelor, ci și pentru determinarea substanțelor medicamentoase, a enzimelor, a hormonilor.

Contraindicații pentru

Datorită faptului că metoda constă în studierea materialului biologic al pacientului, nu poate afecta negativ o persoană. Prin urmare, nu există contraindicații pentru utilizare.

Cercetarea este complet sigură.

Modul în care se efectuează un studiu serologic este descris mai jos.

Indicații pentru

Metoda este utilizată pentru a determina agentul cauzal al infecției, inclusiv în următoarele boli:

• Infecția cu HIV,
• toxoplasmoza,
• boli infecțioase cu transmitere sexuală;
• difterie,
• disponibilitate;
• bruceloză,
• infecții stafilococice,
• hepatită.

De asemenea, metoda este utilizată pentru a detecta astfel de boli:

• opistorhiază,
• amebiază,
• cisticercoză,
• giardioză,
• pneumonie.

Pregătirea procedurii

Nu sunt necesare preparate speciale pentru procedură. Trebuie respectată o condiție: prelevarea de sânge se face pe stomacul gol.

Algoritmul pentru prelevarea (preluarea) sângelui (materialului) pentru cercetări serologice este descris mai jos.

Analiză

Prelevarea de sânge se face din vena cubitală. Pentru ca studiul să funcționeze, sângele este extras nu cu o seringă, ci prin gravitație. Un ac este introdus într-o venă fără seringă și se colectează până la 5 ml de sânge într-o eprubetă.

În timpul procedurii, pacientul prezintă un disconfort ușor în timpul introducerii acului în venă. Acțiunile ulterioare nu sunt deloc îngrijorătoare.

Interpretarea rezultatelor unui test serologic de sânge este descrisă mai jos.

Decodarea rezultatelor

Rezultatele obținute trebuie luate în considerare împreună cu tabloul clinic al bolii, verificând diagnosticul prezumtiv folosind mai multe teste. Acest lucru se datorează faptului că studiile sunt de natură specifică și uneori nu au sensibilitate absolută la bolile infecțioase.

Prețul pentru un test serologic cuprinzător de sânge este descris mai jos.

Costul mediu al procedurii

Costul procedurii va depinde de tipul de cercetare. Acesta constă în costul efectuării unei analize și costul anticorpilor pentru un agent patogen specific. Costul mediu al procedurii este în limita a 700 de ruble.

Reacțiile serologice sunt descrise în videoclipul de mai jos:

Reacția de imobilizare a treponemului palid (RIBT). O condiție prealabilă este excluderea, înainte de examinare, a administrării de antibiotice de către pacient, care au un efect toxic asupra treponemelor palide, provocând imobilizarea lor nespecifică.

Rezultatele pozitive ale RIBT sunt detectate aproximativ de la jumătatea perioadei secundare proaspete de sifilis și pot persista mult timp după tratament. Dacă este necesar, metoda este utilizată pentru detectarea anticorpilor în LCR; acest studiu se distinge prin specificitate ridicată, dar sensibilitate scăzută (aproximativ 40%).

RIBT nu este foarte potrivit pentru diagnosticarea formelor timpurii de sifilis din cauza apariției târzii (nu mai devreme de 8-9 săptămâni de la momentul infecției) a imobilizinelor AT; metoda poate da rezultate fals pozitive, în special la pacienții cu patologie autoimună, boli maligne, diabet. În plus, RIBT este o analiză destul de complexă, laborioasă și costisitoare, care necesită personal înalt calificat și disponibilitatea unui vivariu și, prin urmare, în ultimii ani a fost utilizată doar în anumite laboratoare. În diagnosticare, RIBT este utilizat ca reacție de arbitru în caz de discrepanță între rezultatele altor studii serologice, pentru a diferenția rezultatele fals pozitive și atunci când se stabilește un diagnostic al formelor tardive de sifilis.

Reacția complementului de legare cu antigenul treponemal (CSC cu TA)Sensibilitatea metodei este de aproximativ 80%, specificitatea este de 98%. Metoda a făcut parte dintr-un set de teste serologice standard pentru sifilis, reglementate prin ordinul Ministerului Sănătății al URSS nr. 1161 din 09/02/1985 „Cu privire la îmbunătățirea diagnosticului serologic al sifilisului”. În prezent, utilizarea acestei reacții, la fel ca CSC-urile cu antigen cardiolipin, este limitată la laboratoare individuale.

Reacție de imunofluorescență (RIF)... Pentru diagnosticarea sifilisului, se utilizează mai multe modificări ale RIF: RIF-c - pentru a detecta AT în LCR, RIF-200 (serul testat este diluat de 200 de ori înainte de reacție); RIF-abs (RIF cu absorbție), IgM-RIF-abs (pentru determinarea AT IgM). În ceea ce privește sensibilitatea și specificitatea, RIF-abs nu este inferior RIBT, dar implementarea acestei metode este mult mai ușoară. Rezultatele RIF-abs devin pozitive din a 3-a săptămână după infecție (înainte de apariția unui șanc greu sau simultan cu acesta), aceasta este o metodă de diagnostic precoce al sifilisului. Există rezultate pozitive frecvente ale studiului la mulți ani după tratamentul complet al sifilisului precoce și la pacienții cu sifilis târziu - de zeci de ani.

Indicații pentru efectuarea RIF-abs:

• rezultatele NTT pozitive la femeile gravide în absența datelor clinice și anamnestice care indică sifilisul;
• examinarea persoanelor cu diverse boli somatice și infecțioase, în care sunt notate rezultate pozitive ale NTT;
• examinarea persoanelor cu manifestări clinice caracteristice sifilisului, dar cu rezultate NTT negative;
• diagnosticarea precoce a sifilisului;
• în unele cazuri - ca criteriu pentru succesul tratamentului antisifilitic: tranziția RIF-abs pozitiv la negativ după tratament este un criteriu 100% pentru vindecarea sifilisului.

IgM - RIF - abs sunt folosiți pentru detectarea separată a anticorpilor din clasele Ig, ceea ce prezintă un interes deosebit în diagnosticul sifilisului congenital, când anticorpii la treponema, sintetizați în corpul copilului, sunt reprezentați de IgM, iar anticorpii IgG sunt origine maternă. Indicațiile pentru acest studiu sunt: \u200b\u200bdiagnosticarea sifilisului congenital; evaluarea rezultatelor tratamentului sifilisului precoce.

RIF are o sensibilitate ridicată (98,5%) și specificitate (99,6%) pentru aproape toate formele de sifilis. Dezavantajele RIF sunt: \u200b\u200bimposibilitatea automatizării studiului și înregistrarea rezultatelor; dificultăți în prepararea unui antigen de înaltă calitate dintr-o suspensie de treponeme palide obținute din testiculul unui iepure infectat; subiectivitate în evaluarea rezultatelor.

Reacție de hemaglutinare pasivă (RPHA)... Comparația rezultatelor obținute utilizând RPHA și RIBT, RIF-abs, DAC, MRP a arătat sensibilitate și specificitate ridicate ale RPHA în diagnosticul sifilisului, care coincide cu rezultatele RIF-abs.

RPHA poate fi realizat în versiuni calitative și cantitative, există macro și micromodificări ale acestora. Metoda cantitativă a RPHA permite estimarea concentrației anticorpilor treponemali specifici în sânge. Titrurile de la 1: 640 și mai jos sunt tipice pentru pacienții tratați pentru sifilis în trecut. Titrurile mai mari sunt de obicei pentru infecții active, netratate.

Rezultatele pozitive ale RPHA, de regulă, sunt observate la 3 săptămâni după apariția unui șanc greu și apoi la pacienții care au suferit sifilis de mulți ani, adesea pe viață.

Sensibilitatea RPHA este de 76% în sifilisul primar; 100% pentru sifilis secundar; 97% cu sifilis latent; 94% cu sifilis târziu. Specificitatea RPHA este mai mare decât specificitatea RIF-abs și este de 99%.

Datorită raportului dintre specificitatea ridicată, sensibilitatea, ușurința performanței, standardizarea reactivilor printre testele treponemale pentru serodiagnosticul sifilisului, RPHA ocupă în mod constant un loc de frunte în practica clinică din lume.

Beneficiile specifice ale ELISA sunt: \u200b\u200bîn sensibilitatea și specificitatea ridicate a metodei; automatizarea setării reacției; un grad ridicat de standardizare; capacitatea de a studia un număr mare de probe de ser; în contabilitate cantitativă și documentare obiectivă a rezultatelor obținute; posibilitatea determinării simultane a titrului anticorpilor anti-treponemali de diferite clase (IgG și IgM) într-o singură probă; adecvarea pentru diagnosticarea precoce a sifilisului și diagnosticarea sifilisului congenital; ușurința utilizării pentru testarea sângelui într-un serviciu de transfuzie de sânge; aplicabilitate ca test treponemal confirmator specific. Sensibilitate ELISA 98-100%, specificitate 96-100%.

Dezavantajele ELISA includ: inadecvarea pentru studiul eșantioanelor individuale; o perioadă mai lungă pentru a obține un rezultat și o perioadă de valabilitate mai scurtă a kiturilor ELISA, de exemplu, în comparație cu RPHA.

Blot imun (IB). Una dintre metodele moderne pentru diagnosticarea sifilisului este IB pentru determinarea anticorpilor IgG sau IgM la anumite AH ale treponema pallidum.

Metoda are sensibilitate ridicată (până la 100%), specificitate (98%) și reproductibilitate (100%). Studiul face posibilă studierea spectrului de anticorpi simultan împotriva mai multor antigeni T. pallidum, utilizarea antigenelor recombinante și peptidice foarte purificate, minimizând reactivitatea nespecifică a serurilor.

Toate acestea determină posibilitatea preferinței pentru utilizarea metodei IB față de alte teste treponemale pentru verificarea diagnosticului de sifilis în cazuri dificile, în special pentru diagnosticarea sifilisului în a doua jumătate a perioadei de incubație, sifilisul congenital latent în primele zile ale unui viața copilului, pentru detectarea sifilisului latent la persoanele cu răspuns umoral slab, precum și pentru a diferenția rezultatele fals pozitive de alte teste.

Metode indirecte pentru diagnosticarea sifilisului.

Pentru diagnosticarea sifilisului, sunt utilizate multe metode de cercetare, care diferă în ceea ce privește tehnica și scopul. Metodele directe vizează detectarea agentului patogen din materialul de testat folosind microscopie (microscopie în câmp întunecat etc.) sau PCR.

În plus față de metodele de detectare directă a treponema pallidum (T. pallidum), la testarea sifilisului, indirect ( serologic) metode de cercetare care detectează anticorpi împotriva agentului cauzal al sifilisului din serul sanguin și lichidul cefalorahidian. Metodele indirecte pentru diagnosticarea sifilisului includ reacții serologice ELISA, RPHA, DAC, RIF și RIF-abs, RIBT, PCR, metodă expresă, imunoblot și altele.

Metode serologice pentru diagnosticarea bolilor infecțioase.

Criterii de diagnostic serologic se bazează pe reacții specifice antigen-anticorp. Antigenii (componentele pereților celulari, flagelii, capsulelor, ADN-ului și toxinelor) acelor microorganisme care trebuie determinate reacționează cu anticorpii conținuți în seruri. Legarea are loc între antigeni și anticorpii lor corespunzători, care stă la baza metodelor de diagnostic serologic. Testele serologice sunt utilizate pentru a determina un antigen necunoscut (a cărui sursă este o bacterie, un virus, o toxină etc.) folosind un anticorp cunoscut sau pentru a determina un anticorp în ser folosind un antigen cunoscut.

Reacțiile serologice sunt clasificate în funcție de starea antigenului și de caracteristicile mediului în care interacționează antigenul și anticorpul, precum și prin metoda de administrare.

Pentru a efectua reacții serologice, sunt utilizate multe metode de laborator, cum ar fi aglutinarea, precipitarea, legarea complementului, imunofluorescența, imunoanaliza enzimatică și radioimunoanaliza, și altele. Aceste reacții permit identificarea preliminară eficientă a microorganismelor.

Serurile, care sunt necesare pentru producerea reacțiilor serologice, sunt obținute experimental, în special, sunt produse de institutele de vaccinuri și seruri și sunt oferite ca parte a truselor de diagnostic comerciale.

Metodele serologice sunt un instrument important în diagnosticul și tratamentul bolilor infecțioase la oameni și animale, deoarece acestea pot fi utilizate nu numai pentru a identifica agentul cauzal al bolii, ci și pentru a detecta anticorpi specifici împotriva agenților patogeni corespunzători din sângele pacienților. și cei care au fost bolnavi. Metodele serologice sunt în prezent cele mai eficiente metode de diagnostic atunci când este imposibil sau dificil să se izoleze agentul patogen și, relativ rar, dau rezultate fals pozitive și false negative.

Utilizarea metodelor serologice pentru diagnosticarea sifilisului

Metodele serologice de laborator pentru diagnosticarea sifilisului se bazează pe capacitatea organismului de a da un răspuns imun la apariția agentului patogen. Cu ajutorul reacțiilor serologice din serul (plasma) sângelui (sau lichidului cefalorahidian), sunt detectate urme ale răspunsului imun la infecție, și anume anticorpi la antigenii treponemului pal sau antigenii înșiși.

Pentru a stabili natura specifică a manifestărilor clinice existente (și anume că acestea sunt o consecință a sifilisului) și, în viitor, pentru a controla dinamica procesului patologic, au fost propuse un număr mare de metode de cercetare serologică. Aceleași metode sunt de asemenea utilizate pe scară largă pentru screeningul populației.

În conformitate cu ghidurile naționale și ghidurile clinice actuale, în multe țări ale lumii, metodele serologice avansate sunt utilizate în sondajele populației pentru a identifica pacienții cu sifilis și pentru a stabili un diagnostic clinic. Acestea sunt utilizate atât în \u200b\u200bprezența semnelor clinice ale bolii la pacienți, cât și în perioadele de latență.

Testele serologice sunt una dintre cele mai fiabile metode pentru diagnosticarea sifilisului. Testele serologice standardizate cu o metodă de stabilire reglementată se numesc teste serologice pentru sifilis. Având în vedere că aproape toate reacțiile serologice la sifilis în anumite condiții pot fi fals-pozitive sau fals-negative, acestea ar trebui puse împreună și, dacă este necesar, în dinamică.

Reacțiile serologice care sunt utilizate pentru determinarea anticorpilor din serul sanguin al pacientului diferă între ele prin sensibilitate, specificitate, complexitate de stabilire și cost. În plus față de metodele clasice, testele și tehnologiile imunologice sunt utilizate pentru serodiagnosticarea eficientă a sifilisului, care au primit un nou impuls pentru dezvoltare în secolul XXI.

Anticorpii sunt detectați prin diferite metode imunochimice (serologice), inclusiv reacții sedimentare, imunoanalize enzimatice, imunochiluminiscente, analize imunocromatografice, imunoblotare liniară, studiu folosind fluorometrie de flux, tehnologie imunocip și altele.

Serodiagnosticul (cercetarea utilizând metode serologice) este utilizat pentru:

• confirmarea diagnosticului clinic de sifilis,
• diagnostic de sifilis latent,
• monitorizarea eficacității tratamentului, ca unul dintre criteriile pentru vindecarea pacienților cu sifilis,
• prevenirea sifilisului (examinarea de screening a anumitor grupuri de populație în vederea identificării patologiei).

Cele mai importante proprietăți necesare testelor serologice sunt sensibilitatea, specificitatea, reproductibilitatea

Criteriul decisiv pentru alegerea unei metode de diagnostic de laborator este eficacitatea sa - sensibilitate, specificitate și reproductibilitate.

Sensibilitate este proporția rezultatelor pozitive la pacienți. Sensibilitatea metodei este determinată de procentul de rezultate pozitive ale testelor probelor care conțin în mod evident markeri specifici ai agentului patogen (de exemplu, antigeni patogeni sau anticorpi pentru aceștia).

Specificitate - proporția rezultatelor negative ale testelor la pacienții sănătoși. Specificitatea metodei este determinată de procentul de rezultate negative ale testelor pentru probele care evident nu conțin markeri specifici ai agentului patogen. Astfel, cu cât sensibilitatea și specificitatea sunt mai mari, cu atât metoda de cercetare este mai fiabilă și mai fiabilă.

Criteriile de diagnostic importante includ, de asemenea reproductibilitate rezultate la studii repetate ale acelorași probe. Trebuie remarcat faptul că, în ciuda progreselor semnificative în tehnologiile înalte, nu există metode care să ofere sensibilitate și specificitate 100% (absolută) în toate probele biologice studiate.

În prezent, sistemele de testare, seturile, ingredientele sunt înregistrate oficial în Rusia, care, atunci când reacția este setată, au mai puțin de 95% sensibilitate și specificitate. Astfel, există întotdeauna posibilitatea de a obține un rezultat inadecvat.

Clasificarea testelor după tipul de antigen utilizat. Teste treponemale și non-treponemice pentru sifilis

În venerologia modernă, în scopuri diagnostice, sunt folosite mai mult de o duzină de variante de reacții serologice la sifilis, care pot fi împărțite în diferite categorii în funcție de criterii diferite. Clasificarea se efectuează în funcție de metodologia de cercetare, domeniul de aplicare, viteza, ieftinătatea, cerințele pentru echipamentele de laborator etc.

Reacțiile treponemice sunt teoretic mai specifice, dar dau și rezultate fals pozitive. Mai mult, ele nu fac diferența între sifilisul netratat și cel vindecat. Rezultatele testelor treponemice vor fi pozitive în ambele cazuri. Reacțiile non-treponemale fac distincție între infecțiile netratate sau recente și cele vindecate.

În timpul examinării, se recomandă efectuarea atât a reacțiilor treponemale, cât și a celor non-treponemice. Pentru stabilirea și confirmarea diagnosticului de sifilis, sunt necesare rezultate pozitive atunci când se efectuează teste de ambele tipuri - treponemale și non-treponemice. Prin urmare, testele non-treponemale sunt utilizate în combinație cu testele treponemale și sunt efectuate înainte, în timpul și după tratament la intervale de timp specifice.

1. Teste non-treponemice

Cele mai faimoase teste non-treponemale cu interpretare vizuală a rezultatelor sunt

• RW - Reacția Wasserman cu antigene lipidice (reacția de legare a complementului cu antigenul cardiolipinei, RSKk)
• reacția Kann (neutilizată în prezent),
• reacția citocolică a lui Sachs-Vitebsky (neutilizată în prezent),
• microreacția precipitațiilor cu plasmă sau ser inactivat (MRP sau RMP),
• RPR (test rapid cu reazem plasmatic),
• TRUST (Test de ser roșu neîncălzit cu Toluidin).

Printre testele non-treponemale, există 2 teste cu citire microscopică a rezultatelor reacției:

1. VDRL - (Laboratorul de cercetare a bolilor venerice);

2. USR - test pentru determinarea reaginelor plasmatice active (Reagine serice neîncălzite).

Reactivitatea în testele non-treponemale indică de obicei leziuni tisulare și nu este întotdeauna specifică sifilisului. Ușurința de implementare și costul redus le permite să fie utilizate ca o reacție selectivă în stabilirea unui diagnostic preliminar al sifilisului.

2. Teste treponemice

Testele treponemice utilizează antigeni treponemici specifici. Aceste teste sunt necesare pentru confirmarea diagnosticului (RPHA, RIT, RIF și ELISA). Sunt mai complexe și mai scumpe decât testele de grup 1, dar și mai specifice și mai sensibile. Detectarea anticorpilor din lichidul cefalorahidian se face, de asemenea, folosind teste treponemale.

Reacțiile treponemice tradiționale, care confirmă diagnosticul de sifilis, necesită echipamente costisitoare de laborator și personal experimentat, astfel încât acestea sunt rareori efectuate în afara laboratoarelor specializate. Cu toate acestea, ele pot fi înlocuite acum cu reacții treponemale simple și rapide, care pot fi efectuate local și în care este utilizat sângele integral. Realizarea acestor reacții nu necesită o pregătire îndelungată, condiții speciale pentru depozitarea reactivilor și echipamentelor.

Ieftinitatea relativă, comoditatea și practicitatea reacțiilor exprese treponemale atrag atenția asupra lor nu numai ca metode de confirmare a diagnosticului. Aceste teste pot fi utilizate pentru depistarea sifilisului în asistența medicală primară (pot fi făcute local în aceeași unitate de sănătate) sau în zone în care laboratoarele nu sunt disponibile. Cu toate acestea, deoarece anticorpii împotriva T. pallidum au fost determinați de câțiva ani, indiferent dacă pacientul a fost sau nu tratat, răspunsurile treponemale rapide nu pot fi utilizate pentru a evalua eficacitatea tratamentului și pentru a face diferența între sifilisul netratat și cel vindecat.

Clasificarea metodelor serologice pentru diagnosticarea sifilisului după tipul de anticorpi depistați

În dermatovenerologia modernă, sunt utilizate diferite reacții serologice pentru sifilis pentru diagnostic. Unele dintre metodele relevante în urmă cu zece ani nu mai sunt utilizate din cauza complexității sau lipsei de specificitate. În funcție de anticorpii detectați, metodele de diagnostic serologic ale sifilisului sunt împărțite în trei grupe:

I. Reacții lipidice (reagin) - se determină anticorpii împotriva antigenelor lipidice (reagine):

1) floculare: micro-reacție pe sticlă cu antigene lipidice - metodă de diagnostic expres (reacții de micro-precipitare - MRP), VDRL, CMF (test de microfloculare a cardiolipinei), RPR etc.;

2) reacția de legare a complementului (RSK) cu antigene lipidice: reacția Wasserman (RV), metoda calitativă și cantitativă de stabilire, termostatică și la rece (reacția Kolmer);

3) reacții sedimentare care nu sunt utilizate în prezent: reacția de precipitare Kahn, reacția citocholică Sachs-Vitebsk etc;

II. Reacții treponemale de grup - anticorpi pentru gruparea antigenelor treponemice (care fac parte din celula microbiană atât a treponemelor patogene, cât și a celor saprofite) sunt determinați:

1) RSK cu antigen proteic Reiter;

2) reacția de imunofluorescență (RIF);

3) reacție de adeziune imună (RIP).

III. Reacții treponemice proteice specifice speciei - anticorpi la specii specifice antigene ale Treponema pallidum sunt determinați:

1) reacția de imobilizare a treponemelor palide (RIT);

2) reacția imunofluorescenței RIF-abs și a variantelor sale (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS etc.);

3) reacția de hemaglutinare indirectă a treponemelor palide (RPHA) și modificarea sa TPPA.

4) test imunosorbent legat de enzime (ELISA);

5) imunoblotare.

Utilizarea practică a testelor serologice pentru sifilis

Diferite teste serologice sunt utilizate în scopuri practice diferite.

În străinătate, reacțiile de selecție non-treponemică (VDRL, RPR etc.) sunt utilizate pentru screeningul în masă al populației și, dacă este necesar, pentru detectarea urgentă a sifilisului. Confirmarea prin FTA-ABS, RPHA sau TPPA este necesară pentru diagnostic. În prezent, se recomandă utilizarea ELISA ca înlocuitor al VDRL în testele de screening. Acest lucru se datorează faptului că testul ELISA se distinge prin sensibilitate, specificitate, capacitatea de a automatiza cercetarea, precum și dezvoltarea de truse de testare de diagnostic. În plus, o schemă reversibilă a ordinii de cercetare pentru sifilis este justificată, atunci când testele treponemale sunt utilizate mai întâi.

Pentru a monitoriza eficacitatea terapiei și pentru a evalua activitatea infecției, se recomandă un VDRL cantitativ. Un test ELISA pentru anticorpii anti-treponemali IgM este utilizat ca test de confirmare / suplimentar.

În practica internă, se utilizează un complex de reacții serologice (CSR), incluzând o reacție de microprecipitare (RMP) cu antigen cardiolipin și CSC cu cardiolipin și antigeni treponemali. Recent, s-a recomandat în DAC înlocuirea DSC cu IFA sau RPGA. De asemenea, s-a folosit RIF (și modificările sale - RIF-Abs și altele), RIBT.

RIBT este utilizat ca reacție de examinare în cazurile de divergență a reacțiilor treponemale.

Abordări ale diagnosticului serologic de laborator al sifilisului în Federația Rusă

Introducerea în practică a metodelor unificate de cercetare clinică de laborator în URSS și Federația Rusă a făcut posibilă introducerea unor metode de diagnostic mai progresive, eficientizarea activității laboratoarelor de diagnostic clinic, creșterea productivității muncii, reducerea duplicării testelor de laborator și a devenit baza pentru dezvoltarea unor forme raționale de kituri de reactivi gata preparate.

În 1985, în URSS, pentru a îmbunătăți diagnosticul de sifilis, reacția non-treponemală a CSC cu antigen nespecific (Wasserman) și reacțiile sedimentare (citocolice și Cana) au fost excluse din complexul de diagnostic, fiind mai puțin sensibile și nu oferind informatii suplimentare.

În schimb, ca parte a complexului de reacții serologice pentru sifilis (CSR), sa avut în vedere utilizarea reacției de legare a complementului cu antigeni treponemali și cardiolipinici (RSKt) și microreacția precipitațiilor cu antigen cardiolipinic (RMP). Sensibilitatea și conținutul de informații mai ridicate ale acestui set de reacții au asigurat detectarea nu numai a reactivelor, ci și a anticorpilor anti-treponemici.

Anul 1985

1. Cancerul vezicii urinare cu antigen cardiolipinic cu plasmă sanguină și ser de sânge inactivat. Test de screening în caz de utilizare izolată.

2. RSK cu antigeni treponemali și cardiolipidici; metode calitative și cantitative de reglare, termostatice și la rece;

3. Reacția de imobilizare a treponemelor palide (RIT); tehnici de fixare a eprubetelor și a amestecului

4. Reacția imunofluorescenței (RIF) în următoarele modificări: RIF cu absorbție (RIF-abs) cu ser din sânge și sânge capilar, RIF-200, RIF cu lichid cefalorahidian integral (RIF-c); metode calitative și cantitative de punere în scenă. Diagnosticul formelor latente și tardive de sifilis, recunoașterea DM (rezultate fals pozitive)

5. Complex de reacții serologice clasice (CSR): RSK (reacția Wasserman) cu cardiolipină și antigene treponemale + cancer de vezică urinară. Examinarea preventivă a populației pentru sifilis, diagnosticarea tuturor formelor de sifilis, controlul eficacității tratamentului, examinarea persoanelor care contactează sifilisul.

În 2001, Ministerul Sănătății al Federației Ruse a aprobat un nou document normativ care reglementează procedura de efectuare a testelor de diagnostic - ordin al Ministerului Sănătății al Federației Ruse nr. 87 din 26 martie 2001 „Cu privire la îmbunătățirea diagnosticului serologic al sifilisului . "

Pentru a îmbunătăți diagnosticul de laborator al sifilisului, a îmbunătăți calitatea muncii și a preveni răspândirea în continuare a incidenței sifilisului, se recomandă înlocuirea RSK într-un complex de seroreacții (CSR) în diagnosticul sifilisului cu ELISA și RPHA ca screening și teste de confirmare, din moment ce aceste sisteme de testare sunt extrem de sensibile, specifice și reproductibile.

Ordinul nr. 87 din 26 martie 2001 „Cu privire la îmbunătățirea diagnosticului serologic al sifilisului” prevede utilizarea următoarelor metode pentru diagnosticul serologic și al lichidului cefalorahidian al sifilisului în Rusia:

1. Cancerul vezicii urinare și analogii străini (VDRL, RPR și microreacții similare) ca teste de screening la examinarea populației pentru sifilis. Cancerul vezicii urinare se efectuează folosind plasmă sau ser de sânge inactivat.
2. Test imunosorbent legat de enzime (ELISA). Antigen din treponeme palide culturale sau patogene. Reacții de diagnostic, inclusiv pentru diagnosticarea CSF. Datorită simplității setării și disponibilității sistemelor de testare comerciale, acestea pot fi utilizate ca teste de screening.
3. Reacția hemaglutinării pasive (RPHA). Antigen din treponeme palide culturale sau patogene. Screening și reacții diagnostice.
4. Versiuni calitative și cantitative ale RIF (RIF-abs, RIF-c, RIF cu sânge capilar dintr-un deget). Antigen - treponema palidă patogenă a tulpinii Nichols.
5. Complex de reacții serologice (CSR) pentru sifilis, constând din reacția de legare a complementului (RSK) cu antigeni treponemali și cardiolipinici și cancer de vezică urinară. Este posibil să se înlocuiască reacția de legare a complementului cu ELISA sau RPHA în combinație cu cancerul vezicii urinare. DAC se referă la testele de diagnostic.
6. Reacția de imobilizare a treponema palidă (RIBT), în care treponema palidă patogenă a tulpinii Nichols este utilizată ca antigen. RIBT se referă la testele de confirmare a diagnosticului.

Astfel, se recomandă planificarea secvenței de screening a pacienților pentru sifilis în instituțiile medicale, după cum urmează:

1. În timpul examinării inițiale, se efectuează o reacție de screening (screening) de microprecipitare (RMP) sau modificarea acesteia (RPR, TRUST, VDRL) în variante cantitative și calitative, iar în cazul unui rezultat pozitiv, orice test treponemal de confirmare specific (RPHA) , ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. După terminarea terapiei, cancerul vezicii urinare sau modificarea acestuia este plasat, iar dinamica procesului infecțios și eficacitatea terapiei sunt evaluate de scăderea titrului. Confirmarea eficacității terapiei este considerată a fi o scădere a titrului de 4 sau mai multe ori în decurs de 1 an.

Primire cu programare! Sâmbătă duminică.

Reacția Wassermann (RW) este cea mai populară reacție imunologică utilizată pentru diagnosticarea sifilisului de la descoperirea sa în 1906. RW aparține grupului de reacții de legare a complementului (CSC) și se bazează pe capacitatea serului sanguin al unui pacient cu sifilis de a forma un complex cu antigenele corespunzătoare. Metodele CSC moderne utilizate pentru diagnosticarea sifilisului diferă semnificativ în antigenele lor de reacția clasică Wasserman, cu toate acestea, termenul „reacție Wasserman” este păstrat în mod tradițional pentru ei.

În sângele unei persoane infectate apar anticorpi produși de sistemul imunitar. Agentul cauzal al bolii, treponema pallidum, conține antigenul cardiolipin, care determină producerea de anticorpi determinați de RW. O reacție pozitivă a lui Wasserman indică tocmai prezența unor astfel de anticorpi în sângele uman și, pe această bază, se ajunge la o concluzie cu privire la prezența unei boli.

Reacția de hemoliză este un indicator al rezultatului cercetării în RSC. Două componente sunt implicate în reacție: eritrocitele de oaie și serul hemolitic. Serul hemolitic se obține prin imunizarea unui iepure cu eritrocite de oaie. Este inactivat în decurs de 30 de minute la o temperatură de 56 ° C. Rezultatele RSC sunt evaluate în funcție de prezența sau absența hemolizei în eprubete. Prezența hemolizei se explică prin faptul că, dacă nu există anticorpi sifilitici în serul testat, atunci reacția antigen-anticorp nu are loc, iar întregul complement merge la reacția eritrocitelor de miel-hemolizină. Și dacă există anticorpi specifici, complementul merge complet la reacția antigen-anticorp și hemoliza nu are loc.

Toate ingredientele pentru reacția Wasserman sunt luate în același volum - 0,5 sau 0,25 ml. Pentru a fixa complet complementul pe un complex specific, un amestec de ser, antigen și complement studiat este plasat într-un termostat la 37 ° timp de 45-60 de minute. (Faza I a reacției), după care se introduce un sistem hemolitic, format din eritrocite de miel și ser hemolitic (faza II a reacției). Apoi, tuburile sunt plasate din nou într-un termostat timp de 30-60 de minute înainte de debutul hemolizei în control, în care antigenul este înlocuit cu soluție salină și se introduce ser fiziologic în locul serului de testare. Antigenele pentru reacția Wasserman sunt produse gata preparate, cu indicarea titrului și metoda de diluare.

Pozitivitatea maximă a reacției Wasserman este de obicei notată prin numărul de încrucișări: ++++ (reacție puternic pozitivă) - indică o întârziere completă a hemolizei; +++ (reacție pozitivă) - corespunde unei întârzieri semnificative în hemoliză, ++ (reacție slab pozitivă) - dovezi ale unei întârzieri parțiale în hemoliză, + (reacție îndoielnică) - corespunde unei ușoare întârzieri în hemoliză. RW negativ se caracterizează prin hemoliză completă în toate eprubetele.

Cu toate acestea, uneori sunt posibile și rezultate fals pozitive - acest lucru se datorează faptului că cardiolipina este, de asemenea, conținută într-o anumită cantitate în celulele corpului uman. Sistemul imunitar uman nu creează anticorpi împotriva cardiolipinei „proprii”, dar există excepții de la această regulă, datorită cărora apare o reacție pozitivă Wasserman la o persoană perfect sănătoasă. Acest lucru se observă mai ales după boli virale severe și alte boli - pneumonie, malarie, boli ale ficatului și sângelui, în timpul sarcinii, adică în momentele de slăbire gravă a sistemului imunitar.

Dacă medicul suspectează că pacientul are un rezultat fals pozitiv pentru reacția Wasserman, atunci acesta îi poate prescrie o serie de studii suplimentare, care sunt de obicei utilizate în diagnosticul bolilor cu transmitere sexuală.

Boli și cazuri în care medicul poate prescrie un test de sânge pentru RW

Efectuarea procedurii pentru trecerea unui test de sânge pentru RW

Sângele pe RW este donat numai pe stomacul gol. Ultima masă nu trebuie să fie mai târziu de 6 ore înainte de test. Lucrătorul din domeniul sănătății așează pacientul sau îl așază pe o canapea și extrage 8-10 ml de sânge din vena cubitală.

Dacă analiza este necesară pentru un sugar, atunci gardul se efectuează din vena craniană sau jugulară.

Pregătirea cu administrarea testului de sânge pentru RW

Cu 1-2 zile înainte de test, ar trebui să nu mai beți alcool. De asemenea, nu este recomandat să consumați alimente grase - acestea pot denatura rezultatul. În perioada de pregătire pentru analiză, ar trebui să se abțină de la administrarea de medicamente digitalice.

Contraindicații

Rezultatul analizei va fi fals dacă:

• o persoană este bolnavă de o boală infecțioasă sau tocmai a suferit-o,
• o femeie are o perioadă de menstruație,
• gravidă în ultimele săptămâni înainte de naștere,
• primele 10 zile după naștere,
• primele 10 zile din viața unui bebeluș.

În sifilisul primar, reacția Wasserman devine pozitivă la 6-8 săptămâni de la evoluția bolii (în 90% din cazuri), în timp ce se observă următoarea dinamică:

• în primele 15-17 zile după infecție, reacția la majoritatea pacienților este de obicei negativă;
• la 5-6 săptămâni de boală, la aproximativ 1/4 din pacienți, reacția devine pozitivă;
• la 7-8 săptămâni de boală, RW devine pozitivă în majoritate.

În sifilisul secundar, RW este întotdeauna pozitiv. Împreună cu alte reacții serologice (RPHA, ELISA, RIF), permite nu numai identificarea prezenței agentului patogen, ci și aflarea timpului aproximativ de infecție.

Odată cu dezvoltarea infecției sifilitice în a 4-a săptămână a bolii, după apariția sifilomului primar, reacția Wasserman trece de la negativă la pozitivă, rămânând astfel în perioadele secundare proaspete și secundare recurente de sifilis. În perioada secundară latentă și fără tratament, RW se poate transforma în negativ, astfel încât odată cu apariția recidivei clinice a sifilisului, devine din nou pozitiv. Prin urmare, în perioada latentă a sifilisului, reacția negativă a lui Wasserman nu indică absența sau vindecarea acesteia, ci servește doar ca simptom de prognostic favorabil.

În leziunile active din perioada terțiară a sifilisului, o RW pozitivă apare în aproximativ 3/4 din cazuri. Când manifestările active ale perioadei terțiare a sifilisului dispar, de multe ori se transformă în negativ. În acest caz, o reacție negativă Wasserman la pacienți nu indică faptul că nu au o infecție sifilitică.

În sifilisul congenital precoce, RW este pozitivă în aproape toate cazurile și este o metodă valoroasă pentru verificarea bolii. Cu sifilisul congenital tardiv, rezultatele acestuia corespund cu cele obținute în perioada terțiară a sifilisului dobândit.

Studiul reacției Wasserman în sângele pacienților cu sifilis supuși tratamentului are o mare importanță practică. La unii pacienți, în ciuda terapiei antisifilitice viguroase, reacția Wasserman nu se transformă în negativă - aceasta este așa-numita sifilis serorezistent. În acest caz, nu are sens să se efectueze la nesfârșit terapie antisifilitică, realizând tranziția RW pozitiv la negativ.

Din cele de mai sus, rezultă că o reacție negativă a lui Wasserman nu este întotdeauna un semn al absenței infecției sifilitice în organism.

O reacție pozitivă Wasserman la oameni este posibilă cu o serie de alte boli și afecțiuni care nu sunt asociate cu sifilisul:

Toate cele de mai sus indică faptul că un rezultat pozitiv al reacției Wasserman nu este încă o dovadă definitivă a prezenței unei infecții sifilitice.

Recuperare după test

După efectuarea unui test de sânge, medicii recomandă o dietă adecvată și echilibrată, precum și cât mai mult lichid posibil. Vă puteți permite ceai cald și ciocolată. Va fi util să vă abțineți de la activitatea fizică și, în niciun caz, să nu beți alcool.

Standarde

În mod normal, hemoliza trebuie observată în sânge - aceasta este considerată o reacție negativă la sifilis (reacția Wasserman este negativă). Dacă nu există hemoliză, se evaluează gradul de reacție, care depinde de stadiul bolii (marcat cu semne „+”). Trebuie știut că 3-5% dintre persoanele perfect sănătoase pot avea o reacție fals pozitivă. În același timp, în primele 15-17 zile după infecție, reacția la persoanele bolnave poate fi fals negativă.