Дизентерия – инфекционное заболевание, характеризующееся поражением желудочно-кишечного тракта, преимущественно толстой кишки. Возбудители этой болезни – бактерии рода Шигелла или гистолитические амёбы – способны долго сохранять свою жизнеспособность во внешних условиях. Проникновение патогенного микроорганизма может произойти через употребление загрязнённой пищи, воды или посредством контакта с уже больным человеком. Очень важно ориентироваться в симптомах заболевания, чтобы иметь возможность вовремя заподозрить наличие проблемы и приступить к её устранению.

Симптомы дизентерии

Продолжительность инкубационного периода составляет от нескольких часов до недели (в среднем три дня). Симптомы заболевания зависят от конкретного вида микроорганизма, общего состояния пациента, наличия прочих болезней и других факторов. Для дизентерии характерны следующие признаки:

• увеличение показателей температуры тела;
• болезненные ощущения внизу живота;
• возникновение ложных позывов к опорожнению кишечника;
• понос, иногда с примесями крови или слизи;
• снижение аппетита, общая слабость;
• рвота;
• обезвоживание.

Можно рассматривать проявления недуга в зависимости от того, в какой именно форме он протекает у пациента.

Как протекает шигеллёз

Признаки в зависимости от формы болезни - таблица

Форма дизентерии		Типичные симптомы
(имеет все типичные признаки недуга, описанные выше, но степень их проявления зависит от тяжести проблемы)	колитическое течение	повышение температуры; нарушение аппетита; тошнота и рвота; резкие болезненные ощущения в животе, которые постепенно концентрируются в нижней части брюшной полости; испражнения частые и жидкие, с примесями слизи, гноя или крови.
	гастроэнтерическое течение	На фоне общей интоксикации (повышение температуры, головокружение, сильная слабость, нарушение сна и аппетита) появляются тошнота и частая рвота. Боль локализуется в области пупка, имеет эпизодический характер. Патологические примеси в жидком стуле отсутствуют.
Хроническая (продолжается более трёх месяцев)	рецедивирующая	Возникают периодические эпизоды острой симптоматики заболевания, которые сменяются периодами нормального самочувствия пациента.
	непрерывная	Признаков интоксикации нет, но пациента беспокоит постоянная диарея и боли. Такое течение часто ведёт к развитию серьёзных осложнений и нарушению работы пищеварительной системы.
Бактерионосительство	реконвалесцентное	Возникает после перенесения заболевания в острой форме. Бессимптомное течение.
	субклиническое	Последствие стёртой формы дизентерии. Отсутствие клинических проявлений и изменений в слизистой оболочке дистального отдела толстой кишки.

Также можно говорить о классификации дизентерии в зависимости от конкретного возбудителя.

Симптомы в зависимости от типа возбудителя - таблица

Тип возбудителя		Симптоматика
Амёбная форма		Поражение одноклеточными микроорганизмами, которое сопровождается: головными болями; общей слабостью; тупыми болями в животе; жидким стулом.
Бактериальная форма	вызываемая шигеллами Зоне	Первые симптомы – признаки интоксикации организма: повышение температуры; головокружение; сильная слабость; нарушение сна и аппетита; тошнота и пр. При тяжёлых формах течения падает артериальное давление, поднимается высокая температура. Сильных деструктивных изменений в кишечнике обычно не обнаруживают.
	вызываемая шигеллами Флекснера	Больные жалуются на: общую слабость, головокружение, тошноту; усиление перистальтики кишечника, нарушение сна; схваткообразную боль в животе, которая стихает после опорожнения кишечника; частые позывы к дефекации (порой до 20–25 раз в сутки); повышение температуры; боли при мочеиспускании (редко). Кожа больных дизентерией бледная и сухая. Возможно появление прыщей на лице и теле. Язык покрыт обильным буро-белым налётом. Кроме того, в кале обнаруживают примеси крови.
	вызываемая шигеллами Григорьева-Шиги	Протекает обычно тяжело, высок риск осложнений в виде токсического шока и сепсиса. Этой форме также характерны следующие признаки: диарея (при этом в испражнениях наблюдается примесь слизи, крови и гноя); сильное обезвоживание организма; повышение температуры тела до 40°С.

Помимо кишечника, в процесс могут вовлекаться и прочие органы пищеварения. Длительное нарушение нормальной работы тракта приводит к анемии и гиповитаминозу.

Диагностика недуга

В большинстве случаев процесс диагностирования такого заболевания, как дизентерия, не представляет сложностей. За помощью следует обращаться к врачу инфекционисту-эпидемиологу, который поставит правильный диагноз и назначит лечение.

Лабораторная диагностика

Наиболее распространёнными являются следующие исследования:

• бактериологическое. В рамках данного анализа в качестве сырья используют кал больного человека, что позволяет определить возбудителя;
• экспресс-метод. В качестве этого метода применяется ИФА – иммунофлюоресцентный анализ на наличие болезнетворных микроорганизмов;
• анализ кала, при помощи которого выявляется присутствие кровяных прожилок, свидетельствующих о повреждении слизистых оболочек кишечника;
• ректороманоскопия. Это метод исследования кишечника, осуществляющийся при помощи специального оборудования, позволяющего выявить поражения слизистой конечного отдела толстого кишечника.

Бактериологическое исследование при шигеллёзе

Дифференциальная

В рамках дифференциальной диагностики дизентерию следует отличить от болезней, вызывающих схожую симптоматику:

При этом сходные проявления могут давать отравления солями тяжёлых металлов, грибами и т. д. Также следует дифференцировать синдром от острых хирургических недугов:

• тромбоз мезентериальных сосудов;
• аппендицит острой формы;
• кишечная непроходимость.

Нередко похожие симптомы присутствуют при ряде гинекологических нарушений, к примеру:

• внематочная беременность;
• пельвиоперитонит (воспалительный процесс во внутренних половых органах);
• аднексит (воспаление труб матки и яичников) и т. д.

Особенности заболевания у детей

В раннем возрасте симптоматические проявления дизентерии имеют характерные особенности:

• стул может сохранять свою нормальную форму, а может выходить жидким, однако он обязательно становится более зловонным и обильным, меняет цвет на зеленоватый с примесями комочков слизи;
• во время акта дефекации малыш плачет и проявляет нетипичное беспокойство;
• животик вздувается;
• снижается аппетит;
• могут возникнуть симптомы присоединения вторичной инфекции (чаще всего в форме отита или пневмонии – воспаления лёгких);
• течение заболевания обычно волнообразное, эпизоды обострений периодически стихают.

Замечание врача: многократная рвота у грудничка очень быстро приводит к обезвоживанию организма, что является очень опасным состоянием для малыша. На этом фоне могут появиться судороги и нарушение работы сердца, поэтому необходимо срочно вызвать врача.

У детей в старшем возрасте симптомы обычно аналогичны жалобам взрослых. Что касается диагностики, то она не имеет особенностей в детском возрасте, применяются все те методы, что уже были описаны ранее.

Как протекает дизентерия - видео

Проявления дизентерии можно назвать характерными для целого ряда заболеваний, поражающих кишечник. Для точной постановки диагноза необходимо провести комплекс исследований. По их результатам становится возможным назначение лечения.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

(схема 13.1.2). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические сре­ды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хло­рида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уко­лом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы стол­бика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столби­ка - при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использо­вать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахаро­за, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие раз­личать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу.

Оставшуюся часть колоний используют для постановки ори­ентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью ди­зентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмо­нелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 13.1.2) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чув­ствительности возбудителя к антимикробным препаратам.

Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Таблица 13.1.2. Биохимические признаки бактерий рода Shigella

S.dysenteriae _____ в -

S.flexneri - - + - - в -

S.boydii - - + - в в -

S.sonnei - [+] + [+] в - +

Условные обозначения: (+) -положительная реакция; (^ - от­рицательная реакция; [+] - поздняя реакция; в - вариабельная реакция.

Серодиагностика. Применяют для ретроспективного обосно­вания диагноза дизентерии при стертых и хронических формах. Ставят развернутую реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РИГА с эритроцитарными диагностикумами Флекс-нера и Зонне. Диагностическим титром при дизентерии, вы­званной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне - 1:100.

Микробиологическая диагностика геликобактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из поражен­ного участка слизистой оболочки желудка или двенадцати­перстной кишки.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Обнаружение возбудителя в гистологических препаратах, окрашенных по методу Рома­новского-Гимзы, Грама, гематоксилин-эозином и др., а также с помощью фазово-контрастной и электронной микро­скопии. Helicobacter pylori - мелкие грамотрицательные изо­гнутые, S-образные или спиралевидные (2-3 завитка) бакте­рии. H.pylori имеют 4-6 жгутиков, расположенных на одном из полюсов - лофотрихи.

Бактериологическое исследование. Посев на богатые пита­тельные среды ("шоколадный агар" и др.), содержащие гемоли-зированную кровь, сердечно-мозговой настой, дрожжевой экстракт и антимикробные препараты (ванкомицин, налидиксо-вую кислоту и амфотерицин В) для подавления роста сопутст­вующей микрофлоры. Инкубация посевов осуществляется при 37 °С в микроаэрофильных условиях (в атмосфере, содержащей не более 5 % 0 2 и 10 % С0 2) при повышенной влажности в течение 7 сут. Рост колоний обычно наблюдается на 3-4-е сутки. Идентификация чистой культуры осуществляется на ос­новании морфологии, подвижности, культуральных, биохими-

ческих признаков, чувствительности к антимикробным пре­паратам.

Типирование штаммов возбудителей для эпидемиологическо­го анализа проводят методом рестрикционного анализа ДНК.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования: биохими­ческие исследования. Выявление бактериального фермен­та уреазы.

♦ Определение уреазной активности в биоптате. Биоптат
помещают в бульон, содержащий мочевину и индикатор.
В положительных случаях происходит изменение цвета
индикатора в результате защелачивания среды при гид­
ролизе мочевины с образованием аммиака.

♦ Дыхательный тест на уреазу. После перорального приема
мочевины, меченной радиоактивным изотопом 14 С, оп­
ределяют присутствие меченой двуокиси углерода 14 С0 2
в выдыхаемом воздухе. Появление 14 С0 2 свидетельствует
об активности уреазы (результат гидролиза меченой мо­
чевины), что является косвенным признаком присутст­
вия в желудке или двенадцатиперстной кишке H.pylori.
Тест используют преимущественно для предварительной
диагностики и контроля результатов лечения.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителя и уреа-зе. Используют методы: ИФА, РИА и РИГА.

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, рек­тальные мазки, при генерализованной форме инфекции - кровь, спинномозговая жидкость. При необходимости хране­ния материал помещают в транспортную среду (буферный со­левой раствор с добавлением нейтрального угля и метиленово-го синего или тиогликолевый бульон) при температуре 4 "С, что позволяет микробам сохранять жизнеспособность до 4 сут.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическая диагностика. Производят посев на спе­циальные плотные среды, обогащенные аминокислотами с до­бавлением гемолизированной крови или нейтрального угля (для удаления токсичных метаболитов кислорода) и 3-5 анти­биотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры (обычно используют ванкомицин, полимиксин, триметоприм,

Амфотерицин В и др.). Инкубация посевов осуществляется при 42 "С в микроаэрофильных условиях - в атмосфере, содержа­щей не более 5 % 0 2 и 10 % С0 2 . Рост колоний наблюдается через 48-72 ч. Идентификация чистой культуры осуществля­ется на основании морфологии: мелкие грамотрицательные S-образно или спиралевидно (2-3 завитка) изогнутые микро­организмы, моно- или амфитрихи; используют темнопольный и фазово-контрастный методы исследования для выявления характерной подвижности - штопорообразные движения, куль-туральных, биохимических признаков, чувствительности к антимикробным препаратам. Разработаны также биохимичес­кие (хемоидентификация) и молекулярно-биологические мето­ды идентификации (см. главу 3).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, ис­пользуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно"поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Применяют преимущественно для ретро­спективной диагностики - антитела определяют в парных сы­воротках в реакциях РСК, РИГА и др.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишеч­ных палочек: ОВ-коли-сыворотка 026:В6, ОВ-коли-сыворотка 0111: В 4 , ОВ-коли-сыворотка 055:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентифи­кации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентифи­кации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыво­ротки. Получают путем иммунизации кроликов определенны­ми видами и сероварами S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonnei и S.boydi с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков - коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилакти­ческими целями (см. тему 13.2).

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспо-рины 2-4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.

Тема 13.2. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И ИЕРСИНИОЗОВ. ДИСБАКТЕРИОЗ

Современная классификация бактерий рода Salmonella. Род

Salmonella включает 2 вида: S.enterica (2307 сероваров) и S.bon-gori (17 сероваров). Вид S.enterica включает 5 подвидов: enterica (I), salamae (II), arizonae (Ilia), diarisonae (Illb), houtenae (IV), indica (V), которые выделены на основании молекулярно-гене-тических признаков (гибридизационного анализа ДНК) и фе-нотипически различаются по биохимическим свойствам. Внут­ри подвидов сальмонеллы подразделяются на серовары по О-и Н-антигенам согласно классификации Кауфмана-Уайта. Не­обходимо помнить, что представители разных подвидов могут иметь общие или идентичные антигены. Абсолютное большин­ство сероваров (1367) относятся к подвиду enterica. Согласно ранее существовавшей классификации, сальмонеллы - предста­вители различных сероваров - рассматривались как самостоя­тельные виды и имели собственные видовые названия. В на­стоящее время старые видовые названия используют для обо­значения биоваров (сероваров), например S.enterica подвида enterica серовара typhimurium соответствует S.typhimurium, серо­вара typhi - S.typhi, серовара paratyphi A - S.paratyphi Л и т.д. Природным резервуаром бактерий S.enterica подвида enterica являются теплокровные животные, для остальных - холодно­кровные животные и окружающая среда. Возбудители заболе­ваний человека относятся к подвиду enterica.

С эпидемиологической точки зрения сальмонеллы, вызы­вающие заболевания человека, относят к трем основным груп­пам. Первая группа включает 3 биовара: typhi, paratyphi А и С, которые являются возбудителями строгих антропонозов (ин­фицируют только человека и передаются от человека к чело­веку прямо или опосредованно - через пищу, воду). Вторая группа включает серовары, которые адаптировались к опреде­ленному виду животных. Некоторые из этих сероваров пато­генны для человека (dublin, gallinarum, schottmulleri и др.). К третьей группе относятся большинство сероваров, не имею­щих специфических хозяев и способных инфицировать как человека, так и животных. По клинической классификации сальмонеллы подразделяют на возбудителей брюшного тифа (биовар typhi) и паратифов (биовары paratyphi А, С и schottmul­leri) и возбудителей сальмонеллезов, включающих все осталь­ные биовары сальмонелл, патогенных для человека. Большин­ство возбудителей сальмонеллезов относится к третьей группе по эпидемиологической классификации.

а План

Программа

1. Биологические свойства возбудителей брюшного ти­фа, паратифов и иерсиниозов. Их патогенность, эко­логия, особенности инфекции и эпидемиология вы­зываемых заболеваний. Дисбактериоз.

2. Лабораторная диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

А Демонстрация

1. Мазки из чистых культур возбудителей кишечных ин­фекций: Salmonella enterica биоваров typhi, paratyphi A, typhimurium, Proteus vulgaris. Окраска по методу Грама.

2. Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

А Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Лабораторная диагностика кишечных инфекций.

2.1. Диагностика брюшного тифа и паратифов.
А. Бактериологическая диагностика:

2) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на среду Раппопорт;

3) учесть результаты пересева бактерий со среды Раппопорт на среду Эндо. Описать и зарисо­вать колонии, выросшие на среде Эндо, и обо­сновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

4) учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний со среды Эндо на среду Ресселя;

5) учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам;

6) сделать вывод и наметить план дальнейшего исследования.

Б. Серодиагностика. Проанализировать результаты реакции Видаля.

2.2. Бактериологическая диагностика сальмонеллезов:

1) выбрать материал для исследования;

2) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на висмут-сульфит агар. Опи­сать и зарисовать колонии и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего ис­следования;

3) учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний на среду Ресселя;

4) учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам;

5) сделать вывод и наметить план дальнейшего исследования.

3. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи­лактическими препаратами.

А Методические указания

Микробиологическая диагностика брюшного тифа и пара­тифов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особеннос­тей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (полу­чение гемокультуры), со 2-й недели заболевания - из испраж­нений (получение копрокультуры), мочи или желчи.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование (схема 13.2.1).

Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5-10 мл крови и засевают в колбу с 50-100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотно­шения крови и среды необходимы для подавления бактерицид­ного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 "С в течение 18-20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюда­ется помутнение и изменение цвета среды. При росте парати­фозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в по­плавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают маз­ки и препараты "висячая" капля. При наличии чистой культу­ры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентифика­ции. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.

На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Рес­селя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на сте­кле. На основании полученных данных дают второй предвари­тельный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают не­сколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для кон­троля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды "пестрого" ряда и серотипируют в реакции агглюти­нации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с

Typhi - К К - К + -

Paratyphi А - КГ КГ - КГ - -
Schottmuelleri - КГ КГ - КГ + +

Условные обозначения: К - образование кислоты; КГ - образо­вание кислоты и газа; (+) - обнаружение признака; (-) - отсутствие признака.

Биохимические признаки (развернутый "пестрый" ряд) по­зволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих с ними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).

Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам

Salmonella ± К(-) К К К - - -

Citrobacter - К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + - - К К К(+) - К

Условные обозначения: (+) - положительная реакция; (-) - от­рицательная реакция; ± - вариабельная реакция; К - образование кисло­ты; К(-) - образование кислоты (редко); К(±) - образование кислоты (вариабельно).

Выделенную чистую культуру бактерий используют для оп­ределения чувствительности к антимикробным препаратам.

Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi- фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuel­leri) дифференцируются на 11 фаготипов и подтипов.

Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-

Товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков сус­пензию петлей наносят на поверхность агаровой среды - на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпате­лем по одной, а затем по другой половине чашки для получе­ния изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18-20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2-3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ста­вят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с ма­териалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый мате­риал, полученный из очага инфекции, используют для обнару­жения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаруже­ния соответствующих молекул можно поставить предваритель­ный диагноз.

Серодиагностика. В лабораторной практике широко приме­няют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител - агглюти­нинов, которые появляются в конце 1-й - начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя анти­генами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы при­меняют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, при­чем в довольно высоком титре, поэтому "инфекционный Ви-даль" удается отличить от "прививочного" только по нараста­нию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 проби­рок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который до­бавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с

1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диа­гностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологи­ческого исследования реконвалесцентов и выявления бакте­рионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, пред­ставляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz"-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубрен­ными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эрит­роциты осаждаются на дно пробирки и имеют вид диска с ровными краями ("пуговки"). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рас­сматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическо­му обследованию.

Похожая информация.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 28.

Тема занятия:

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, этиотропной терапии и профилактики шигеллезов.

Модуль 2 . Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Тема 5: Методы микробиологической диагностики дизентерии.

Актуальность темы: Шигеллезы распространены повсеместно и представляют серьезную проблему в странах с низким санитарным культурным уровнем и большой частотой случаев недостаточного и некачественного питания. В развивающихся странах распространению инфекции благоприятствуют низкий санитарный уровень, несоблюдение правил личной гигиены, перенаселенность и большая доля детей среди населения. В Украине вспышки шигеллеза чаще встречаются в закрытых коллективах на фоне низкого уровня санитарии и гигиены, например, в детских яслях и садах, на туристических судах, в психиатрических клиниках или приютах для инвалидов. Шигеллы были причиной диареи путешественников и туристов.

Причиной групповых заболеваний можно рассматривать употребление пищевых продуктов, загрязненных по халатности торговых работников, являющихся носителями шигелл. Встречаются вспышки, связанные с употреблением питьевой воды, к заражению приводило также плавание в загрязненных водоемах. Вместе с тем пищевой и водный пути передачи играют, по-видимому, меньшую роль в распространении шигеллезов по сравнению с холерой и брюшным тифом, при которых для заражения человека обычно требуются большие дозы возбудителей. В развивающихся странах, где распространение болезни происходит преимущественно от человека человеку, носители могут быть важным резервуаром возбудителя инфекции. У больных, не принимавших антибактериальных препаратов, выделение шигелл с фекалиями обычно продолжается в течение 1—4 нед, однако в небольшой части случаев продолжается значительно дольше.

Шигеллез - острая бактериальная инфекция кишечника, вызываемая одним из четырех видов шигелл. Спектр клинических форм инфекции включает и легкую, водянистую диарею, и тяжелую дизентерию, для которой характерны схваткообразные боли в области живота, тенезмы, лихорадка и признаки общей интоксикации.

Этиология.

Род Shigella (получил название по имени К. Шига, который в 1898г. детально изучил и описал выделенный возбудитель бактериальной дизентерии А.В. Григорьевым) семейства Enterobacteriaceae состоит из группы тесно связанных видов бактерий, имеющих следующие свойства:

І. Морфологические : шигеллы - небольшие палочки с закругленными концами. Отличаются от остальных представителей семейства Enterobacteriaceae отсутствием жгутиков (неподвижны), не имеют спор и капсул, грамотрицательны.

ІІ. Культуральные : шигеллы – это аэробы или факультативные анаэробы; оптимальные условия культивирования — температура 37°С, рН 7,2–7,4. Растут на простых питательных средах (МПА, МПБ) в виде небольших, блестящих, полупрозрачных, сероватых, круглых колоний, размером 1,5–2 мм в S –форме. Исключением являются шигеллы Зонне, которые часто диссоциируют, образуя крупные, плоские, мутные, с изрезанными краями колонии R –формы (колонии имеют вид “виноградного листа”). В жидких питательных средах шигеллы дают равномерное помутнение, R –формы образуют осадок. Жидкой средой обогащения является селенитовый бульон.

ІІІ. Ферментативные : основными биохимическими признаками, необходимыми для идентификации шигелл при выделении чистой культуры являются следующие:

1. отсутствие газообразования при ферментации глюкозы;
2. отсутствие продукции сероводорода;
3. отсутствие ферментации лактозы в течение 48 часов.

В целом четыре вида разделяются далее примерно на 40 серотипов. По характеристикам основных соматических (О) антигенов и биохимическим свойствам выделяют следующие четыре вида или группы: S. dysenteriae (группа A, включает: Григорьева-Шиги, Штутцера-Шмитца, Лардж-Сакса), S. flexneri (группа В), S. boydii (группа С) и S. sonnei (группа D).

По отношению к манниту все шигеллы делятся на расщепляющие (шигеллы Флекснера, Бойда, Зонне) и нерасщепляющие (шигеллы Григорьева-Шиги, Штутцера-Шмитца, Лардж-Сакса) маннит.

ІV. Факторы патогенности:

1. Плазмида инвазии – обеспечивает способность шигелл вызывать инвазию с последующим межклеточным распространением и размножением в эпителии слизистой толстого кишечника;
2. Токсинообразование : Шигеллы имеют липополисахаридный эндотоксин, который по химическим и биохимическим свойствам подобен эндотоксинам других представителей семейства Enterobacteriaceae. Кроме того, S. dysenteriae тип I (палочка Шига) вырабатывает экзотоксин. С момента открытия последнего было установлено, что он обладает активностью энтеротоксина и может вызывать кишечную секрецию, равно как и оказывать цитотоксическое действие, направленное против клеток кишечного эпителия; оказывает нейротоксическое действие, которое отмечается у детей, больных шигеллезом. Шига-токсин, попадая в кровь, наряду с поражением эндотелия подслизистой поражает также гломерулы почки, вследствие чего помимо кровавого поноса развивается гемолитический уремический синдром с развитием почечной недостаточности.

V . Антигенная структура: все шигеллы обладают соматическим О-антигеном, в зависимости от строения которого происходит их подразделение на серовары.

VІ. Резистентность: Температура 100 0 С убивает шигеллы мгновенно. К низким температурам шигеллы устойчивы – в речной воде они сохраняются до 3-х месяцев, на овощах и фруктах – до 15 месяцев. При благоприятных условиях шигеллы способны к размножению в пищевых продуктах (салатах, винегретах, вареном мясе, фарше, вареной рыбе, молоке и молочных продуктах, компотах и киселях), особенно шигеллы Зонне.

Эпидемиология.

1. Источник инфекции: Человек, болеющий острой и хронической формой шигеллёза; бактерионоситель.

2. Пути передачи :

• Пищевой (преимущественно для S. sonnei)
• Водный (преимущественно для S. flexneri)
• Контактно-бытовой (преимущественно для S. dysenteriae)

3. Входными воротами инфекции служит желудочно-кишечный тракт.

Патогенез и патологические изменения.

После заглатывания шигеллы колонизируют верхние отделы тонкой кишки и размножаются там, возможно, вызывая повышенную секрецию на ранней стадии инфекции. Затем шигеллы пенетрируют через М-клетки в подслизистую, где поглощаются макрофагами. Это приводит к гибели части шигелл, следствием чего является выделение медиаторов воспаления, которые и инициируют воспаление в подслизистой. Апоптоз фагоцитов позволяет другой части шигелл сохраниться и проникнуть в эпителиальные клетки слизистой через базальную мембрану. Внутри энтероцитов происходит размножение шигелл и их межклеточное распространение, следствием чего является развитие эрозий. При гибели шигелл происходит выделение шига и шигаподобных токсинов, действие которых приводит к интоксикации. Поражение слизистой оболочки сопровождается отечностью, некрозами и геморрагией, что обуславливает появление крови в испражнениях. Кроме того, токсин влияет на ЦНС, что приводит к трофическим расстройствам.

Клинические проявления .

Спектр клинических проявлений шигеллезов весьма широк — от легкой диареи до тяжелой дизентерии со схваткообразными болями в области живота, тенезмами, лихорадкой и общей интоксикацией.

Инкубационный период колеблется от нескольких часов до 7 суток, чаще всего составляет 2-3 дня. Вначале у больных отмечаются водянистый стул, лихорадка (до 41°С), разлитые боли в области живота, тошнота и рвота. Наряду с этим больные жалуются на миалгии, ознобы, боли в пояснице и головную боль. В ближайшие дни от начала заболевания появляются признаки дизентерии — тенезмы, частый, скудный, кровянисто-слизистый стул. Температура тела постепенно снижается, боли могут локализоваться в нижних квадрантах живота. Интенсивность диареи достигает максимума примерно к концу 1-й недели болезни. Дизентерия с кровянистым стулом встречается чаще и появляется раньше при заболевании, вызванном S. dysenteriae тип I, чем при других формах шигеллезов.

Для шигеллеза Зонне характерно более легкое течение болезни (гастроэнтеритический или гастроэнтероколитический вариант). Лихорадочный период менее продолжительный, явления интоксикации кратковременны, а деструктивные изменения слизистой кишечника не характерны.

Шигеллезу Флекснера в основном свойственны два варианта клинического течения - гастроэнтероколитический и колитический.

Внекишечные осложнения при шигеллезах встречаются редко:

1. Осложнением шигеллезов могут быть развитие кишечного дисбактериоза.
2. Наряду с головными болями могут отмечаться признаки менингита и судорожные припадки.
3. При инфекции, вызванной S. dysenteriae тип I, описаны случаи периферической нейропатии, а во время вспышки гастроэнтерита, вызванного S. boydii, встречались случаи синдрома Гийена-Барре (полиневрит).
4. За исключением детей, страдающих дистрофией, гематогенная диссеминация возбудителя встречается относительно редко, описаны также случаи шигеллезных абсцессов и менингитов.
5. При шигеллезе возможно развитие синдрома Рейтера с артритом, стерильным конъюнктивитом и уретритом, обычно это встречается через 1- 4 нед от начала диареи у больных.
6. У детей шигеллезы сопровождаются гемолитико-уремическим синдромом, часто в сочетании с лейкозоподобными реакциями, тяжелым колитом и циркуляцией эндотоксина, однако при этом обычно бактериемию не выявляют.
7. Весьма редко встречается гнойный кератоконъюнктивит, вызванный шигеллами, попавшими в глаза в результате самозаражения загрязненными пальцами.
8. Гиповолемический шок и ДВС-синдром.
9. Перитонит, гангрена кишки, кишечное кровотечение.

Иммунитет: У человека имеется естественная резистентность к шигеллезной инфекции. После перенесенного заболевания иммунитет не стойкий, а после шигеллеза Зонне – практически отсутствует. При заболевании, вызванном шигеллами Григорьева – Шиги вырабатывается более стойкий антитоксический иммунитет. В защите от инфекции основная роль принадлежит секреторным IgA , предотвращающим адгезию, и цитотоксической антителозависимой активности интраэпителиальных лимфоцитов, которые вместе с секреторными IgA уничтожают шигеллы.

Диагностика и лабораторные исследования.

Цель исследования : выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.

Материал для исследования : испражнения, секционный материал, пищевые продукты.

Методы диагностики: микробиологический (бактериологический, микроскопический (люминисцентная); серологический; биологический; аллергопроба.

Ход исследования:

1 день исследования: Посевы следует делать из свежевыделенных фекалий или с использованием ректальных тампонов (ректальной трубкой); при отсутствии подходящих условий материал необходимо поместить в среду для транспортировки. Для этого следует использовать кишечный агар (среда Мак-Конки или Шигелла-Сальмонелла), умеренно селективный агар ксилоза-лизин-дезоксихолат, КЛД) и питательный бульон (селенитовый бульон). Если время между забором и посевом превышает 2ч, то следует воспользоваться консервирующими растворами: 20% желчный бульон, комбинированная среда Кауффманна.

• Испражнения в глицериновой смеси эмульгируют, каплю эмульсии наносят на среду и шпателем втирают её. Дифференциальными средами для шигелл являются среды Плоскирева, Эндо и ЭМС (агар с эозинметиленовым синим). Среда Плоскирева (в состав среды входят: МПА, лактоза, соли желчных кислот и индикатор – бриллиантовый зеленый) одновременно является и элективной средой для шигелл, т.к. подавляет рост кишечной палочки.
• Параллельно с прямым посевом собранный материал засевают на среду обогащения – селенитовый бульон.
• Все посевы ставят в термостат.

2 день исследования:

• Чашки вынимают из термостата, подозрительные колонии отсевают на среду Ресселя (питательная среда в состав которой входят: агар-агар, индикатор Андреде, 1% лактозы, 0,1% глюкозы) и маннит. Посев производят штрихами по скошенной поверхности и уколом в агаровый столбик. Засеянную среду Ресселя помещают в термостат на 18-24ч (параллельно делают пересев из селенитовой среды на дифференциально-диагностические среды).
• Делают мазки (окраска по Граму), микроскопируют.
• Готовят препараты «висячая» или «раздавленная» капля.
• Постановка ориентировочной РА с поливалентными диагностическими шигеллезными сыворотками.
• Посев подозрительных колоний на скошенный агар.

3 день исследования:

• Микроскопия материала со скошенного агара.
• Культуры, не ферментировавшие лактозу на среде Ресселя, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки (окраска по Граму), проверка чистоты культуры. При наличии грамотрицательных палочек производят посев на среды Гисса, бульон с индикаторными бумажками (для выявления индола и сероводорода) и на лакмусовое молоко.
• Засеянные среды ставят в термостат на 18-24ч.

4 день исследования:

• Учет короткого «пестрого ряда».
• Культуры, подозрительные по своим ферментативным и культуральным свойствам в отношении шигелл, подвергают серологической идентификации. Постановка РА на стекле (типовые и групповые диагностические сыворотки). Постановка развернутой РА.

В качестве ускоренных методов при шигеллезах применяют люминисцентную микроскопию и биологическую пробу (введение вирулентных штаммов шигелл в конъюктивальный мешок (под нижнее веко) морским свинкам – к концу 1-х суток развивается конъюктивит).

Аллергическая проба Цуверкалова – внутрикожная аллергическая проба с дизентерином (введение 0,1 мл дизентерина в область предплечья – положительная реакция в случае образования инфильтрата и гиперемии). Аллергологическую диагностику в настоящее время практически не применяют. Проба Цурвекалова не отличается специфичностью, положительные реакции регистрируют не только при шигеллезе, но и при сальмонеллезе, эшерихиозе, иерсиниозах и др. ОКИ, а иногда и у здоровых лиц.

Лечение и профилактика. Для лечения и для профилактики по эпидемиологическим показаниям используется бактериофаг орального применения, антибиотики после определения антибиотикограммы; в случае возникновения дисбактериоза – препараты пробиотиков для коррекции микрофлоры. Для восполнение потерь жидкостей и электролитов - введения внутрь глюкозо-электролитного раствора.

Конкретные цели:

Интерпретировать биологические свойства возбудителей шигеллезов.

Ознакомиться с классификацией шигелл.

Научиться трактовать патогенетические закономерности инфекционного процесса, вызванного шигеллами.

Определить методы микробиологической диагностики, этиотропной терапии и профилактики шигеллезов.

Уметь:

• Осуществить посев на питательные среды исследуемого материала.
  • Приготовить мазки и окрасить по Граму.
  • Провести микроскопию препаратов с помощью иммерсионного микроскопа.
  • Анализировать морфологические, культуральные, ферментативные признаки шигелл.

Теоретические вопросы:

1. Характеристика возбудителей шигеллезов. Биологические свойства.

2. Классификация шигелл. Принципы, положенные в основу.

3. Эпидемиология, патогенез и клинические особенности шигеллезов.

4. Лабораторная диагностика.

5. Принципы лечения и профилактики шигеллезов.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия демонстрационных препаратов из чистых культур возбудителей шигеллезов.

2. Работа по бактериологической диагностике шигеллезов: изучение посевов фекалий на среде Плоскирева.

3. Пересев подозрительных колоний на среду Ресселя и на МПБ для определения индолообразования и Н 2 S .

4. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы микробиологической диагностики шигеллезов в протокол занятия.

5.Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. - 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. И доп.-М.:Медицина, 1983,-512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: В и ща школа, 1992. - 431с.

4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П. Зыкова. М. «Медицина». – 1977. – 288 с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата, «Казахстан», 1974. – 372 с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. – 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.

4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации шигелл, разбора схемы патогенетических и клинических признаков шигеллезов. Изучение методов лабораторной диагностики шигеллезов. Студенты осуществляют посев биоматериала на питательные среды. Потом готовят микропрепараты, окрашивают их по Граму, проводят микроскопию, зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия.

п/п	Этапы	Время в мин	Способы обучения	Оборудование	Место прове дения
	Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию		Тестовые задания исходного уровня	Таблицы, атлас	Учебная комната
	Самостоятельная работа		Граф логической структуры	Иммерсионный микроскоп, красители, предметные стекла, бактериологические петли, питательные среды, среда Плоскирева, среда Ресселя, «пестрый ряд Гисса»
	Самостоятельная проверка и коррекция освоения материала		Целевые обучающие задания
	Тестовый контроль		Тесты
	Анализ результатов работы

Целевые обучающие задания:

1. От больного ОКИ ребенка получили фекалии (сбор испражнений проводили ректальной трубкой), содержащие слизь, гной. Какой метод экспресс-диагностики необходимо применить?

A . ИФА.

B . РИФ.

C . РА.

D . РСК.

E . РИА.

1. От больного ребенка с острой кишечной инфекцией выделен возбудитель дизентерии. Какие морфологические признаки характерны для возбудителя?

A . Грамотрицательная неподвижная палочка.

B . Грамположительная подвижная палочка.

C . Образует капсулу на питательной среде.

D . Образует споры во внешней среде.

E . Грамположительные стрептобациллы.

3. У пациента, заболевшего три дня назад и жалующегося на температуру 38°С, боли в животе, частый жидкий стул, присутствие крови в кале врач клинически диагностировал бактериальную дизентерию. Какой метод микробиологической диагностики целесообразно применить в этом случае и какой материал надо взять от больного для подтверждения диагноза?

А. Бактериоскопический – кал.

В. Бактериологический – кал.

С. Бактериоскопический – кровь.

D. Бактериологический – мочу.

Е. Серологический – кровь.

4.С фекалий больного выделены шигеллы Зонне. Какие необходимо провести дополнительные исследования для установления источника инфекции?

A . Провести фаготипирование выделенной чистой культуры.

B . Определить антибиотикограмму.

C . Поставить реакцию преципитации.

D . Поставить реакцию связывания комплемента.

E . Поставить реакцию нейтрализации.

5.Среди группы туристов (27 человек), которые использовали для питья воду из озера, через два дня у 7 человек появились симптомы острой диареи. Какой материал для установления этиологии данного заболевания необходимо направить в баклабораторию?

А. Воду, испражнения больных.

В. Воду, кровь больных.

С. Пищевые продукты.

D . Мочу.

Е. Мокроту.

6. Существенный недостаток микроскопического метода диагностики при острых кишечных инфекций – его недостаточная информативность в связи с морфологической идентичностью бактерий семейства Enterobacteriaceae . Что позволяет повысить информативность этого метода?

A . Радиоиммунный анализ.

B . Реакция Кумбса.

C . Иммуноферментный анализ.

D . Реакция опсонизации.

E . Реакция иммунофлюоресценции.

7. Больной 29 лет госпитализирован с приступами рвоты, диареей, тенезмами. Кал с кусочками слизи и примесью крови. При бактериологическом исследовании бактерий с колоний на среде Плоскирева выявлены неподвижные, грамотрицательные палочки, не ферментирующие лактозу. Назовите возбудителя инфекционного процесса.

A . Shigella flexneri .

B . Vibrio eltor .

C. E.Coli.

D. Proteus mirabilis.

E . Salmonella enteritidis .

8. В микробиологическую лабораторию доставлен салат, который предположительно является причиной острой кишечной инфекции. На какие питательные среды производится первичный посев?

A . Желточно-солевой агар, МПБ.

B . МПА, МПБ.

C . Селенитовый бульон, Эндо, Плоскирева.

D . Печеночный бульон, среда Ру.

E . Кровяной агар, щелочной агар.

9. При микробиологическом исследовании мясного фарша выделены бактерии, относящиеся к роду шигелл. Изучение каких свойств микробов позволило прийти к такому заключению?

A . Культуральных, тинкториальных.

B . Антигенных, культуральных.

C . Сахаролитических, протеолитических.

D . Антигенных, иммуногенных.

E . Морфологических, антигенных.

10. При микроскопическом исследовании рвотных масс, взятых от больного с симптомами острой кишечной инфекции, были обнаружены неподвижные палочки. В каком мазке или препарате могла быть изучена подвижность бактерий?

A . В мазке, окрашенном по Граму.

B . В мазке, окрашенном по Цилю - Нельсену.

C . В препарате «толстая капля».

D . В мазке, окрашенном по Нейссеру.

E . В препарате «раздавленная капля».

Алгоритм лабораторной работы :

1. Изучение биологических свойст шигелл.

2. Ознакомление с классификацией шигелл.

3. Разбор схемы патогенетических и клинических проявлений шигеллезов.

4. Изучение методов лабораторной диагностики шигеллезов.

5. Изучение основных принципов терапии и профилактики шигеллезов.

1. Приготовление фиксированных препаратов из бактериальной культуры.
2. Окрашивание микропрепаратов по Граму.
3. Микроскопия микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа , их анализ и зарисовка в протокол занятия.
4. Ми кроскопия и анализ демонстрационных препаратов из чистых культур шигелл.
5. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы лабораторной диагностики шигеллезов в протокол.
6. Оформление протокола.

Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии

Дизентерия - антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella, характеризующееся язвенным поражением толстого кишечника и общей интоксика­цией организма. Классификация возбудителей дизентерии (шигелл) представлена в таблице 12, методы микробиологической диагностики в схеме 13.

Таблица 13.Классификация шигелл

Виды шигелл Серовары шигелл Shigella dysenteriae 1-12 Shigella flexneri 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5,6, var X, var Y Shigella boydii 1-18 Shigella sonnei -

Схема 12.Микробиологическая диагностика дизентерии

Экспресс-методы(индикацияпатогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале) ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК шигелл, РИФ

Микроскопический метод при дизентерии не применяет­ся ввиду морфологического сходства шигелл с другими энтеробактериями.

Бактериологический метод является основным методом лабораторной диагностики дизентерии. Исследуемый материалзасевают на среды Плоскирева и Эндо в чашках Петри, а также на селенитовую среду для накопления, с которой через 16- 18 ч делают пересев на указанные плотные питательные среды. Посе­вы выращивают в термостате при 37 0 С 18 - 24 часов.

На второй день изучают характер колоний. Бесцветные лактозоотрицательные гладкие колонии шигелл пере­севают на одну из полиуглеводных сред (Олькеницкого, Ресселя, Клиглера) для накопления чистой культуры. На 3-й день учитывают характер роста на полиуглеводной среде, а также пересе­вают материал на дифференциальные среды (Гисса и др.) для биохимической идентификации выделенной куль­туры. Определяют антигенную структуру выделенной культуры с помощью ОРА с целью ее идентификации до уровней вида и серовара. На 4-й день учитывают результаты биохими­ческой активности (табл. 14).

Таблица 14. Биохимические свойства шигелл

Виды шигелл Ферментация индол глюкозы лактозы маннита дульцита ксилозы орнитина S. dysenteriae к - - - - - - S. flexneri к - к - - - - S. boydii к - к - ± - - S. sonnei к ± к к + ± к +

Обозначения: «к» – ферментация субстрата с образованием кислоты, «+» - наличие признака, «-« - отсутствие признака, «±» - непостоянный признак.

Шигеллы, в отличие от эшерихий, являются неподвижными микроорганизмами, они не ферментируют лактозу, глюкозу разлагают без образования газа, не декарбоксилируют лизин. Для серотипирования сначала ставят РА на стекле со смесью сывороток против пре­обладающих в данной местности видов и вариантов шигелл, а затем РА на стекле с монорецепторными видовыми сыворотками. Определяют также чувствительность выделенной культуры к поливалентному дизентерийному бактериофагу и антибиотикам. С эпидемиологи­ческой целью определяют фаговар и колициновар выделенных шигелл. Одним из свойств шигелл является их способность вызывать кератит у морских свинок (кератоконъюнктивальная проба)

Серологический метод. Для определения антител в крови больных дизентерией (обычно хронической формой) применяют РНГА с эритроцитарны­ми шигеллезными диагностикумами. Диагностические титры: к шигеллам Флекснера у взрослых - 1:400, у детей до 3 лет - 1:100, у детей старше 3 лет - 1:200, к остальным шигеллам - 1:200. Реакцию ставят, как правило, повторно с сыворот­кой крови, взятой не менее чем через 7 дней; диагностическое значение имеет нарастание титра антител в четыре и более раз.

Экспресс-методы при дизентерии - прямая и непрямая РИФ, реакция ко-агглютинации, ИФА, РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для быстрого обнаружения шигелл в исследуемом материале (обычно в фекалиях), а также ПЦР.

Шигеллез – недуг, вызываемый микробами рода шигелл, которые передаются фекально-оральным путем, вызывают интоксикацию и затрагивают чаще всего конечный отдел толстого кишечника.

Причина развития шигеллеза – микробы семейства энтеробактерий, рода шигелл. Это типично бактериальная инфекция. Под микроскопом микробы выглядят как палочки с закругленными концами. У них нет ни жгутиков, ни ресничек, они не образуют капсул и спор. При окраске по Грамму остаются бесцветными (грамотрицательные бактерии). Имеют различную антигенную структуру и биохимические свойства.

Эти два принципа лежат в основе их классификации.

На данный момент выделяют четыре основных вида возбудителей шигеллеза:

• шигелла дизентерии;
• шигелла Бойда;
• шигелла Флекснера;
• шигелла Зонне.

В зависимости от различных комбинаций серологических и клеточных антигенов выделяют более 70 разновидностей этих микробов. Они имеют экзотоксины, а также термолабильный и термостабильный эндотоксины.

Кстати, шигеллез имеет и другое общепринятое название – дизентерия.

Шигеллы способны проникать в эпителий слизистой толстой кишки и размножаться в нем (инвазивность). Также могут образовывать вещества, которые активно воздействуют на живые клетки (колициногенность). Они устойчивы к различным факторам внешней среды. В почве, воде, пище, а также на поверхности мебели, ткани и посуды сохраняют жизнеспособность до двух недель.

А в сточных водах канализации шигеллы могут жить даже целый месяц. Но быстро погибают под действием прямых солнечных лучей, фенола, а также при кипячении.

Впервые термин «дизентерия» стал употребляться по времена Гиппократа. Тогда он обозначал любой понос с кровью. Лишь в 1891 году А. В. Григорьев обнаружил шигеллу у своих пациентов с признаками воспаления толстого кишечника. В дальнейшем К. Шига окончательно доказал, что причина дизентерии – именно этот микроорганизм. Уже позже различными учеными были открыты остальные разновидности микробов, способных вызвать шигеллез.

Эпидемиология

Шигеллезы – это типично антропонозные инфекции. Заражение происходит исключительно от больного человека. Заболевание при этом может носить как острый, так и хронический характер, или вовсе никак не проявляться (скрытое течение), если речь идет о таком явлении, как носительство инфекционных агентов. В этой ситуации человек не болеет, но может заражать других.

Это опасная ситуация, так как выявить носителя очень сложно.

Передается дизентерия фекально-оральным способом. Пути передачи разные – через пищу, воду, а также через общие предметы обихода. Самым частым является водный путь передачи. Это связано с тем, что вода легко загрязняется, и шигеллы живут в ней достаточно долго. Для заражения детей наиболее характерен контактно-бытовой способ – через загрязненные игрушки, посуду, белье и предметы обихода.

Шигеллезом дети и болеют намного чаще, чем взрослые (60–70%). Наиболее восприимчив ребенок детсадовского возраста (2–7 лет). Что касается сезонности, то данное заболевание чаще возникает в летне-осенний период. Иммунитет после перенесенного инфицирования нестойкий. Выработка антител относится только к одному серотипу.

Патогенез

Дальше по ходу желудочно-кишечного тракта на шигелл воздействуют по очереди соляная кислота и желчь. Под их действием большинство микробов погибает. Дальше возбудитель попадает в конечный отдел толстого кишечника, где уже, наряду с разрушением, происходит и его размножение. Вследствие лизиса микроорганизмов высвобождаются токсины. Всасываясь через слизистую, они проникают в кровь и вызывают в организме острый токсикоз. Затрагивает он, прежде всего, центральную нервную систему, но также нарушается и работа других систем:

• эндокринной;
• сердечно-сосудистой;
• системы свертывания крови;
• мочевыделительной и др.

Вместе с токсическим поражением организма отмечаются еще и воспалительные процессы в слизистой толстого кишечника.

Шигеллы «прилипают» к энтероцитам и затем проникают в них, активно там размножаясь. Из-за этого возбудитель поражает все больше и больше ткани кишечника, и воспаление распространяется.

Но наряду с этим формируются и защитные реакции.

Повышается концентрация IgM, IgG и IgA. Активируются клетки – естественные киллеры, и повышается синтез y- и a-интерферонов. Если иммунная система работает хорошо, то в большинстве случаев шигеллез заканчивается быстрым выздоровлением.

Клиническая картина

В зависимости от вариаций симптоматики есть различные типы и формы шигеллезов. Все это отражено в их классификации. В ее основе только клиническая картина заболевания.

Лабораторные показатели в расчет не берутся, за исключением ситуации их косвенного указания на степень тяжести.

Классификация шигеллезов

По форме:

• типичные;
• атипичные (бессимптомная, стертая, бактерионосительство).

По длительности заболевания:

• острое;
• затяжное;
• хроническое.

По характеру заболевания:

• гладкое;
• негладкое.

По степени тяжести:

• легкая;
• средняя;
• тяжелая.

Симптомы типичной формы

Инфекционным заболеваниям предшествует инкубационный период. Для типичной формы шигеллеза он достаточно вариабелен (от 3–4 часов до семи суток). В среднем этот период длится 2–3 дня. Все зависит от того, какая была доза возбудителя, его агрессивности и путей передачи. Немаловажно и состояние макроогранизма, в который попадает шигелла. У человека с ослабленным иммунитетом продромальный период будет более коротким, а если он хороший, то более длинным.

Начинается дизентерия остро. Все присущие данной патологии симптомы проявляются в течение 1–2 дней. Преобладают интоксикационный и колитический синдромы (воспаление конечного отдела толстого кишечника). Синдром интоксикации характерен следующими симптомами:

• лихорадка;
• озноб;
• недомогание (головная боль, сонливость, слабость, вялость);
• тахикардия;
• нарушение мочеиспускания;
• тошнота;
• рвота и др.

Повышенная температура тела обычно сохраняется два-три дня, а затем нормализуется. Выраженность интоксикации прямо пропорциональна тяжести заболевания и служит основным критерием для ее определения. Второй синдром, которым сопровождается дизентерия – колитический, включает в себя следующие симптомы:

• постоянные или схваткообразные боли в животе (подвздошная область слева);
• учащение стула;
• изменение консистенции стула (ближе к водянистому или водянистый);
• наличие примесей в стуле (слизь, зелень, кровь);
• тенезмы и др.

Перед позывами на дефекацию боли в животе усиливаются. Опорожнение прямой кишки не купирует болевой синдром. Учащенный жидкий стул вначале всегда носит каловый характер, а затем слизисто-кровянистый. Тенезмы возникают вследствие спазмов гладкой мускулатуры дистальных отделов толстого кишечника. Это часто приводит к геморроидальным проявлениям.

Примечательно, что интоксикационный и колитический синдромы также находятся в прямой зависимости.

При физикальном обследовании обнаруживаются следующие признаки:

• бледность и сухость кожи;
• утолщение языка;
• втянутость живота;
• боль во время пальпации живота;
• урчание кишечных петель во время пальпации живота;
• уплотнение и плохая подвижность сигмовидной кишки,
• слабость анального сфинктера;
• признаки сфинктерита (покраснение кожи вокруг ануса с зудом и жжением).

Острый период шигеллеза может продолжаться от пяти дней до двух недель. Затем наступает период реконвалесценции (выздоровления). Симптомы регрессируют. Улучшается самочувствие, поднимается настроение. Когда организм полностью избавляется от возбудителя, наступает выздоровление.

Симптомы атипичной формы

Атипичная дизентерия может быть скрытой или бессимптомной. В этих случаях клинические проявления минимальны:

• снижение аппетита;
• легкое недомогание;
• периодические приступы тошноты и др.

Характерной для острого процесса клиники не отмечается. Такие симптомы чаще всего человек относит к повышенной утомляемости и к врачам не обращается. Инфекция просто не успевает захватить большую область слизистой кишечника в силу того, что иммунная система своевременно ее уничтожает. Через неделю-две все бесследно проходит.

Носительство шигелл бывает крайне редко. Выявляется случайно во время плановых обследований при диспансеризации. Возбудитель высевается однократно. В последующих пробах он не определяется. Обследуемый при этом чувствует себя хорошо. Отсутствуют даже минимальные проявления. Бактериологические и инструментальные исследования при этом также остаются нормальными.

Осложнения

Дизентерия часто сопровождается осложнениями. Условно их можно разделить на две группы:

• специфические;
• неспецифические.

Специфические осложнения обусловлены непосредственно самой инфекцией. К ним относятся:

• инфекционно-токсический шок;
• перитонит;
• инвагинация;
• дисбактериоз;
• пропадание кишечника;
• трещина заднего прохода и др.

• пневмония;
• отит;
• цистит;
• пиодермия и др.

Шигеллез у детей протекает с осложнениями намного чаще, чем у взрослых.

Диагностика шигеллеза

На догоспитальном этапе поставить предварительный диагноз «дизентерия» для опытного врача не составляет особого труда. Клиническая картина достаточно характерная. Наличие свежей крови в стуле всегда обращает на себя внимание как самого пациента (или родителей ребенка), так и врача. Такое возможно только при этом заболевании. Возбудителя будут выявлять уже в стационаре. Помимо патогномоничной симптоматики заподозрить данное заболевание помогают характерный эпиданамнез и зависимость выраженности симптомов колита от степени интоксикации.

Лабораторная диагностика дизентерии включает в себя, прежде всего бактериологический метод. Хотя инфекция толстого кишечника определяется и в обычной копрограмме. Там будет выраженный лейкоцитоз, большое количество эритроцитов, слизь и отсутствие детрита. Что же касается посевов кала, то лучше их делать не позднее, чем через два часа после забора, а лучше непосредственно у постели больного. Рост микробов на питательных средах не только даст материал для серологических проб, но и позволит определить чувствительность бактерий к антибиотикам.

Определить вид возбудителя помогают экспресс-методы:

• иммуноферментная реакция;
• реакция коагглютинации;
• реакция угольной агломерации;
• реакция латекс-агглютинции;
• реакция соединения комплемента и др.

Для более точной диагностики используют серологические методы (реакция агглютинации и реакция непрямой гемагглютинации).

Лечение шигеллеза

Лечить данное заболевание можно как в стационаре, так и на дому. Все зависит от тяжести заболевания.

Дети до года подлежат 100% госпитализации.

Как любую патологию, дизентерию начинают лечить с назначения режима и диеты. В остром периоде режим всегда постельный, затем палатный. Диета в целом не отличается от обычного питания, за исключением ее направленности на легкое усвоение (низкое содержание жиров, отварная и приготовленная на пару пища). Такой подход обусловлен тем, что большая часть слизистой кишечника сохраняет способность к всасыванию питательных веществ во время болезни.

Лечение заключается в назначении антибиотиков, которые убирают прежде всего причину заболевания. Делают это с учетом чувствительности. Чаще всего назначают один препарат. При наличии осложнений или тяжелом течении вводят два. Группами выбора антибактериальных средств являются:

• аминогликозиды (второе и третье поколение);
• цефалоспорины (второе и третье поколение);
• нитрофураны;
• фторхинолоны.

Курс лечения зависит от конкретного препарата, но в среднем колеблется от пяти до десяти дней. В случаях атипичного шигеллеза и носительства бактерий антибиотики не назначают.

Из патогенетической терапии применяются следующие препараты:

• спазмолитики;
• антипиретики;
• дезагреганты;
• солевые и коллоидные внутривенные растворы;
• нейролептики;
• ганглоблокаторы и др.

Чем выше степень токсикоза при шигеллезе, тем длиннее список препаратов патогенетической терапии.

Профилактика шигеллеза

Мероприятия, позволяющие предотвратить развитие дизентерии, следующие:

• санитарно-гигиенические;
• санитарно-просветительские;
• работа в очаге инфекции.

Профилактика шигеллеза особенно важна на пищевых предприятиях, в детских садах, школах и больницах. Прежде всего, это санитарный контроль во всем здании, регулярная уборка мусора, борьба с насекомыми.

Учитывая большую вероятность водного пути передачи, важно следить за тем, чтобы не было загрязнения источников водоснабжения.

При выявлении больного шигеллезом необходимо в очаге провести текущую дезинфекцию. Если имеет место госпитализация, то делается заключительная дезинфекция. То же самое проводится в случае выздоровления на дому. За всеми людьми, которые контактировали с больным, устанавливается медицинское наблюдение. У них обязательно берут бактериологические анализы. Если имеются показания к этому, то проводят профилактическое лечение. Все это помогает пресечь распространение инфекции.