Metode de cercetare helmintologice. Metodele pentru diagnosticarea helmintiazei sunt împărțite în cele directe, bazate pe identificarea directă a helmintilor înșiși sau a fragmentelor acestora, precum și a larvelor și ouălor helmintilor (metode de examinare a fecalelor, urinei, conținutului biliar și duodenal, sputei, sângelui și țesuturi, material obținut prin răzuire din regiunea perianală și din spațiile subunguale), și indirect, cu ajutorul cărora se produc modificări secundare care apar în corpul uman ca urmare a activității vitale a helmintilor (studii ale compoziției morfologice a sângelui, metode pentru diagnosticarea helmintiazei, examinări cu raze X etc.). Dintre metodele directe, cele mai frecvente sunt scatologice, care sunt împărțite în macro și microhelmintoscopice. În unele cazuri, se folosesc metode speciale.

Metodele de cercetare macrogelmitoscopice vizează căutarea helmintilor sau a fragmentelor acestora (scolexe, segmente, părți ale strobilei cestodelor). Sunt folosite pentru diagnosticarea acelor helmintiaze în care ouăle nu sunt excretate în excrementele pacientului sau sunt excretate în cantități mici și nu întotdeauna (de exemplu, cu enterobiază, oxiurii se găsesc în fecale, cu teniidoză - segmente). Pentru a detecta oxiuri sau segmente de cestode în fecale, fecalele sunt examinate cu ochiul liber. Pentru diagnostic diferentiat Pentru teniidoză, se recomandă vizualizarea fecalelor lichefiate cu apă în porțiuni mici separate în cuve fotografice negre sau în cutii Petri pe un fundal întunecat. Formațiuni mari, suspecte de fragmente de helminți, sunt examinate sub o lupă între două lame de sticlă. Dacă, conform indicațiilor clinice, se presupune detectarea elminților mici sau a capetelor de cestode după tratament, atunci particulele suspecte sunt examinate sub lupă într-o picătură de glicerină și, dacă este necesar, la microscop.

Metodele de cercetare microhelmintoscopice (calitative) vizează identificarea ouălor și larvelor helmintilor. Aplicați metoda Kato cu frotiu gros cu o placă de acoperire cu celofan. Amestecul Kato este format din 6 ml de soluție apoasă 3% de verde de malachit, 500 ml de glicerină și 500 ml de soluție de fenol 6%. Plăcile Kato (celofan hidrofil este tăiat în bucăți de 20-40 mm) sunt scufundate timp de 24 de ore în amestecul Kato, astfel încât să se alăture (3-5 ml soluție Kato la 100 de plăci). 100 mg de fecale se aplică pe o lamă de sticlă, acoperită cu o placă de acoperire cu celofan conform Kato și presată în jos, astfel încât fecalele să fie pătate pe lamă în placa de celofan.

Frotiul este lăsat la temperatura camerei pentru clarificare timp de 40-50 de minute, apoi privit la microscop. În sezonul cald, pentru a evita uscarea preparatului, un burete umed este așezat pe farfuria preparatului preparat. Pentru detectarea completă a tuturor tipurilor de helminti, metoda Kato cu frotiu gros cu o placă integumentară de celofan trebuie utilizată în combinație cu una dintre metodele de îmbogățire. Cele mai frecvente dintre acestea sunt metoda Kalantaryan și metoda Fülleborn. Metoda Kalantaryan: 5 g de fecale se amestecă bine cu o tijă de sticlă în baloane cu gât larg de 100 ml, adăugând treptat o soluție saturată de azotat de sodiu (1 kg de azotat de sodiu la 1 litru de apă la fierbere) la marginile paharului . Particulele mari care plutesc pe suprafață sunt îndepărtate cu o lingură de hârtie. O lamelă de sticlă este aplicată pe suprafața soluției saline (soluția salină este adăugată până când amestecul este complet în contact cu lamela). După 20-30 de minute, diapozitivul este îndepărtat și filmul este vizionat la microscop. În absența acestei sări, se poate utiliza o soluție saturată. sare de masă conform Fgolleborn (400 g sare în 1 litru de apă la fierbere).

Datorită faptului că ouăle cu o greutate specifică mare (ouă nefertilizate de ascaris, ouă de trematode și cestode mari) nu plutesc, pe lângă examinarea stratului de suprafață al lichidului, atunci când se utilizează metoda Fulleborn, este necesar să vizualizați 2-4 preparate din sediment la microscop. Metode speciale de cercetare de laborator pentru diferite helmintiaze. Cercetări privind enterobiaza. Examinarea enterobiazei se efectuează după somn fără a spăla mai întâi zona perianală. Cea mai simplă este detectarea ouălor de oxiuri într-o răzuire perianală folosind o spatulă de lemn (chibrit). Răzuirea se efectuează de pe suprafața pliurilor perianale cu o spatulă de lemn (o chibrită ascuțită sub formă de spatulă) înmuiată într-o soluție de glicerină 50% sau într-o soluție de gadrocarbonat de sodiu 1%. Materialul rezultat este îndepărtat cu atenție cu o spatulă cu marginea unei lame de sticlă pe o altă lamă într-o picătură de soluție de glicerol 50% și microscopată. La examinarea lucrătorilor din alimentația publică, este mai convenabil să examinați materialul din spațiile subunghiale folosind un amestec de cantități egale dintr-o soluție apoasă 50% de glicerină și soluția Lugol.

O metodă mai eficientă este utilizarea unei benzi de plastic transparente cu un strat adeziv prin imprimarea din pliurile perianale ale subiectului. În laborator, fâșiile de bandă adezivă de 9 cm lungime sunt tăiate în prealabil și lipite cu un strat adeziv pe lamele de sticlă, astfel încât un capăt să iasă la 1 cm dincolo de marginea sticlei. Hârtia albă este lipită de partea lipicioasă a proeminentului capătul benzii, pe care scriu număr de serie cercetare. În timpul examinării, apucați capătul liber al benzii cu degetele, scoateți-l de pe lamela de sticlă la al doilea capăt și aplicați un strat adeziv pe pliurile perianale. Pentru a asigura contactul complet cu pielea, banda este netezită cu o spatulă din lemn. Apoi banda este separată de piele și lipită de lamă. Banda este netezită bine pentru a elimina bulele de aer și alte nereguli.

Medicamentul este examinat la microscop. Cercetări privind teniidoza. Principala metodă pentru diagnosticarea teniarhynchiasis este un sondaj pentru a stabili alocarea segmentelor de teniids cu fecale. Se pot utiliza, de asemenea, tehnici de răzuire perianală și tehnica Kato de acoperire cu celofan gros. Diagnosticul teniazei este dificil, deoarece segmente de vierme de porc nu sunt secretate activ. Dacă se suspectează teniază, trebuie efectuată deparazitarea diagnosticului cu doze mici de ferigi masculine sau semințe de dovleac. Cercetări privind fortiloidiaza. Diagnosticul de fortiloidoză se face atunci când larvele de helminți se găsesc în fecale. Cea mai eficientă metodă este Bermann. Un tub de cauciuc cu o clemă este pus pe capătul îngust al pâlniei de sticlă și fixat pe un trepied metalic. O plasă metalică este plasată în pâlnie cu 5-10 g de fecale pe ea. Ridicând ochiurile, umpleți pâlnia cu apă încălzită la 40-45 ° astfel încât partea de jos plasa pentru fecale a fost scufundată în apă. Larvele din fecale trec în mod activ în apă caldă și se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc pus pe pâlnie. După 4 ore, clema de pe tub este deschisă și lichidul este drenat în 1-2 tuburi de centrifugă. După centrifugare timp de 2-3 minute, supernatantul este rapid decantat, iar sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă și examinat la microscop.

Cea mai simplă metodă de detectare a larvelor puternicoide în fecale, care poate fi utilizată pentru examinări de masă în focarele de invazie, a fost propusă de E.S. Shulman, V.G. Supryaga, G.L. Iedera și altele Fecalele (5 g) sunt colectate într-un pahar și turnate cu apă obișnuită (robinet) la temperatura camerei (10-15 ml). După 20 de minute, apa este turnată într-o cutie Petri și examinată la microscop. Dacă suspectați stroyhiloidoză în caz rezultat negativ un singur studiu, este necesar să se efectueze analize repetate la intervale de 5-7 zile, combinându-le cu studii privind conținutul duodenal și bila. Conținutul duodenal și bila (porțiunile A, B, C) sunt obținute în mod obișnuit prin sondare. Fulgii care plutesc în el sunt mai întâi selectați din lichidul testat și vizualizați la microscop, apoi amestecați cu o cantitate egală de eter etilic. Amestecul este bine agitat și centrifugat timp de 10-15 minute la 1500 rpm. Supernatantul este decantat și întregul sediment este examinat la microscop.

Atunci când se examinează conținutul duodenal, este posibil să se identifice helmintiaze cu localizarea agentului patogen în ficat, vezica biliara, duoden (de exemplu, cu opisthorchiasis, fascioliasis, clonorchiasis, dicrocelioza, trichostrongylidosis). Cercetări privind anchilostomiaza. Pentru diagnosticarea anchilostomiazei, se folosesc metode de îmbogățire conform Kalantaryan sau Fülleborn. Pentru diagnosticul diferențial al anchilostomiozei și non-kotorozei, metoda de cultivare a larvelor conform Harada - Mori modificată de Maruashvili și colab. Pe hârtia de filtru cu dimensiunea de 16 × 3,5, fecalele sunt aplicate într-un strat subțire, astfel încât marginile hârtiei să rămână libere. Hârtia cu fecale este plasată într-o cutie de 0,8 litri, umplută cu apă, astfel încât marginea inferioară a hârtiei, fără fecale, să fie scufundată în apă. Bank pentru 5-6 zile este plasat într-un termostat la t ° 28 °. Larvele filiale, care s-au dezvoltat din ouă în acest timp, coboară pe hârtie de filtru și se așază în partea de jos a borcanului. La sfârșitul incubației, hârtia de filtru este îndepărtată din borcan și lichidul este examinat sub o lupă. În cazuri îndoielnice, lichidul este centrifugat, iar sedimentul este examinat la microscop. Studii asupra helmintiazei pulmonare.

Pentru a detecta ouăle de helmint în fecale, se utilizează o metodă de spălare secvențială. O mică porțiune de fecale este amestecată cu apă într-o cutie Petri și lăsată până când particulele suspendate s-au instalat. Supernatantul este decantat și înlocuit apă curată... Procedura se repetă de mai multe ori până când se obține un supernatant clar, precipitatul spălat este examinat la microscop. Se folosesc mai multe probe fecale. Cercetări pentru trihinoză (identificarea larvelor Trichinella). Cu metoda de compresie, o bucată din mușchiul biceps sau gastrocnemius (lângă tendoane) luată chirurgical cu respectarea asepsiei, împărțiți cu ace de disecție în fibre subțiri separate, strângeți-le între două lame de sticlă într-o picătură de soluție de glicerină 50%, astfel încât preparatul să fie subțire și transparent. Larvele Trichinella sunt clar vizibile la microscop cu un câmp vizual întunecat. Este eficient să se studieze mai multe bucăți de mușchi în compresoare utilizate în practica sanitară și veterinară sau în trichinelloscope speciale.

Metoda de digestie Bechman: 1 g de mușchi zdrobiți se toarnă în 60 ml de artificial suc gastric (0,5 g de pepsină; 0,7 ml de acid clorhidric concentrat; 100 ml de apă) și incubat 18 ore într-un termostat la t ° 37 °, stratul superior al lichidului este drenat, apa caldă (37-45 °) este adăugat la precipitat și turnat în aparatul Bermann. O oră mai târziu, lichidul este coborât într-o eprubetă, centrifugat și sedimentul este examinat. Dacă larvele sunt închise în capsule calcificate, acestea sunt pre-decalcificate într-o soluție de acid clorhidric, azotic sau sulfuric. Bioanaliză: bucăți de mușchi studiați sunt hrăniți la șoareci sau șobolani albi, în care, după 2-3 zile, Trichinella matură sexuală poate fi găsită în conținutul duodenal și după 2-3 săptămâni. - larvele din mușchii diafragmei și limbii. Atunci când se utilizează secțiuni helmintologice, piesele musculare sunt fixate în lichidul Buena, Zenker sau altele. În modul obișnuit secțiunile sunt pregătite pe un microtom și colorate cu hematoxilină Delafield.

Cercetări pentru cisticercoză. O bucată de mușchi țesut conjunctiv, nodulii subcutanati etc. sunt examinați cu ochiul liber, cisticercul este izolat cu atenție (o bulă translucidă albicioasă de 1-2 cm în dimensiune), zdrobită între două lame de sticlă într-o picătură de glicerină și examinată la microscop. Pentru a determina viabilitatea cisticercului izolat din țesuturi, acestea sunt păstrate într-o soluție de bilă 50% într-o soluție izotonică de clorură de sodiu într-un termostag la t ° 37 °; după 10-60 de minute capul unui cisticerc viabil se întoarce din afară.Cisticercul calcificat este preliminar descalcificat cu soluție de acid azotic 4% timp de o oră. Cercetări privind schistosomiaza. Test de urină: cel puțin 5 ml de urină colectată la jumătatea zilei se plasează într-un pahar conic timp de 30 de minute, apoi se scurg.

O picătură de sediment de urină se aplică cu o pipetă pe o lamă de sticlă, se prepară un frotiu și se examinează la un microscop cu mărire redusă. Adăugarea a 1-2 picături de soluție de glicerol 50% în sediment clarifică semnificativ sedimentul și facilitează studiul acestuia. Centrifugarea poate fi utilizată (în special pentru rate de invazie scăzute). O probă de urină proaspătă este plasată în 2 tuburi de centrifugă, câte 10 ml fiecare și centrifugată la 1000-1500 rpm timp de 5-10 minute. Preparatele sunt preparate din sediment și examinate la microscop cu mărire redusă. Puteți adăuga 1-2 picături de colorant (soluție Lugol sau 1-2% soluție apoasă de albastru de metilen) la preparate. Acest lucru creează un fundal colorat, facilitând identificarea ouălor schistozomilor. În studiul fecalelor prin metoda de sedimentare - într-un pahar conic cu o capacitate de 200 ml amestecați 1 g de fecale cu 1-2 ml solvent (soluție de glicerină 50% și soluție izotonică de clorură de sodiu într-un raport de 1: 1). Conținutul este diluat cu un solvent până la volumul vasului și lăsat să se depună timp de 20-30 minute. Supernatantul este decantat, iar sedimentul este examinat la microscop.

Pentru a obține o concentrație mai bună, precipitatul trebuie resuspendat într-un solvent până se obține o suspensie și se lasă să se depună într-un pahar conic timp de 10 minute. Sedimentul din stratul inferior este preluat cu o pipetă Pasteur, 2 picături sunt plasate pe o lamă de sticlă, acoperite cu o sticlă de acoperire și examinate la microscop. Atunci când se utilizează metoda de sedimentare Ritchie, aproximativ 2 g de fecale sunt amestecate într-un vas cu 10 ml soluție izotonică de clorură de sodiu și plasate într-un tub de centrifugă de 15 ml. Închideți tubul cu dop și agitați 30 de secunde. Dopul este îndepărtat și conținutul este centrifugat timp de 2 minute la 2000 rpm. După centrifugare, supernatantul se decantează, se adaugă 10 ml soluție de formalină 10% în sediment, se amestecă bine și se lasă amestecul să se depună timp de 5 minute. Adăugați 3-4 ml de eter la el, închideți tubul cu un dop, agitați-l, îndepărtați dopul și centrifugați timp de 2 minute.

Detritusul este îndepărtat cu un aplicator, amestecul supernatant de formalină și eter este turnat, sedimentul din stratul inferior este preluat cu o pipetă Pasteur și examinat la microscop cu mărire redusă. Metodele cantitative pentru diagnosticarea helmintiazei sunt utilizate, dacă este necesar, pentru a stabili intensitatea invaziei. Aceste metode permit evaluarea eficienței deparazitării, evaluarea efectului diferitelor medicamente antihelmintice, și poate servi, de asemenea, ca un control al măsurilor terapeutice și profilactice de masă în curs. Lucrul cu fecalele în laborator. Pentru studiu, fecalele sunt luate din diferite locuri, în porții, în vase de sticlă sau plastic, pahare de parafină, pe care este atașată o etichetă care indică numele, prenumele, patronimicul, vârsta și adresa subiectului. Cantitatea de fecale trebuie să fie de cel puțin 1/4 cană, deoarece porțiuni mici de fecale se usucă rapid și ouăle din ele sunt deformate. În plus, poate fi necesar să re-studiați prin alte metode. Fecalele pentru cercetare trebuie livrate la laborator în termen de o zi. după defecare și când este testat pentru puternicloidoză imediat după defecare.

Dacă este necesară depozitarea pe termen lung a materialului și pentru transport, lichidul Barbagallo (8,5 g clorură de sodiu și 30 ml formalină se dizolvă în 1000 ml apă) sau lichidul Shurenkova (1900 ml soluție apoasă 0,2% azotat de sodiu, 250 ml soluție puternică Lugol, 300 ml formalină nediluată, 25 ml glicerină); sau soluții de pulbere de detergent: 1% soluție Lotus sau 1,5% soluție suplimentară (în raport de greutate fecale și soluție de detergent 1: 5). După analize, vasele sunt dezinfectate: se fierb sau se păstrează timp de 5 ore în soluții 5% fenol, lizol, soluție 2% crezol. La înregistrarea rezultatelor analizelor, numele helminților sunt indicate în conformitate cu nomenclatura modernă ( nume latin). Metodele de diagnostic imunologic sunt cele mai eficiente pentru helmintiază, ale cărei agenți patogeni trăiesc direct în țesuturi sau în faza incipientă a dezvoltării lor migrează de-a lungul fluxului sanguin și a organelor interne ale gazdei.

Utilizare reactii alergice (test cutanat și intradermic) și reacții imunologice: reacție de precipitare inelară (RCP) pentru diagnosticul de trihinoză; aglutinare cu latex (RLA) cu diagnosticum termen lung depozitare pentru diagnosticarea echinococozei și alveococozei; hemaglutinare indirectă (RNGA) pentru diagnosticul de echinococoză, cisticercoză a creierului și faza preimatinală a ascariazei; anticorpi imunofluorescenți (ELISA) pentru diagnosticarea cisticercului și a triquinozei; microprecipitare pe larve (RMPL) pentru diagnosticarea nematodelor (faza preimaginală a ascariazei; anchilostomiaza, trihinoza); imunoanaliză enzimatică (IGF) pentru diagnosticul de echinococoză, alveococoză, opistorhioză, triquinoză; reacție de fixare a complementului (CSC) pentru diagnosticul de trihinoză și cisticercoză. Se utilizează, de asemenea, reacția de imuno-electroforeză (RIEF) și dubla difuzie în gel (RDDG).

Bibliografie: Berezantsev Yu.A. și Autushenko E.G. Diagnostic scatologic helmintologic, L., 1976; Leikina E.S. Cele mai importante helmintiaze umane, p. 335, M., 1967; Metode clinice standardizate cercetări de laborator, ed. V.V. Menshikov, vol. 4, p. 275, M., 1972.

DIAGNOSTIC DE LABORATOR AL HELMINTOZEI

Structura segmentelor de tenii este studiată prin plasarea lor între două lame de sticlă. Segmentele de tenie bovină sunt mai mari decât segmentele de porc și tenie largă, au mai multe ramuri uterine laterale decât cele ale teniei de porc - aproximativ 30 (față de 7-10) (Fig. 14, 15).

Segmentele teniei largi sunt scurte, largi și au o proeminență asemănătoare unei rozete în centru - uterul (Fig. 16).

Doar segmentele de tenie bovină sunt mobile.

Capul fiecăruia dintre cestode are unele particularități. Capul teniei de porc este echipat cu patru ventuze și un proboscis cu două rânduri de cârlige (tenie armată). Nu există cârlige pe capul teniei bovine (tenie neînarmată). Capul teniei largi are două ambii pe laturi - fante, cu ajutorul cărora tenia largă este atașată de mucoasa intestinală (Fig. 17, 18, 19).

Pentru identificarea helmintilor, se examinează mucusul perianal și rectal, conținutul duodenal, sputa, sângele și particulele de țesut. O mare importanță în studiile microhelmintologice este ovoscopia, care face posibilă diagnosticarea după forma ouălor în timpul microscopiei preparatelor din fecale, bilă. Unele helminți sunt localizate în afara intestinelor (cysticercus, trichinella, echinococcus). În aceste cazuri, pentru diagnostic sunt utilizate metode de cercetare imunologică, biopsie etc.

În timpul microscopiei, este necesar să luați fecale proaspete sau să le păstrați într-o soluție de formalină de 5% pentru a evita uscarea fecalelor, care schimbă forma ouălor și îngreunează diagnosticul corect.

Acestea sunt examinate prin microscopie a frotiului nativ, după îmbogățire - prin metoda lui Fülleborn, Telemann etc.

Pentru a pregăti un preparat nativ, o mică parte din fecale este preluată din diferite părți ale porțiunii livrate, frecată bine pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție salină de clorură de sodiu sau soluție de glicerină 50%. Specimenul este acoperit cu o sticlă de acoperire și examinat la microscop (cel puțin 2 exemplare).

Metoda lui Schulman (medicamentul nativ) are anumite avantaje. Cu această metodă, puteți identifica ouăle și larvele unor helminti. Pentru aceasta, 3 g de fecale sunt scufundate într-un vas de sticlă cu apă sau soluție salină de clorură de sodiu (150 ml). Conținutul vasului este agitat cu o tijă de sticlă, în urma căreia se formează o depresiune în formă de pâlnie în centru, lângă tijă. Bata se îndepărtează rapid și picătura rămasă de lichid se aplică pe o lamă de sticlă, acoperită cu o sticlă de acoperire și examinată la microscop, identificând ouăle și larvele de helminți.

Metoda de răzuire utilizat pentru diagnosticul enterobiozei, teniazei și teniarinchozei. Folosesc un chibrit ascuțit sub forma unei spatule, al cărui capăt ascuțit este scufundat într-o soluție de sodă de 1%. Conținutul spatulei este transferat pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de bicarbonat de sodiu 1%. Picătura este acoperită cu o sticlă de acoperire de sus și examinată la microscop.

Metoda Fulleborn permite concentrarea ouălor de helmint pentru cercetare și, prin urmare, crește probabilitatea de a le detecta în acest fel. Se prepară o soluție de clorură de sodiu - 350 g pe 1 litru de apă, încălzită până la fierbere și filtrată printr-un strat de vată sau tifon. Într-un pahar de porțelan de 100 ml, se introduc 5-10 g de fecale și se diluează treptat cu o soluție saturată de clorură de sodiu. Fibrele care plutesc sunt îndepărtate imediat cu hârtie de filtru. Paharul cu conținutul este lăsat în hota de fum timp de 30 min -1 h, se formează un film la suprafață, în care sunt ouă de helminți care pluteau în soluție hipertonică... Filmul este îndepărtat cu o sârmă sau o buclă de platină, aplicat pe o lamă de sticlă, acoperit cu o lamă de acoperire și examinat. Prin metoda Fulleborn, ouăle tuturor helmintilor rotunzi sunt bine determinate, cu excepția ouălor ascaris nefertilizate și a teniei pitice. Ouăle de fulgi și tenii mari plutesc slab, de aceea este recomandabil să vizualizați 2-4 preparate din fundul vasului.

Pentru acumularea ouălor prin metoda Telemann sunt necesari eter și acid clorhidric. 1-1,5 ml eter și 5-6 ml acid clorhidric diluat sunt turnate într-o eprubetă în soluție. se adaugă o mică parte a excrementului (1-2 g), se agită, se filtrează printr-o strecurătoare groasă într-o ceașcă de porțelan, se toarnă într-un tub de centrifugă și se centrifugează timp de 1 min. În eprubetă se formează trei straturi: cel superior conține grăsimi extrase, stratul mediu conține acid clorhidric, în care substanțele proteice s-au dizolvat, iar cel inferior conține particule nedizolvate și ouă de helminți. Cele două straturi superioare sunt drenate și se prepară 1-2 preparate din sediment, care sunt examinate la microscop. Dezavantajul acestei metode este efectul nociv al acidului clorhidric asupra sistemului optic al microscopului și efectul său deformant asupra ouălor de helminți.

Apropo de Kalantarn 5 g de fecale sunt agitate într-un volum de 10 ori al unei soluții saturate de azotat de sodiu. Emulsia rezultată este filtrată printr-un tifon subțire. După 10 minute, preparați 5-6 preparate din film de pe suprafața lichidului și examinați-le la microscop.

Cu opisthorhiasis, metoda este utilizată pentru a determina intensitatea invaziei și eficacitatea terapiei cuantificare ouă în fecale conform Stoll. În acest scop, 56 ml de soluție decinormală de hidroxid de sodiu sunt turnate într-un balon de sticlă special. Se adaugă 4 g de fecale (la un nivel de lichid într-un balon de 60 ml) și se agită cu mărgele de sticlă... Pentru examinare, 0,075 ml (0,005 g) de amestec se colectează cu o pipetă, se transferă într-o lamă de sticlă, acoperită cu o sticlă de acoperire (22 x 23 mm) și numărul de ouă (conținut în 0,075 cm3 din amestec) este numărate la microscop. Numărul rezultat este înmulțit cu 200, rezultatul este numărul de ouă din 1 g de fecale. Mai jos este o scurtă descriere a ouălor de helminți.

Oul fertilizat al viermei rotunde are o formă ovală cu o coajă groasă multistrat. Membrana albumină exterioară este grosieră, de culoare galben închis. Există un blastomer globular în interiorul oului. Dimensiunile ouălor sunt de 50-70x40-50 microni. Un ou de ascaris nefertilizat este alungit, membrana albuminată este subțire, mică, galbenă. În interiorul oului există celule mari galbene poligonale. Mărimi 50-100x40-50 microni. Uneori ouăle pot fi fără o coajă proteică - transparente, incolore și acoperite cu o coajă chiar groasă (Fig. 20, 1, 2, 3).

Ouă de vierme oval cu o coajă groasă multistrat de culoare galben auriu sau maro. La poli - formațiuni asemănătoare plutei. În interiorul oului - conținut cu granulație fină. Dimensiuni 50- 54x22-23 microni (Fig. 20, 4).

Ouă de oxiuri formă ovală neregulată cu o coajă multistrat incoloră netedă. O parte este turtită, cealaltă convexă. În interiorul oului se află embrionul grade diferite dezvoltare, până la larvă. Dimensiuni 50-60x20-30 microni (Fig. 20, 5).

Ouă de viermeformă ovală regulată cu o coajă incoloră transparentă subțire. Ouăle proaspăt divizate conțin 4 blastomeri. Dimensiuni 54-70x36- 40 microni (Fig.20.6).

Ouă de vierme și porc aceeași structură, formă sferică; teaca cu 1-2 fire. În interiorul oului, oncosfera (embrionul) are o coajă groasă, striată radial, de culoare maro închis, cu șase cârlige embrionare în interior. Dimensiunile oncosferei sunt 31x40 microni. În fecalele umane, nu există ouă, ci oncosfere (Fig. 20, 7).

Ouă de tenie pitice de formă ovală, au o coajă subțire, incoloră, cu o oncosferă asemănătoare lămâii în interior, din polii căreia se extind apendicele filamentoase lungi (filamentele). Dimensiuni 40x50 microni. Există 6 cârlige embrionare în oncosferă (Fig. 20.8).

Ouă panglică largă ovoid cu grosime netedă gri coajă. În interiorul oului există un conținut cu granule grosiere, pe polul superior există un capac, pe opus - un tubercul. Dimensiuni 68-71x45 microni (Fig. 20, 9).

Ouă de pisică au o coajă subțire netedă, galben pal, cu un capac pe polul superior și o coloană vertebrală pe opus. Jumatatea de jos ouăle sunt extinse, conținutul interior al oului este cu granulație fină. Dimensiuni 26-32X11-15 microni.

Pentru a detecta larvele de vierme, anghilele intestinale folosesc metoda Berman. 5 g de materii fecale pe un filtru metalic sunt plasate peste o pâlnie de sticlă atașată la un raft. Un tub de cauciuc cu o clemă este pus pe gura pâlniei. Apa încălzită la 50 ° C este turnată în pâlnie, astfel încât partea inferioară a filtrului cu fecale să fie aproape de apă. Larvele trec activ din fecale în apă, acumulându-se în partea inferioară a tubului de cauciuc. După 2 ore, clema se deschide încet, apa cu larvele este coborâtă în tuburi de centrifugă, centrifugată, iar preparatele sunt preparate din sediment pe o lamă, care sunt examinate sub un pahar de acoperire.

Pentru a determina sângele larvelor Trichinella, sângele prelevat din venă este hemolizat cu apă distilată, centrifugat și preparatele sunt preparate din sediment, care sunt examinate la microscop.

Studiul conținutului duodenal se efectuează după cum urmează: bila este amestecată cu un volum egal de eter etilic, centrifugat; sedimentul este microscopat. Pe lângă sediment, sunt examinați fulgi care plutesc în lichid, care pot conține ouă de helmint.

Cu cisticercoză și triquinoză, țesuturile sunt, de asemenea, examinate. O bucată de țesut biopsic - mușchi țesut subcutanat, piele - examinată mai întâi cu ochiul liber pentru a determina vezicula cisticercică, a cărei lungime este de 6-20 mm, lățimea de 5-10 mm. Dacă se suspectează cisticercul, flaconul este zdrobit între două lame de sticlă și examinat la microscop. Cisticercoza se caracterizează prin prezența unui scolex cu patru ventuze și o corolă de cârlige.

Pentru a detecta trichinella, o bucată de mușchi tăiată aseptic (gastrocnemius etc.) este măcinată într-o soluție de glicerină 50% în fibre subțiri folosind ace de disecare. Aceste filamente sunt strânse între două lamele de sticlă și examinate la o mărire mică a microscopului într-un câmp vizual întunecat. Larvele Trichinella sunt înfășurate în mușchi sub formă de spirală și se află în capsule (Fig. 21).

Metoda de cercetare cu raze X este utilizată pentru echinococoză, cieticercoză, triquinoză (după calcificarea larvelor) și ascariază.

În unele cazuri, se utilizează metode de diagnostic imunologic.

Helmintii, precum și produsele lor reziduale, au proprietăți antigenice pentru corpul uman. Ca rezultat al prezenței helmintilor în corpul uman, are loc o restructurare alergică, care poate fi detectată prin intradermice speciale teste alergice... În plus, în organismul infectat se formează diferiți anticorpi - precipitine care leagă complementul -. Metodele de imunodiagnostic capătă o valoare specială în cazurile în care ovoscopia nu poate fi utilizată, în special în cazul trichinozei, echinococozei, cisticercozei, ascariazei în etapa de migrare și când este infestat doar de bărbați.

Cu echinococoză și triquinoză, se efectuează o reacție de aglutinare cu latex, Kalius, cisticercoză - un test cu un antigen pregătit de Bobrov și Voznoy. Cu unele helmintiaze, este posibil să se utilizeze studii serologice: reacția de precipitare a larvelor de ascaris cu serul sanguin al unui pacient în stadiul migrator al ascariazei, reacția de precipitare a serului sanguin al unui pacient cu trichinoză cu un antigen din Larvele Trichinella, RSK cu echinococoză, trichinoză, opistorhiază, cisticercoză.

Metodele cercetării helmintologice sunt împărțite în directe și indirecte. Metode directe: identificarea helmintilor înșiși, a fragmentelor lor, a ouălor, larvelor în fecale, urină, secreții duodenale, spută, mucus nazal și vaginal, conținutul spațiilor subunguale, bucăți de țesut biopsiat. Metode indirecte: identificarea modificărilor secundare care apar în corpul uman ca urmare a activității vitale a parazitului, reacții serologice, teste generale de sânge și urină. Cele mai frecvente metode pentru examinarea fecalelor sunt helmintice și protozooscopice. Atunci când diagnosticați, este imposibil prin orice metodă să identificați ouăle sau larvele tuturor tipurilor de helminti care trăiesc în sistemul digestiv uman. Deci, atunci când se utilizează metoda de flotație, ouăle trematodelor, în unele cazuri, ouăle ascaris nefertilizate nu plutesc în pelicula de suprafață (datorită greutății specifice ridicate). În fecale, este foarte rar să găsești ouă de oxiuri, oncosfere teniide, care sunt detectate metode speciale cercetări: răzuirea din pliurile perianale pentru oxiuri și teniide, metode de sedimentare pentru trematode (ouă de opisthorchus etc.). Prin urmare, pentru o examinare țintită a unui pacient pentru depistarea helmintiazei, medicul din direcție ar trebui să indice care helminti ar trebui să li se acorde atenția principală (diagnostic), ceea ce va permite asistentului de laborator să aleagă metoda adecvată pentru detectarea acestui tip de helmint. Fecalele luate din diferite locuri de excrement în cantitate de cel puțin 50 de grame (linguriță) într-un recipient din sticlă curată trebuie trimise la laborator nu mai târziu de o zi după defecare și examinate în ziua admiterii. Dacă este necesar să se păstreze fecalele până a doua zi, se pune într-un loc rece (0-4 ° C) sau se umple cu unul dintre conservanți. Înainte de examinare, fecalele sunt agitate cu un băț, astfel încât ouăle helminților să fie distribuite uniform în masa totală. Dacă în preparat se găsesc ouă de helminți, vizualizarea nu se oprește, deoarece poate exista invazie dublă sau triplă. Controlul eficacității tratamentului helmintiazei se efectuează prin examinarea fecalelor pentru ouă de helmint în 2-3 săptămâni sau 2-3 luni după tratament, în funcție de helmintul detectat. Metodele macroscopice sunt folosite pentru a detecta helmintii întregi cu maturitate sexuală sau fragmentele lor în fecale cu ochiul liber sau folosind o lupă portabilă. Adesea pe suprafața fecalelor după defecare, puteți vedea viermi care se târăsc în mod activ; viermii rotunzi sunt excretați în fecale; uneori oamenii înșiși observă eliberarea helmintilor. La pacienții cu difilobotriază, resturile de tenie strobila (sub formă de „tăiței”) pot ieși în evidență, iar la cei infestați cu teniide (tenie de porc sau bovină), de multe ori pleacă segmente de helminți (sub formă de „tăieturi albe”) cu fecale sau se târăsc activ din anus. Metoda macroscopică este principala pentru diagnosticul diferențial al teniidozei și teniarhynchiasis (în combinație cu un sondaj). Dintre metodele macroscopice speciale, se utilizează metoda spălării secvențiale a fecalelor. Fecalele sunt agitate în apă pentru a obține o suspensie uniformă, după care, la o iluminare bună, sunt examinate cu atenție în porțiuni mici separate în cuve fotografice negre sau pe un fundal întunecat în cutii Petri. Cu o pensetă sau un ac de disecție, îndepărtați toate particulele albe suspecte, formațiunile mari suspecte de fragmente de helminți și examinați-le sub o lupă între două lame de sticlă. Micile helminți sau capete de cestode sunt examinate sub lupă într-o picătură de glicerină sau la microscop. Atunci când se utilizează această metodă pentru a diagnostica segmente de porc, tenie bovină, tenie largă, segmentele spălate sunt plasate între două pahare și, privind lumina sub lupă sau mărirea redusă a microscopului, specia este determinată de structură a uterului (într-un segment matur al teniei de porc, 8-12 ramuri laterale, iar la tenia bovină 18-32, mai des 28-32, la tenia largă segmentele sunt mai late și uterul este în centru în forma unei „rozete”). Dacă uterul este slab vizibil, atunci poate fi ținut anterior pentru o perioadă de timp într-o soluție de glicerină 50%, după care chiar și trunchiurile pustii ale uterului sunt clar vizibile. Atunci când se determină aceste cestode prin structura capetelor desprinse, acestea cu gâtul sunt plasate cu grijă într-o picătură de glicerină între lamele de sticlă (sau acoperite cu o sticlă de acoperire) și, fără stoarcere, sunt examinate la microscop la mărire mică.

Metodele microscopice sunt împărțite în simple, complexe și speciale.

Metodele simple includ metode de frotiu nativ, frotiu nativ cu soluția Lugol, frotiu gros Kato sub celofan, răsucire (Schulman) și răzuire perianală.

Metodele complexe sunt mai eficiente și se bazează pe concentrația ouălor în preparate. Ei includ pre-procesare fecale cu reactivi lichizi, ca urmare a cărora ouăle de helminți fie precipită, fie plutesc la suprafața lichidului.

Metodele complexe includ metode de îmbogățire:

a) flotație (când greutatea specifică a ouălor este mai mică decât greutatea specifică a soluției saline și ouăle plutesc în pelicula de suprafață);

b) sedimentare (când greutatea specifică a ouălor este mai mare decât greutatea specifică soluții saline iar ouăle se așează în sediment).

Metode speciale pentru detectarea ouălor și larvelor de helminti, chisturi și forme vegetative de protozoare sunt răzuirea, flotația, sedimentarea, larvoscopia, protozooscopia, examinarea bilei și metodele de colorare a frotiurilor de fecale, spută etc.

Înainte de a lua măsuri terapeutice și profilactice pentru anumite helmintiaze ale animalelor agricole și de vânat, este necesar să se livreze diagnostic precis boală. Există două grupuri de metode pentru diagnosticarea helmintiazei - pe viață și post-mortem. În plus, trebuie să se poată face diferența între helmintiaze și alte boli invazive și infecțioase.

Diagnosticul pe viață al helmintiazei

Diagnosticul helminthiases în timpul vieții animalelor se face pe baza rezultatelor metodelor de cercetare de laborator și a deparazitării diagnostice (metode directe), precum și a reacțiilor imunobiologice (metode indirecte). Un rol auxiliar în diagnosticul helmintiazei îl au datele din studiile gazdelor intermediare (cu biohelmintiază), observațiile clinice și epizootice. Principalele metode de diagnostic sunt testele de laborator care permit adesea detectarea agenților patogeni ai helmintiazei sau a ouălor și larvelor acestora în excreții (fecale, urină, spută), secreții (bilă), țesuturi (sânge, mușchi), organe (bucăți de piele) , în conținutul punctatelor și abceselor ...

Metodele de laborator pentru diagnosticarea helmintiazei la animale sunt ușor de realizat și suficient de precise, prin urmare sunt utilizate pe scară largă în conditii de munca (în laboratoare veterinare și alte instituții veterinare). În funcție de scopul urmărit, cercetarea de laborator este împărțită în metode de cercetare helmintică, helmintholarvoscopică și helmintoscopică.

Metode helmintholarvoscopice studiile sunt folosite pentru a detecta larvele de helmint (dictyocaul, mullerii etc.). Din acest grup, este adesea folosit studiul fecalelor prin metodele lui Berman-Orlov și Weid.

Helmintoscopic sau macrohelmintoscopic studiile sunt utilizate în scopuri de diagnostic pentru a detecta helmintii secretați extern sau fragmentele acestora (segmente de nestoduri). ÎN condiții practice această metodă este utilizată pentru a stabili un diagnostic de ascariază a porcilor, drepanidoteniaza gâștelor și alte helmintiaze.

Dintre metodele de laborator pentru diagnosticarea helmintiazei animale, următoarele sunt de o mare importanță practică: b) studiul secrețiilor din alte organe; c) cercetarea țesuturilor.

Studii helminticoprologice

În aceleași scopuri, propuse dispozitiv specialformat din ramuri de oțel, ramuri de tranziție și două suprafețe semisferice atașate ramurilor. Luarea fecalelor din rectul animalelor cu acest dispozitiv facilitează activitatea medicilor veterinari și crește cultura de producție a acestei manipulări.

La iepuri, fecalele în cantitate de mai multe bile sunt îndepărtate prin apăsarea peretelui abdominal în regiunea rectală. Uneori este permis să se ia mostre de fecale de pe podea, dacă sunt proaspete și se știe de la ce animal. Cel puțin 10-20 g de fecale sunt luate de la un animal. De la păsări, animale de blană, câini, pisici și prădători sălbatici (în grădinile zoologice) fecalele sunt colectate de pe podeaua curată a celulelor (probe de grup).

Toate probele de fecale sunt etichetate: de-a lungul marginii pungii sau a foii de hârtie (unde nu va intra în contact cu fecalele) creion simplu scrieți numărul eșantionului (uneori numele vacilor). Eșantioanelor fecale se atașează un inventar, în care sunt indicate numele fermei, brigăzii, speciei, sexului și vârstei animalelor (pentru adulți - poreclă sau număr de inventar) și data prelevării. Este recomandabil să indicați scopul cercetării fecalelor în scrisoarea însoțitoare (de exemplu, pentru a controla deparazitarea efectuată). Este necesar să încercați să livrați rapid eșantioane fecale la laboratorul veterinar și să le examinați fără întârziere, deoarece la temperatura camerei, larvele ies din ouăle de fortilați intestinali după 16-20 de ore, ceea ce face dificilă diagnosticarea dictyocaulozei și protostrongilidozei, precum și alte helmintiaze.

Dacă probele de fecale nu sunt examinate în ziua colectării, acestea sunt plasate într-un frigider sau subsol la o temperatură care nu depășește 10 °. Dezinfectanții nu opresc dezvoltarea larvelor în interiorul ouălor de helminți. Rezultatele studiului fecalelor sunt înregistrate într-un jurnal special.

Echipamente pentru studii helminticoprologice. Fiabilitatea studiilor helminticoprologice depinde în mare măsură de calitatea echipamentelor de laborator. În 1968, un set de echipamente standard a fost dezvoltat în Ucraina pentru examinarea în masă a fecalelor pentru helmintoze. Se compune din articole realizate în principal din polistiren rezistent la impact, de două culori, care sunt ușor de curățat și neutralizat (rezistă la fierbere) și sunt, de asemenea, convenabile pentru transport. Setul include cupe de diferite capacități, pâlnii, eprubete conice, strecurătoare de diferite dimensiuni, un suport cu cinci lamele (fiecare pentru șase pâlnii), cuve (dimensiunea trepiedului), cutii de depozitare, precum și pere de cauciuc, sticlă tije și balamale metalice (fig. 1).

Spre deosebire de echipamentele eterogene utilizate anterior, noul set crește eficiența studiilor de laborator asupra fecalelor și productivitatea lucrătorilor veterinari, permite studii helminticoprologice cantitative mai răspândite folosind metode standardizate (controlul deparazitării) și, de asemenea, îmbunătățește partea estetică a acest lucru.

Distingeți între metodele calitative și cantitative pentru examinarea fecalelor.

Studii helminticoprologice calitative

Metodele de cercetare calitativă permit stabilirea carei helminti sunt infectați cu animale.

Metode helmintoscopice. Pentru diagnosticul intravital al helmintiazei, au fost propuse un număr mare de metode de helminticoscopie, dintre care vom lua în considerare doar cele care sunt mai des utilizate în practica veterinară.

Majoritatea metodelor de diagnostic helminticoprologic se bazează pe diferența de greutate specifică a ouălor, larvelor de helminți sau a fragmentelor acestora, pe de o parte, și pe lichidul în care sunt suspendate fecalele investigate, pe de altă parte. În funcție de raportul dintre greutatea specifică a acestor componente, se disting flotația, sedimentarea și metodele combinate.

Metode de plutire. Când metodele de plutire (plutitoare) folosesc lichide (soluții sărate saturate), a căror greutate specifică mai multă greutate ouă de helmint. În practica de laborator, cea mai utilizată este o soluție saturată de clorură de sodiu (greutate specifică 1,18). Pentru a prepara o astfel de soluție, clorura de sodiu este adăugată treptat amestecând într-o cratiță cu apă clocotită până când se formează un mic precipitat la fund (aproximativ 400 g de clorură de sodiu sunt luate pentru 1 litru de apă). Soluția fierbinte este filtrată într-o sticlă prin mai multe straturi de tifon sau vată și utilizată după răcire (trebuie să se formeze un precipitat cristalin în partea de jos a sticlei).

Mai rar, în laboratoarele veterinare, soluții saturate de sulfat de magneziu cu o greutate specifică de 1,35 (920 g per 1 L apa fierbinte), hiposulfit de sodiu cu o greutate specifică de 1,37 la 1,41, în funcție de temperatură mediu inconjurator (1750 g per 1 litru de apă fierbinte) și azotat de sodiu cu o greutate specifică de 1,4 (raportul azotat și apă fierbinte este 1: 1).

Metoda Fulleborn caracterizată prin ușurința implementării și eficiență ridicată cu majoritatea nematodelor și cestodozelor animalelor, prin urmare, acesta ocupă primul loc printre altele, metodele de diagnostic helmintocoprologice. 3-5 g de fecale sunt plasate într-o ceașcă de sticlă, polistiren sau plastic cu o capacitate de 50-100 ml și, în timp ce se amestecă cu o tijă de sticlă, se adaugă treptat o soluție saturată de clorură de sodiu (clorură de sodiu) la o viteză de 15-20 părți de lichid de flotație pe o parte de fecale. Fecalele dense de oaie pot fi măcinate preliminar cu o cantitate mică de soluție de sare într-un mortar de porțelan, după care suspensia este turnată într-un pahar adăugând cantitatea necesară de soluție de clorură de sodiu. Particulele mari plutitoare sunt îndepărtate imediat cu un băț și se recomandă filtrarea suspensiei de fecale într-un alt pahar printr-o sită (uneori se folosesc strecurătoare de lapte). După ce proba încărcată s-a instalat timp de 45-60 de minute, trei picături din pelicula de suprafață sunt îndepărtate cu o buclă de metal, așezate pe o lamă de sticlă și microscopate fără o sticlă de acoperire. După fiecare test, buclele sunt spălate într-un pahar cu apă (în loc să le ardă pe o lampă cu alcool, așa cum se recomandă în unele manuale).

Metoda Kalantaryan - o metodă Fulleborn modificată. O soluție saturată de azotat de sodiu este utilizată ca lichid de flotație. Timp de decantare a suspensiei 15-30 minute. Se utilizează pentru diagnostic și acantocefaleză.

Metode de depunere. Metodele de precipitare utilizează lichide cu greutate specifică mai mică decât greutatea specifică a ouălor.

Metoda de spălare secvențială. O cantitate mică de fecale (5 g) este agitată într-un pahar cu 10 ori cantitatea de apă. Amestecul este filtrat într-un pahar mare și se adaugă apă, după care filtratul este lăsat să stea timp de 5 minute. Apoi stratul superior de lichid este drenat sau aspirat cu o seringă într-un sediment; aceeași cantitate de apă se adaugă în sediment, se agită și se apără din nou timp de 5 minute. Aceste manipulări se repetă până când stratul superior de lichid din sticlă devine limpede. Lichidul este drenat pentru ultima dată, iar precipitatul este aplicat pe un pahar sau într-un vas bacteriologic și examinat la microscop. Această metodă este adesea utilizată pentru a diagnostica majoritatea trematodelor și acantocefaleelor.

Metoda lui Gorșkov bazat pe principiul sedimentării urmat de concentrația ouălor de helminți. 150-300 g de fecale de cal sunt așezate pe o sită metalică sau tifon într-o pâlnie mare de sticlă cu un diametru de 15-20 cm în partea superioară. Se pune un tub de cauciuc lung de 10-15 cm cu o clemă la capăt capătul inferior al pâlniei. Fecalele sunt slăbite și umplute până la refuz cu apă caldă. Fecalele din pâlnie sunt păstrate de la 4 ore la o zi, după care clema este deschisă cu atenție, o parte din lichid este eliberată în tuburi de centrifugă și centrifugată timp de 3 minute. Apoi lichidul este drenat, iar precipitatul este examinat la microscop. Această metodă este utilizată pentru a diagnostica dracheiaza și gabronematoza cailor.

Metode combinate. Acestea se bazează pe principiul sedimentării și plutirii ouălor de helminți, prin urmare, sunt mai eficiente în comparație cu metodele de cercetare anterioare. Datorită complexității lor, aceste metode au o aplicare relativ limitată în medii industriale.

Metoda lui Darling. O cantitate mică de fecale (3-5 g) se agită într-un pahar cu 20-30 ml de apă, amestecul este filtrat în tuburi de centrifugă și centrifugat timp de 1-2 minute, după care stratul superior de lichid este drenat și în sediment se adaugă un amestec de părți egale de glicerină și sare de masă. Amestecul din eprubete este agitat și centrifugat din nou. Ouăle care plutesc pe suprafață sunt îndepărtate împreună cu filmul de suspensie cu o buclă de sârmă, scuturate pe o lamă de sticlă și microscopate. În absența glicerinei, fecalele pot fi amestecate cu soluție saturată de clorură de sodiu înainte de centrifugarea secundară.

Metoda lui Scherbovich. Tehnica examinării fecalelor este similară cu metoda anterioară. Se diferențiază de acesta prin faptul că, înainte de centrifugarea secundară, se adaugă în sediment o soluție saturată de hiposulfit de sodiu (pentru macracanthorinchiaza de porc) sau sulfat de magneziu (). Comparativ cu metoda lui Darling, această metodă este mai eficientă.

Metoda de flotație și sedimentare a lui Demidov recomandat pentru diagnosticarea fascioliozei, precum și a altor trematode ale rumegătoarelor. Eșantion de fecale (3 g la oaie și 5 g la mare bovine) se pune într-un pahar cu o capacitate de 200 ml și se toarnă în el o soluție saturată de sare de masă până la vârf și se agită bine cu o tijă de sticlă, după care suspensia este apărată timp de 15-20 minute. Particulele grosiere care plutesc pe suprafață sunt îndepărtate cu o lingură de hârtie, iar supernatantul este aspirat cu o seringă (atunci când se examinează un numar mare probele lichide pot fi drenate), lăsând 20-30 ml de sediment la fund. Apa este adăugată în sediment la întregul volum al sticlei și se amestecă bine. Amestecul este filtrat într-un pahar obișnuit printr-o pânză de brânză sau o sită metalică și pus deoparte timp de 5 minute. Supernatantul este aspirat, lăsând 15-20 ml de sediment în partea de jos, care este transferată într-un pahar conic, un pahar obișnuit este clătit și spălarea este turnată într-un mic. Suspensia este așezată într-o cupă conică timp de 3-5 minute, iar lichidul este aspirat ulterior (această procedură se repetă). Precipitatul limpezit este transferat pe o lamă de sticlă și microscopat. Aceasta metoda metoda mai eficientă spălare secvențială.

Metode helmintholarvoscopice. Metoda Berman-Orlov. Pentru studiul fecalelor, se utilizează un aparat format dintr-o pâlnie medie (plastic, polistiren sau sticlă), un tub de cauciuc (lung de 10-15 cm) conectat la pâlnie la capătul superior, o clemă atașată la capătul inferior a tubului de cauciuc, o sită metalică sau o bucată de tifon și un trepied (pentru unul sau mai multe dispozitive). Aparatul asamblat este umplut cu apă caldă (35-38 °). 10-15 g de fecale proaspete sunt așezate pe o sită sau învelite în pânză de brânză și coborâte cu grijă într-o pâlnie. Fecalele de la oi sunt păstrate în aparat timp de 2-4 ore, iar de la viței - cel puțin 6-7 ore. Apoi, clema de pe tub este slăbită, iar lichidul care iese este colectat într-o eprubetă și centrifugat timp de 2-3 minute. După aceea, stratul superior al lichidului este turnat prin răsturnarea rapidă a eprubetei, iar lichidul rămas în partea de jos este transferat într-o lamă de sticlă și examinat la microscop. Utilizarea clemelor pentru tuburi de cauciuc în aparatul Berman este incomodă, deci în multe laboratoare veterinare capetele inferioare ale tuburilor de cauciuc sunt conectate direct la eprubete mici. Înainte de a examina sedimentul la microscop, lichidul nu este centrifugat.

Fecalele rumegătoarelor pot fi examinate pentru nematode pulmonare (în special în condiții de expediție) printr-o metodă simplificată de helmintolarvoscopie (fără a utiliza pâlnii). În acest scop, se folosesc cupe mici semiconice (50 ml). Probele de materii fecale sunt plasate pe strecurătoare sau învelite în tifon și înmuiate în căni cu apă. După câteva ore, fecalele sunt îndepărtate, lichidul din sticlă este aspirat sau drenat, iar sedimentul este microscopat.

Metoda lui Weid. Mai multe bile de fecale de la rumegătoarele mici sunt plasate într-un vas bacteriologic sau pe un pahar de ceas și umezite cu puțină apă caldă. După 10-20 de minute, fecalele sunt îndepărtate, iar lichidul rămas este examinat la microscop cu mărire redusă. Eficacitatea acestei metode este semnificativ mai scăzută în comparație cu metoda anterioară, prin urmare este mai puțin utilizată pentru diagnosticul de dictiocauloză și protostrongilidoză la ovine.

Metoda pentru diagnosticul diferențial al fortilatozelor de către larvele invazive. Agenții cauzali ai majorității fortilatozelor intestinale au aproape aceeași structură a ouălor, prin urmare, cu ovoscopie helmintică, se poate face doar un diagnostic de grup (de exemplu, fortilatoza).

Pentru a stabili un diagnostic mai precis (generic), se obține uneori o cultură de larve de strongilat invaziv în laboratoarele veterinare. Aproximativ 5 g de fecale sunt plasate într-un vas bacteriologic, acoperite cu un capac și plasate într-un termostat la temperatura de 25-30 ° timp de o săptămână. Apoi, fecalele cu larve sunt examinate conform metodei Berman-Orlov (pentru a izola larvele invazive de fecale).

Larvele invazive din diferite genuri de strongilați intestinali diferă în ceea ce privește dimensiunea corpului, structura capătului cozii capului și numărul de celule intestinale. De exemplu, larvele esofagostomului sunt mai mari (până la 1 mm în lungime), capătul cozii filamentoase al capacului este lung, iar intestinul are 20-32 celule; larvele hemonch sunt de lungime medie (aproximativ 0,8 mm), cu un capăt filamentos de coadă; intestinul are 16 celule.

Spălarea periodică și așezarea fecalelor se repetă până când stratul superior devine limpede. Stratul superior de lichid este aruncat pentru ultima dată, iar sedimentul este examinat în porțiuni mici în cuve cu fundul alb-negru. Helmintii detectați sunt colectați cu pensete, ace și perii de disecție, examinate la microscop și apoi transferate într-un lichid conservant. Pentru a identifica nematodele mici, sedimentul este examinat suplimentar în părți folosind o lupă binoculară sau trepied cu mărire de 10-20x.

Studii helminticoprologice cantitative

Metoda standardizată Fulleborn mai puțin precisă în comparație cu metoda Stoll, dar având în vedere ușurința implementării, este utilizată pe scară largă în practica veterinară pentru a controla eficacitatea deparazitării animalelor. În ceea ce privește tehnica de execuție, metoda standardizată seamănă cu alte metode de studii helmintice de înaltă calitate. Cu toate acestea, are o serie de caracteristici, dintre care principalele sunt următoarele: 1) proba de fecale trebuie să fie egală; 2) feluri de mâncare de același volum; 3) timpul de sedimentare a suspensiilor apoase de fecale este același; 4) bucle de același diametru, studiul unui număr egal de picături.

Pentru o relatare aproximativă a intensității invaziei dictiocaulare și progostrongilide la rumegătoare, poate fi utilizată metoda standardizată Berman-Orlov. Fiabilitatea rezultatelor crește odată cu creșterea numărului și frecvenței studiilor.

Examinarea altor secreții de organe

Examinarea conținutului cavităților conjunctivale este utilizată pentru a diagnostica telazioza bovinelor (agentul cauzal este Thelazia rhodesi). Cavitățile conjunctivale sunt irigate din seringă cu o soluție apoasă de iod; lichidul rezultat este colectat într-o cuvă sau într-un bazin în formă de rinichi și verificat pentru prezența vițeilor. ÎN în acest caz o soluție apoasă de iod are, de asemenea, un efect terapeutic.

Studiul ieșirilor din cloacă se efectuează pentru diagnosticarea intravitală. Mucusul care se scurge este plasat pe o lamă de sticlă și examinat la microscop pentru a detecta ouăle agentului patogen.

Examinarea răzuirii din pliurile perianale este principala metodă de diagnostic. Un baston sau chibrit în formă de scapula umezit cu un amestec de părți egale de glicerină și apă este răzuit din pliurile perianale ale perineului și suprafața interioară rădăcina cozii. Răzuirea este transferată pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerină cu apă, acoperită cu o sticlă de acoperire și microscopată. Descoperirea ouălor de oxigen confirmă diagnosticul clinic.

Pentru diagnosticarea formei cutanate de drachează și gabronematoză se recomandă examinarea răzuirilor pielii din „ulcerele de vară”. Răzuirea este preluată de pe suprafața proaspăt ulcerată a pielii și plasată într-o picătură de acid clorhidric diluat (1: 1000). Apoi, medicamentul este împărțit cu ace de disecție, acoperit cu o sticlă de acoperire și examinat la microscop pentru a detecta larvele de drache sau gabronem.

Examinarea țesuturilor

Examinarea pielii bovinelor (conform Gnedina) este utilizată pentru diagnosticarea oncocercozei. În partea de jos perete abdominal la animal după preparare câmp de operare o bucată mică de piele de 2 mm grosime (cu un bob mic de ovăz) este decupată, iar rana este pătată cu tinctură de iod. Într-un laborator veterinar, această bucată de piele este plasată pe o lamă de sticlă într-o soluție fiziologică, despărțită cu ace de disecare, apoi totul este turnat într-un tub de centrifugă și plasat într-un termostat timp de câteva ore la o temperatură de 37-38 ° . Apoi, fibrele pielii sunt îndepărtate, lichidul este centrifugat, iar sedimentul este microscopiat pentru a detecta microonchocerci mobili.

Examinarea pieselor musculare pentru deseori desfășurate postum. Uneori se folosește o metodă de biopsie pentru diagnosticul de trichinoză pe viață. O bucată de mușchi este tăiată prin intervenție chirurgicală (de exemplu, din mușchii externi ai urechii), din care sunt pregătite secțiuni mici (cu fulgi de ovăz). Acestea din urmă sunt așezate pe sticla inferioară a compresorului, acoperite cu sticla superioară și aduse împreună cu șuruburi până când sunt complet aplatizate. Feliile sunt vizualizate sub trichinelloscop, cu mărire redusă a microscopului, folosind un trichinelloscope de proiecție sau o cameră de proiecție KT-3.

Deparazitare diagnostic

Pentru deparazitarea diagnosticului, sunt selectate mai multe animale, izolate de restul animalelor și cărora li s-a administrat un antihelmintic în doză terapeutică. Fecalele izolate de aceste animale în decurs de una până la două zile sunt colectate și supuse unui examen helmintoscopic pentru detectarea agentului cauzal al bolii. În condițiile de producție, deparazitarea diagnostică este adesea efectuată pentru diagnosticarea in vivo a moniazei rumegătoarelor, a drepanidoteniazei gâștelor, a cestodozei carnivore, a ascariozei de porc și a ascariozei de pui.

Reacții imunologice

Alergic reacții cutanate propus pentru diagnosticul intravital al fascioliozei ovinelor, opistorhiazei carnivorelor și moniesiozei ovinelor, hemonohozei și dictiocaulozei ovinelor, onchocercioza bovinelor și a cailor și a triquinozei porcilor.

De metode serologice este necesar să se sublinieze reacția de scolexoprecipitare, care face posibilă diagnosticarea stadiilor incipiente ale echinococozei și a reacției de precipitare folosind larvele vii de Ascaris și Trichinella pentru a identifica helmintiasele corespunzătoare.

Cercetarea gazdelor intermediare ale helmintilor

Rezultatele examinării helmintologice ale animalelor ar trebui să fie întotdeauna completate cu date din studii privind helmintiaza gazdelor intermediare. Acestea vă permit să aflați situația helmintologică, să prevedeți apariția helmintiazei. Gazdele intermediare ale helmintilor pot fi moluște (de apă dulce și terestre), crustacee (ciclopi, dafnii, amfipode, măgari de apă), viermi, insecte (muște, mușchi, mușchi mușcătoare, libelule, furnici, gândaci), clopote de sol.

Densitatea ( compoziția cantitativă) anumite tipuri de gazde intermediare. Cu cât este mai mare, cu atât există mai multe oportunități de a încărca animalele cu helmintiaze. Gazdele intermediare terestre sunt situate în locuri diferite (în grămezi de gunoi de grajd, pe râpe, pășuni etc.). Gazdele intermediare acvatice trăiesc în număr mare în apropierea țărmurilor rezervoarelor stagnante de mică adâncime, în desișuri de plante. În aceste locuri, animalele (în special) sunt deseori infectate cu helmintiaze.

Gazdele intermediare ar trebui examinate pentru a observa prezența larvelor de helminți într-o stare proaspătă (de preferință vie) sub lupă binoculară sau mărire redusă a microscopului. Etapele larvele ale helmintilor din corpul gazdelor intermediare se află în diferite stadii de dezvoltare, dar cele mai vizibile sunt larvele invazive. Ca rezultat al cercetării, se determină extensivitatea (procentul) și intensitatea (numărul) invaziei gazdelor intermediare de către larvele anumitor tipuri de helminti.

Oribatid sau blindat, acarieni (până la 1 mm lungime). A locui în straturi superioare sol. Acestea sunt gazde intermediare ale moniesiei rumegătoarelor și ale altor helminti. Pentru a detecta larvele de viermi (cysticerroids), într-o picătură de apă pe o lamă de sticlă (sub controlul unei lupe), coaja unui acarian oribatid este împărțită în părți, apoi preparatul este acoperit cu o sticlă de acoperire și microscopat. Cisticercoidele moniesium sunt rotunjite (0,15-0,19 mm în diametru), echipate cu patru ventuze și un apendice caudal. Acestea sunt foarte delicate, prin urmare, nu trebuie utilizată metoda de testare prin compresor a căpușelor.

Râmele de pământ din alte genuri (Criodrilus, Eophila) trăiesc în rezervoare cu maluri noroioase, noroioase. Sunt înregistrați ca gazde intermediare ale agenților patogeni ai rațelor histricoză și porrocecoză. Larva gistrichisului este foarte mare (până la 3 cm lungime), de culoare albicioasă, translucidă prin pielea viermelui sub forma unei benzi ondulate. Larvele Porrocecum sunt de zece ori mai mici decât larva anterioară (2,5-3 mm); apar în vase de sânge cu examinarea prin compresor a râmelor la microscop.

Studiul amfipodelor. Bocoplavii ating o lungime de până la 2 cm și trăiesc în corpuri de apă marine și de apă dulce. Ele sunt înregistrate ca gazde intermediare ale agenților patogeni ai polimorfismului. streptocaroză și tetrameroza păsărilor. Larvele se găsesc în timpul studiului la compresor al acestor crustacei. Larvele (acantella) ale polimorfului oval, portocaliu, cu o lungime de până la 1 mm, sunt vizibile macroscopic.

Cercetări asupra măgarilor cu apă. Măgarii de apă de la 1 la 1,5 cm lungime, trăiesc în rezervoare de apă dulce, sunt gazde intermediare ale agentului cauzal al filicolozei păsărilor. Un studiu al compresorului poate dezvălui o larvă (acanthella) alb, oval, 0,7 mm lungime.

De asemenea, puteți investiga alte gazde intermediare (mușchi, mușchi mușcătoare, muște, libelule, gândaci, furnici).

Microscopie cu luminiscență

Metoda de microscopie a luminiscenței (conform V.G. Evranova) - metodă nouă diagnosticarea helmintiazei. Vă permite să diferențiați ouăle de același tip de diferite tipuri de helminți, precum și să distingeți ouă și larve viabile de cele moarte. Anterior, ouăle de trematode, cestode și nematode sunt tratate cu soluții de acridină portocalie și alți fluorocromi. Ouăle viabile și larvele de nematode nu luminează sau luminează slab, în \u200b\u200btimp ce cele moarte strălucesc puternic și sunt colorate în portocaliu, galben-verde sau galben.

Cu microscopia de luminiscență, este posibil să se diferențieze ouăle principalelor cestode carnivore, ouăle agenților patogeni și heterocitoza găinilor, care, după cum știți, au o structură similară ca mărime, formă și culoare și, de asemenea, fac distincția între viabil și mort. oociste coccidiale.

Preparatele sunt examinate la microscop MUF-3 sau ML-2. Tehnica microscopiei cu fluorescență este relativ simplă și poate fi utilizată în condiții industriale (laboratoare veterinare).

Din alte studii care au valoare accesorie în stabilirea unui diagnostic de helmintiază. puteți indica, de exemplu, elucidarea compoziției morfologice a sângelui (reprezentând eozinofilia), o metodă de determinare a fracției de proteine.

Scurte caracteristici ale ouălor de helmint

Ouăle reprezentanților diferitelor clase diferă în ceea ce privește dimensiunea, culoarea, forma, structura cochiliilor și conținutul intern.

Ouă trematode. Mai des oval cu capac pe un stâlp. Coaja este netedă. La unele specii, coaja este echipată cu filamente (procese), tuberculi. Culoarea ouălor este de la gri deschis la maro (de obicei galben).

Cestode ouă. Există două tipuri: viermi și viermi. La tenii, acestea seamănă cu ouăle trematode (ovale cu capac). Ouăle de tenii diferă brusc în structură de ouăle helminților din alte clase: sunt mai des de dimensiuni medii, rotunjite, gri, mature (în interiorul embrionului este o oncosferă cu trei perechi de cârlige embrionare).

Ouă de nematode. Se deosebesc de ouăle trematodelor în absența unui capac; din ouă cestode - absența oncosferei.

Dimensiunile, forma, structura și culoarea cojilor de ouă nematode sunt foarte diverse. Coaja exterioară este netedă, accidentată, celulară: grosimea cojilor variază de la subțire (la strongilați) la groasă (la tricocefalică). În majoritatea nematodelor, ouăle au formă ovală, simetrice, în unele au primit ouă cilindrice (la dragoni). Majoritatea nematodelor excretă ouă imature în stadiul de presegmentare sau mai multe bile de scindare, o minoritate - matură (o larvă se formează în interiorul oului).

Ouă răzuitoare. Sunt ovale, elipsoidale și în formă de fus: dimensiunea lor este de la mediu la mare. Ouăle eliberate în mediu conțin în interior o larvă - un acantor cu zece cârlige embrionare (mature).

Observații clinice

Date epizootologice

În diagnosticul multor helmintiaze ale animalelor de fermă, un ajutor semnificativ este oferit de datele epizootologice (problema fermei pentru boli specifice, sezonul anului, vârsta animalelor bolnave, natura pășunilor și a surselor de apă, condițiile meteorologice, etc.). De exemplu, o boală masivă cu semne hidropizii abdominale iar moartea oilor în toamnă după o vară ploioasă și utilizarea zonelor umede de pășuni pentru pășunat oferă motive să suspectăm o formă acută de fasciolioză. Boala puilor în timpul verii cu semne de supărare digestivă (diaree) și a sistemului nervos (pareză) după pășunatul lor într-un corp de apă puțin adânc stagnant, populat abundent de ciclopi, stă la baza unui diagnostic prezumtiv de drepanidotenioză. Moartea mieilor în primăvară (3-4 săptămâni după începerea pășunatului) ar trebui să ridice suspiciuni cu privire la boala oilor tinere cu monieză. De asemenea, este necesar să se țină seama de caracteristicile zonale ale helmintiazei la animalele domestice, de preferință în combinație cu observațiile clinice.

Examenul fecal

Microscopia se efectuează inițial la mărire redusă (X80). Cele mai simple pot fi înlocuite de refracția mai puternică a luminii, iar unele specii prin mișcarea sau schimbarea formei lor. Un obiect văzut la mărire mică este vizualizat la mărire 400 sau 600. În absența experienței, frotiurile ar trebui privite imediat la mărire mare, ceea ce, totuși, mărește semnificativ timpul de studiu al specimenului. Vizualizarea loviturilor la mărire mare trebuie făcută în condiții de iluminare mai puternică, reglând-o cu un condensator.

Semnele diferențiale ale anumitor tipuri de amoebe într-un frotiu nativ sunt forma și dimensiunea corpului, vizibilitatea nucleului, natura formării pseudopodiei, mișcarea, divizarea citoplasmei în ecto- și endoplasmă, natura incluziunilor (eritrocite fagocitate etc.). În diferențierea speciilor flagelate - dimensiunea și forma corpului, numărul flagelilor, natura mișcării, prezența sau absența unei membrane ondulate. Semnele specifice ale balantidiei sunt mărimea, forma corpului, mișcarea, cilii, citostomia etc.

Principalul semn distinctiv formele vegetative ale protozoarelor într-o stare vie este mișcarea. În frotiuri, există diferite tipuri de formațiuni imobile - fibre vegetale, fibre musculare, spori, ciuperci etc. Acestea nu trebuie luate în considerare în diagnosticul protozoologic.

Metoda frotiului nativ este simplă și accesibilă oricărui laborator. Permite, atunci când se găsesc forme tisulare de amebă disenterică cu eritrocite fagocitate, să facă un diagnostic complet precis al dizenteriei amebice, iar atunci când se găsesc balantidia și lamblia, un diagnostic de balantidiază și giardioză.

Pătarea cu pete cu soluția Lugol ... Această culoare este utilizată pentru diagnosticarea protozoarelor de către chisturi. Se folosește în studiul fecalelor formalizate, semiformate și moale.

Pentru sfârșitul preparării frotiului băț de lemn se murdărește în fecale și se spală într-o picătură soluție de iod (J - 1,0 g, KJ - 2 g, apă distilată - 100 ml), aplicat pe o lamă de sticlă, până se obține o emulsie uniformă. Acoperiți preparatul cu un pahar de acoperire și după 3 - 5 minute. microscopie. Frotiul ar trebui să fie suficient de clar pentru a fi vizualizat în lumina transmisă.

Dintre rămășițele alimentelor nedigerate, sporii, ciupercile, bacteriile iodofile, chisturile protozoare, vopsite în maro sau galben verzui, se remarcă într-o formă strict definită, caracteristică fiecărei specii, ca dimensiune, contururi distincte ale marginilor, prezența o membrană netedă, transparentă, cu contur dublu, conținutul citoplasmei, precum și prezența nucleelor \u200b\u200bcu o structură indistinctă. La chisturile amibei, se observă vacuole glicogene de culoare maro (maro închis). Gradul de culoare al acestor vacuole și conturul limitelor lor variază în chisturile protozoare ale aceleiași specii, în funcție de maturitatea lor.