Получают так же, как и другие диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования сальмонелл в реакции агглютинации.
Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы. Представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностику-мы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяют для серодиагностики брюшного тифа в реакции Видаля.
Типовые сальмонеллезные бактериофаги. Применяют для фа-готипирования сальмонелл.
Брюшнотифозная моновакцинд и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Применяют для специфической активной профилактики брюшного тифа.
Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики брюшного тифа.
Коли-бактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E.coli штамма М17, обладающего выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда патогенных кишечных бактерий. Применяют для нормализации кишечной микрофлоры при дисбактериозе и лечении дизентерии, главным образом у детей.
Бифидумбактерин. Содержит лиофильно высушенную взвесь живых клеток B.bifidum. Применяют для лечения хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей и дизентерии.
Бификол. Содержит смесь высушенных живых бактерий E.coli штамма М17 и B.bifidum. Показания к применению те же.
Лактобактерин. Содержит продукты жизнедеятельности лак-тобактерий. Выпускается в таблетированном виде. Применяют для лечения дисбактериозов у детей.
Антибиотики: сульфаниламиды, полусинтетические пени-циллины, цефалоспорины 2-4-го поколения, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолоны, полимиксин.
Тема 13.3. ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ
ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ, ИНТОКСИКАЦИЙ, ХОЛЕРЫ
И ДРУГИХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
План
А Программа
1. Биологические свойства возбудителей холеры, пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Их патоген-ность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
2. Лабораторная диагностика.
3. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
Демонстрация
1. Мазки из чистых культур возбудителей пищевых интоксикаций кишечных инфекций: Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Vibrio cholerae. Окраска по методу Грама.
2. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.
Задание студентам
1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.
2. Бактериологическая диагностика холеры.
2.1. Указать материал для исследования.
2.2. Идентификация чистой культуры вибрионов, выделенных от больного:
1) изучить морфологические и тинкториальные свойства: микроскопировать мазок из чистой культуры, выделенной от больного;
2) изучить антигенные свойства: отметить результаты развернутой реакции агглютинации с диагностической 01-сывороткой;
3) изучить биохимические свойства: отметить результат гексаминового теста;
4) определить чувствительность выделенной культуры к диагностическим бактериофагам;
5) отметить способность к росту на среде с поли-миксином;
6) дать заключение.
3. Диагностика ботулизма:
1) указать материал для исследования;
2) проанализировать результаты РИГА для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного (реакция Бойдена). Дать заключение.
4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи
лактическими препаратами.
Методические указания
■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ
Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций, вызванных Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp.
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, рвотные массы, промывные воды желудка больного, остатки пищевых продуктов - возможные источники и факторы передачи инфекции.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Производят путем посева
Материала на дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар и др.) для выделения чистой культуры сальмонелл и эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для выявления бактерий рода Proteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20-24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие "ползучего" роста, характерного для Proteus spp., в пробирке со скошенным питательным агаром. Подозрительные колонии пересевают на скошенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агглютинации на стекле, используя смеси диагностических сывороток. На следующий день с чистой культурой ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецеп-торной сывороткой и делают посев на среды "пестрого" ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл или эшерихий из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой ток-сикоинфекции - источнике заболевания. При наличии "ползучего" роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: P.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.
Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована: а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.
■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ИНТОКСИКАЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ
Микробиологическая диагностика стафилококковых пищевых интоксикаций
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, промывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Диагностика основана на обнаружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеро-токсин Staphylococcus spp. экстрагируют изотоническим раство-
ром хлорида натрия, затем определяют его присутствие и серологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С. Техника постановки реакции описана выше (см. рис. 10.1.6). Используют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.
Бактериологическое исследование. С целью выделения чистой культуры стафилококка исследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме (см. тему 12.1) чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.
Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно использовать биопробу - скормить изучаемый материал котятам-сосункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30-60 мин после скармливания.
Похожая информация.
Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле. монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (О) Пренадлежность к группе
Диагност. Ат, кот. получают в 3 этапа: на 1-ом выбираем сальмонелу (например S.typhimurium c Аг структурой О-1,4,5,12; Mi 1,2) нагревают на водяной бане для разрушения жгутиков Н-Аг,ост. Только О-Аг 1,4,5,12. На втором этапе проводят гипериммунизацию кроликов оставшимся О-Аг сальмонелл, у кролика образуются О-1,4,5,12 Ат. Это поливалентная сыворотка. На 3-ем этапе проводим истощение сыворотки по Кастеллани. Для этого и получают сыворотку добавляют предварительно нагретых на вод. Бане из той же сер.группы например S.hudelberg o-45,12 Аг, произойдет связь Аг и оставшегося О-1 Ат. Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.
47Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к Shigella flexneri I-V.
48Агглютинирующая адсорбированная сальмонеллёзная О-сыворотка рецептор 9.
Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.
50. Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллёзная О-сыворотка (групп А, В, С, Д, Е).
Препарат диагностический. Содержит антитела к О-антигену. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.
51 Агглютинирующая адсорбированная сальмонеллёзная Н-сыворотка рецептор d
Препарат диагностический. Содержит антитела к Н-антигену рецептору d. Представляет сыворотку крови кроликов, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.
50.Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к Shigella flexneri I-V.
Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляют собой сыворотки кроликов, иммунизированных формалинизированными и живыми взвесями типичных по всем признакам шигелл. При взаимодействии с соответствующими микроорганизмами сыворотки вызывают их агглютинацию. Предназначены для серологической идентефикации Shigella flexneri I-V. Диагностические шигеллёзные сыворотки представляют собой лиофилизированные адсорбированные сыворотки кроликов, содержащие монорецепторные антитела к 38 наименованиям антигенов. К восьми группам антигенов выпускаются поливалентные сыворотки. Препараты предназначены для идентификации бактерий рода Shigella в реакции агглютинации. Диагностические шигеллёзные сыворотки имеют титр антител в реакции агглютинации не менее 1:40. С помощью данных сывороток можно определить любые бактерии рода Shigella согласно международной классификации. Препарат разлит в ампулы по 2мл. Выпускают в сухом виде. Срок годности монорецепторных сухих сывороток - 5 лет, поливалентных сухих – 3 года при хранении в сухом тёмном месте при температуре 4-80 С.
Препараты предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле. Препараты представляют собой иммунные адсорбированные сыворотки кроликов, содержащие агглютинины к О-антигенам и Н-антигенам сальмонелл. Препараты выпускают в виде моновалентных и поливалентных О- и Н-сывороток.
Поливалентные сыворотки основных групп (A, B, C, D, E) содержат О-антитела против антигенов 1; 2; 3; 4; 5; 6 1 ; 6 2 ; 7; 8; 9; 10; 12; Vi; редких групп (F, G, H, J, I, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, X, Y, Z, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61) содержат О-антитела против антигенов: 11; 13, 22; 14, 24; 16; 17; 18; 21; 23; 24; 25; 28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61.
Поливалентные Н-сыворотки содержат Н-антитела против родственных антигенных комплексов: gm, gp, gq, gpu, fg, fgs, gst, gt, mt, gmt, gms; Z4 4 Z 24 ; Z4 4 Z 32 ; I-1,2; 1,5; 1,6; 1,7.
Титр специфических антител в О- и Н-сыворотках и поливалентных Н не ниже 1:80, а поливалентных О – 1:40.
Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации" предназначен для идентификации с помощью реакции агглютинации (РА) на предметном стекле бактерий рода Salmonella, выделенных из биологического материала человека (моча, испражнения, промывные воды желудка, рвотные массы).
Описано более 2400 патогенных сероваров сальмонелл, вызывающих у человека острые гастроэнтериты, тифоподобные и септикопиемические формы заболевания, объединенных под названием сальмонеллез. Основными возбудителями сальмонеллеза являются Salmonella сероваров enteritidis, typhi murium, cholerae-suis, haifa и т.д.
Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации" предназначен для идентификации таких бактерий с целью назначения правильного лечения больного.
Набор выпускается в 4 вариантах комплектации:
Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А, В, С, D , E ):
Комплект №1/1 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, сухая;
Комплект №1/2 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, жидкая;
Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп:
Комплект №2/1 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, сухая;
Комплект №2/2 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, жидкая.
Каждый вариант комплектации в 2 исполнениях.
СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
Исполнение 1 |
Исполнение 2 |
|||
Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А,В,С,D,E) |
||||
Комплект №1/1 |
сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета |
5 фл. (по 2,0 мл) |
1 фл. (по 2,0 мл) |
|
Комплект №1/2 |
жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость |
5 фл. (по 2,0 мл) |
1 фл. (по 2,0 мл) |
|
Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп |
||||
Комплект №2/1 |
сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54" 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета |
5 фл. (по 2,0 мл) |
1 фл. (по 2,0 мл) |
|
Комплект №2/2 |
жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54" 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость |
5 фл. (по 2,0 мл) |
1 фл. (по 2,0 мл) |
Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению сокращенная схема антигенной структуры бактерий сальмонеллезной группы.
ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Базовые варианты комплектов набора рассчитаны на исследование 200 (исполнение 1) или 40 образцов (исполнение 2).
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гомологичные О-антигены, и не агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гетерологичные О-антигены.
ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Исследуется культура, выделенная при бактериологических исследованиях из биологического материала (моча, испражнения, промывные воды желудка, рвотные массы) и выращенная в пробирках на скошенном питательном агаре в течение 18-20 ч при температуре 37 0 С.
Допускается хранение выделенной культуры на питательном агаре при температуре +2 -+8 в течение 2 суток.
Сбор, хранение и подготовка биологического материала человека должны производиться в соответствии с ГОСТ Р 53079.4-2008 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований», МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды».
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Специфическая активность:
Аналитическая чувствительность: определяется с гомологичными музейными тест-штаммами Salmonella и составляет 100%
Аналитическая специфичность: определяется с гетерологичными музейными тест-штаммами Salmonella и составляет 100%
Воспроизводимость результатов составляет 100%.
Диагностическая чувствительность (с доверительной вероятностью 95%) составила:
Диагностическая специфичность (с доверительной вероятностью 95%) составила:
Музейные тест-штаммы Salmonella - 98,07%-100%;
Культуры Salmonella, выделенные из клинического материала пациентов - 98,25%-100%.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение правил "Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" (Утв. Минздравом СССР 17 января 1991 г.), ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003).
Набор реагентов, в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» относится к классу Б (эпидемиологически опасные отходы).
Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами" и МУ 287-113 "Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения".
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование и материалы (для "ручной" постановки)
Cекундомер;
Холодильная камера с температурным режимом 2-8 0 С;
Пипетки полуавтоматические с рабочими диапазонами: 5-50 мкл, 20-200 мкл;
Одноразовые наконечники к указанным пипеткам;
Контейнеры для жидких и твердых отходов;
Резиновые или латексные перчатки, средства дезинфекции;
Петля бактериологическая;
Стекла предметные;
Лупа с увеличением (2х);
0,9 % раствора хлористого натрия;
Термостат суховоздушный, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С;
70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Постановка РА на стекле
Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка
Сухую сыворотку растворяют в 2 мл 0,9% водного раствора хлористого натрия
На предметное стекло наносят одну каплю (около 50 мкл) сыворотки и одну каплю 0,9% водного раствора хлористого натрия. Идентифицируемую культуру, выращенную в пробирках на скошенном питательном агаре в течение 18-20 ч при температуре 37 о С, снимают с верхней части агара петлей, наносят на предметное стекло вблизи капли 0,9% водного раствора хлористого натрия и эмульгируют (контроль на отсутствие спонтанной агглютинации). При отсутствии спонтанной агглютинации манипуляцию повторяют в капле О - сыворотки, формируя равномерную непрозрачную суспензию. Учет результатов проводят в течение 1-2 минут, мягко покачивая стекло. Гомогенная суспензия свидетельствует об отрицательном результате.
При наличии агглютининов к исследуемому штамму в капле сыворотки в течение 1 -2 мин появляется хлопьевидный агглютинат.
Учет результат РА производят визуально при помощи лупы с увеличением(2х) по четырехкремстной системе
Результаты РА учитываются и оцениваются следующим образом:
Отчетливый агглютинат при полном просветлении жидкостив капле (100%).
Отчетливый аггютинат на фоне мутноватой жидкости (75%)
Незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости (50%)
Следы агглютината, жидкость в капле мутная (25%)
(-) - отрицательный результат, гомогенно мутная жидкость в капле (0%).
РА с диагностической сывороткой учитывается только при отрицательном результате контроля спонтанной агглютинации.
Исследуемую культуру относят к соответствующей О-группе, если на стекле получена РА с поливалентной сывороткой этой группы не ниже чем на (+++).
СРОК ГОДНОСТИ
Комплект №1/1, №1/2. Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка, сухая - 3 года со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.
Комплект №2/1, №2/2. Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка, жидкая- 1 год со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.
ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ
Хранение
В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 о С до 8 о С. Замораживание не допускается.
После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С в течение 1 мес.
Транспортирование
При температуре от 2 до 8 о С транспортом всех видов в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 о С до 25 о С в течение 14 сут.
УСЛОВИЯ ОТПУСКА
Для учреждений здравоохранения.