Гельминтологические методы исследований. Методы диагностики гельминтозов разделяют на прямые, основанные на непосредственном выявлении самих гельминтов или их фрагментов, а также личинок и яиц гельминтов (методы исследования фекалий, мочи, желчи и дуоденального содержимого, мокроты, крови и тканей, материала, полученного при соскобе из перианальной области и подногтевых пространств), и косвенные, с помощью которых выявляют вторичные изменения, возникающие в организме человека в результате жизнедеятельности гельминтов (исследования морфологического состава крови, иммунологические методы диагностики гельминтозов, рентгенологические исследования и т.д.). Из прямых методов наиболее распространены копрологические, которые делятся на макро- и микрогельминтоскопические. В отдельных случаях используют специальные методы.

Макрогельмитоскопические методы исследования направлены на поиски гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников, частей стробилы цестод). Их применяют для диагностики тех гельминтозов, при которых яйца не выделяются с экскрементами больного или выделяются в небольшом количестве и не всегда (например, при энтеробиозе в фекалиях обнаруживают острицы, при тениидозах — членики). Для обнаружения в фекалиях остриц или члеников цестод проводят просмотр фекалий невооруженным глазом. Для дифференциальной диагностики тениидозов рекомендуется просмотр разжиженных водой фекалий отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или в чашках Петри на темном фоне. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стеклами. Если же по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают под лупой в капле глицерина, а в случае необходимости и под микроскопом.

Микрогельминтоскопические методы исследования (качественные) направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяют метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Смесь Като состоит из 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% раствора фенола. Пластинки по Като (гидрофильный целлофан разрезают на части размером 20-40 мм) погружают на 24 ч в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3—5 мл раствора Като на 100 пластинок). 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, накрывают целлофановой покровной пластинкой по Като и придавливают так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки.

Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления на 40—50 мин, после чего просматривают под микроскопом. В жаркое время года во избежание высыхания препарата на пластинку приготовленного препарата кладут влажную губку. Для полного выявления гельминтов всех видов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като необходимо использовать в сочетании с одним из методов обогащения. Наиболее распространенными из них являются метод Калантарян и метод Фюллеборна. Метод Калантарян: в склянках с широким горлом объемом 100 мл тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г фекалий, постепенно доливая насыщенный раствор нитрата натрия (1 кг азотнокислого натрия на 1 л воды при кипячении) до краев стакана. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют бумажным совочком. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло (солевой раствор добавляют до полного соприкосновения смеси с предметньм стеклом). Через 20—30 мин предметное стекло снимают и пленку просматривают под микроскопом. При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли по Фголлеборну (400 г соли в 1 л воды при кипячении).

В связи с тем, что яйца, имеющие большой удельный вес (неоплодотворенные яйца аскарид, яйца трематод и крупных цестод), не всплывают, помимо исследования поверхностного слоя жидкости, при использовании метода Фюллеборна необходимо просмотреть под микроскопом 2—4 препарата из осадка. Специальные лабораторные методы исследований на различные гельминтозы. Исследования на энтеробиоз. Обследование на энтеробиоз проводится после сна без предварительного подмывания перианальной области. Наиболее простым является обнаружение яиц остриц в перианальном соскобе с применением деревянного шпателя (спички). Соскабливание производят с поверхности перианальных складок деревянным шпателем (отточенной в виде шпателя спичкой), смоченным в 50% растворе глицерина или в 1% растворе гадрокарбоната натрия. Полученный материал тщательно счищают со шпателя краем предметного стекла на другое предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина и микроскопируют. При обследовании работников общественного питания удобнее исследовать материал из подногтевых пространств, используя смесь из равных количеств 50% водного раствора глицерина и раствора Люголя.

Более эффективен метод использования прозрачной полиэтиленовой ленты с липким слоем путем отпечатка с перианальных складок обследуемого. В лаборатории заранее нарезают полоски липкой ленты длиной 9 см и наклеивают липким слоем на предметные стекла так, чтобы один конец выступал за край стекла на 1 см. На липкую сторону выступающего конца ленты наклеивают белую бумагу, на которой записывают порядковый номер исследования. При проведении обследования захватывают свободный конец ленты пальцами, отклеивают ее от предметного стекла до второго конца и прикладывают липким слоем к перианальным складкам. Для обеспечения полного контакта с кожей полоска приглаживается деревянным шпателем. Затем ленту отделяют от кожи и наклеивают липким слоем к предметному стеклу. Ленту хорошо разглаживают для устранения пузырьков воздуха и других неровностей.

Препарат исследуют под микроскопом. Исследования на тениидозы. Основным методом диагностики тениаринхоза служит опрос с целью установления выделения члеников тениид с фекалиями. Можно использовать также методы перианального соскоба и метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Диагностика тениоза затруднительна, т.к. членики свиного цепня активно не выделяются. При подозрении на тениоз следует провести диагностическую дегельминтизацию малыми дозами мужского папоротника или семенами тыквы. Исследования на стронгилоидоз. Диагноз стронгилоидоза ставят при нахождении в фекалиях личинок гельминта. Наиболее эффективен метод Берманна. На узкий конец стеклянной воронки надевают резиновую трубку с зажимом и укрепляют ее на металлическом штативе. В воронку помещают металлическую сетку, на которой находится 5—10 г фекалий. Приподняв сетку, заполняют воронку подогретой до 40—45° водой так, чтобы нижняя часть сетки с фекалиями была погружена в воду. Личинки из фекалий активно переходят в теплую воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки, надетой на воронку. Через 4 ч зажим на трубке открывают и спускают жидкость в 1—2 центрифужные пробирки. После центрифугирования в течение 2—3 мин надосадочную жидкость быстро сливают, а осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Наиболее простой метод выявления личинок стронгилоид в фекалиях, который можно использовать при массовых обследованиях в очагах инвазии, предложен Е.С. Шульманом, В.Г. Супрягой, Г.Л. Плющевой и др. Фекалии (5 г) собирают в стаканчик и заливают обычной (водопроводной) водой комнатной температуры (10—15 мл). Через 20 мин воду сливают в чашку Петри и исследуют под микроскопом. При подозрении на строигилоидоз в случае отрицательного результата однократного исследования необходимо проводить повторные анализы с промежутками в 5—7 дней, сочетая их с исследованиями дуоденального содержимого и желчи. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем с помощью зондирования. Из исследуемой жидкости сначала выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством этилового эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют 10—15 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.

При исследовании дуоденального содержимого можно выявить и гельминтозы с локализацией возбудителя в печени, желчном пузыре, двенадцатиперстной кишке (например, при описторхозе, фасциолезе, клонорхозе, дикроцелиозе, трихостронгилидозе). Исследования на анкилостомидозы. Для диагностики анкилостомидозов используют методы обогащения по Калантарян или Фюллеборну. Для дифференциальной диагностики анкилостомоза и некатороза рекомендуется метод культивирования личинок по Хараде — Мори в модификации Маруашвили с соавторами. На фильтровальную бумагу размером 16?3,5 наносят фекалии тонким слоем таким образом, чтобы края бумаги оставались свободными. Бумагу с фекалиями помещают в банку объемом 0,8 л, заполняют водой так, чтобы нижний край бумаги, свободный от фекалий, был погружен в воду. Банку на 5—6 дней помещают в термостат при t° 28°. Филяриевидные личинки, развившиеся за это время из яиц, спускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дне банки. По окончании инкубации фильтровальную бумагу извлекают из банки, а жидкость исследуют под лупой. В сомнительных случаях жидкость центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом. Исследования на легочные гельминтозы.

Для обнаружения яиц гельминтов в фекалиях используют метод последовательных промываний. Небольшую порцию фекалий смешивают с водой в чашке Петри и оставляют до осаждения взвешенных частиц. Надосадочный слой сливают и заменяют чистой водой. Процедуру повторяют несколько раз до получения прозрачной надосадочной жидкости, отмытый осадок исследуют под микроскопом. Используют несколько проб фекалий. Исследования на трихинеллез (выявление личинок трихинелл). При компрессионном методе кусочек двуглавой или икроножной мышцы (вблизи сухожилий), взятой хирургическим путем с соблюдением асептики, расщепляют препаровальными иглами на отдельные тонкие волоконца, сдавливают их между двумя предметными стеклами в капле 50% раствора глицерина так, чтобы препарат был тонким и прозрачным. Под микроскопом с затемненным полем зрения хорошо видны личинки трихинелл. Эффективно исследование нескольких кусочков мышц в компрессориумах, используемых в ветеринарно-санитарной практике, или в специальных трихинеллоскопах.

Метод переваривания Бечмена: 1 г измельченных мышц заливают 60 мл искусственного желудочного сока (0,5 г пепсина; 0,7 мл концентрированной соляной кислоты; 100 мл воды) и выдерживают 18 ч в термостате при t° 37°, верхний слой жидкости сливают, к осадку добавляют теплую воду (37—45°) и выливают в аппарат Берманна. Через час жидкость спускают в пробирку, центрифугируют и исследуют осадок. Если личинки заключены в обызвествленные капсулы, их предварительно декальцинируют в растворе соляной, азотной или серной кислоты. Биопроба: кусочки исследуемых мышц скармливают белым мышам или крысам, у которых через 2—3 дня можно обнаружить половозрелых трихинелл в дуоденальном содержимом, а через 2—3 нед. — личинок в мышцах диафрагмы и языка. При применении гельминтологических срезов кусочки мышц фиксируют в жидкости Буэна, Ценкера или др. Обычным способом готовят срезы на микротоме и окрашивают их гематоксилином Делафильда.

Исследования на цистицеркоз. Кусочек мышечной, соединительной ткани, подкожных узелков и пр. осматривают невооруженным глазом, осторожно выделяют цистицерк (беловатый полупрозрачный пузырек размером 1—2 см), раздавливают его между двумя предметными стеклами в капле глицерина и исследуют под микроскопом. Для определения жизнеспособности выделенных из тканей цистицерков их выдерживают в 50% растворе желчи на изотоническом растворе хлорида натрия в термостаге при t° 37°; через 10—60 мин головка жизнеспособного цистицерка выворачивается наружу Обызвествленных цистицерков предварительно декальцинируют 4% раствором азотной кислоты в течение часа. Исследования на шистосомозы. Исследование мочи: не менее 5 мл мочи, собранной в середине дня, помещают в конический стакан на 30 мин, затем сливают.

Пипеткой наносят на предметное стекло каплю из осадка мочи, готовят мазок и исследуют под малым увеличением микроскопа. Добавление к осадку 1—2 капель 50% раствора глицерина значительно просветляет осадок и облегчает его исследование. Можно использовать центрифугирование (особенно при низкой интенсивности инвазии). Пробу свежей мочи помещают в 2 центрифужные пробирки по 10 мл и центрифугируют при 1000—1500 об/мин в течение 5—10 мин. Из осадка готовят препараты и исследуют под малым увеличением микроскопа. К препаратам можно добавить 1—2 капли красителя (раствора Люголя или 1—2% водного раствора метиленового синего). Это создает цветной фон, что облегчает выявление яиц шистосом. При исследовании фекалий методом их осаждения — в коническом стакане емкостью 200 мл смешивают 1 г фекалий с 1—2 мл растворителя (50% раствора глицерина и изотонический раствор хлорида натрия в соотношении 1:1). Разводят содержимое растворителем до объема сосуда и дают отстояться и течение 20—30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом.

Для получения лучшей концентрации осадок нужно ресуспендировать в растворителе до получения взвеси и дать ей отстояться в коническом стакане в течение 10 мин. Осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой, помещают 2 капли на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. При использовании метода осаждения по Ритчи в сосуде смешивают примерно 2 г фекалий с 10 мл изотонического раствора хлорида натрия и помещают в центрифужную пробирку емкостью 15 мл. Пробирку закрывают пробкой и встряхивают в течение 30 с. Пробку удаляют, а содержимое центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, добавляют к осадку 10 мл 10%, раствора формалина, тщательно смешивают и дают смеси отстояться 5 мин. Добавляют в нее 3—4 мл эфира, закрывают пробирку пробкой, встряхивают, удаляют пробку и центрифугируют 2 мин.

Аппликатором удаляют детрит, сливают надосадочную смесь формалина с эфиром, осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой и исследуют под малым увеличением микроскопа. Количественные методы диагностики гельминтозов применяют при необходимости установить интенсивность инвазии. Эти методы позволяют судить об эффективности дегельминтизации, давать оценку действия различных антигельминтных препаратов, а также могут служить контролем проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий. Работа с фекалиями в лаборатории. Для исследования берут фекалии из разных мест порциями в стеклянную или пластмассовую посуду, парафиновые стаканчики, на которые наклеивают этикетку с указанием фамилии, имени, отчества, возраста и адреса обследуемого. Количество фекалий должно быть не менее 1/4 стакана, т.к. небольшие порции испражнений быстро высыхают и яйца в них деформируются. Кроме того, может возникнуть необходимость в повторном исследовании другими методами. Фекалии для исследований следует доставлять в лабораторию в течение 1 сут. после дефекации, а при исследовании на стронгилоидоз сразу после дефекации.

В случае необходимости длительного хранения материала и для транспортировки в качестве консервантов используют жидкость Барбагалло (в 1000 мл воды растворяют 8,5 г поваренной соли и 30 мл формалина) или жидкость Шуренковой (1900 мл 0,2% водного раствора нитрата натрия, 250 мл крепкого раствора Люголя, 300 мл неразведенного формалина, 25 мл глицерина); либо растворов стирального порошка: 1% раствор Лотоса или 1,5% раствор Экстры (в весовом соотношении фекалий и раствора стирального порошка 1:5). После проведения анализов посуду дезинфицируют: кипятят или выдерживают в течение 5 ч в 5% растворах фенола, лизола, 2% растворе крезола. При регистрации результатов анализов названия гельминтов обозначают по современной номенклатуре (латинское название). Иммунологические метолы диагностики наиболее эффективны при гельминтозах, возбудители которых обитают непосредственно в тканях или в ранней фазе своего развития мигрируют по кровеносному руслу и внутренним органам хозяина.

Используют аллергические реакции (кожную и внутрикожную пробу) и иммунологические реакции: реакцию кольцепреципитации (РКП) для диагностики трихинеллеза; латекс-агглютинации (РЛА) с диагностикумом длительного срока хранения для диагностики эхинококкоза и альвеококкоза; непрямой гемагглютинации (РНГА) для диагностики эхинококкоза, цистицеркоза мозга и преиматинальной фазы аскаридоза; иммунофлюоресцирующих антител (РИФА) для диагностики цистицерков и трихинеллеза; микропреципитации на личинках (РМПЛ) для диагностики нематодозов (преимагинальной фазы аскаридоза; анкилостомидозов, трихинеллеза); иммуноферментную реакцию (ИФР) для диагностики эхинококкоза, альвеококкоза, описторхоза, трихинеллеза; реакцию связывания комплемента (РСК) для диагностики трихинеллеза и цистицеркоза. Применяют также реакцию иммуно-электрофореза (РИЭФ) и двойной диффузии в геле (РДДГ).

Библиогр.: Березанцев Ю.А. и Автушенко Е.Г. Гельминтологическая копрологическая диагностика, Л., 1976; Лейкина Е.С. Важнейшие гельминтозы человека, с. 335, М., 1967; Унифицированные методы клинических лабораторных исследований, под ред. В.В Меньшикова, вып. 4, с. 275, М., 1972.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Строение члеников ленточных гельминтов изучают, помещая их между двумя предметными стеклами. Членики бычьего цепня крупнее члеников свиного и лентеца широкого, они имеют больше боковых маточных ответвлений, чем у свиного цепня, - около 30 (против 7-10) (рис. 14, 15).

Членики широкого лентеца короткие, широкие и имеют в центре розетковидное выпячивание - матку (рис. 16).

Подвижны только членики бычьего цепня.

Головка каждого из цестод отличается некоторыми особенностями. Головка свиного солитера снабжена четырьмя присосками и хоботком с двумя рядами крючьев (вооруженный цепень). На головке бычьего цепня крючья отсутствуют (невооруженный цепень). Головка широкого лентеца имеет по бокам две ботрии - щели, с помощью которых широкий лентец прикрепляется к слизистой оболочке кишки (рис. 17, 18, 19).

Для выявления гельминтов исследуют испражнения, перианальную и ректальную слизь, дуоденальное содержимое, мокроту, кровь и частицы тканей. Важное значение в микрогельминтологических исследованиях имеет овоскопия, которая дает возможность поставить диагноз по форме яиц при микроскопии препаратов из кала, желчи. Некоторые гельминты локализуются вне кишок (цистицерк, трихинеллы, эхинококк). В этих случаях для диагностики используют иммунологические методы исследования, биопсию и др.

При микроскопии необходимо брать свежие испражнения либо консервировать их в 5% растворе формалина во избежание высыхания кала, при котором изменяется форма яиц и затрудняется правильная диагностика.

Исследуют их микроскопией нативного мазка, после обогащения - методом Фюллеборна, Телеманна и др.

Для приготовления нативного препарата небольшую часть фекалий берут из разных участков доставленной порции, тщательно растирают на предметном стекле в капле физиологического раствора хлорида натрия или 50% раствора глицерина. Препарат накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом (не менее 2 препаратов).

Метод Шульмана (нативный препарат) имеет определенные преимущества. С помощью этого метода можно определять яйца и личинки некоторых гельминтов. Для этого в стеклянный сосуд с водой или физиологическим раствором хлорида натрия (150 мл) погружают 3 г фекалий. Стеклянной палочкой размешивают содержимое сосуда, в результате чего в центре, у палочки, образуется воронковидное углубление. Быстро извлекают палочку и оставшуюся в ней каплю жидкости наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом, определяя яйца гельминтов и личинки.

Метод соскоба применяют для диагностики энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза. Пользуются отточенной в виде шпателя спичкой, заостренный конец которой смочен в 1% растворе соды. Содержимое шпателя переносят на предметное стекло в каплю 1% раствора бикарбоната натрия. Сверху каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом.

Метод Фюллеборна позволяет концентрировать яйца гельминтов для исследования, и поэтому вероятность обнаружения их этим способом увеличивается. Готовят раствор хлорида натрия - 350 г на 1 л воды, нагревают до кипения и фильтруют через слой ваты или марли. В фарфоровый стаканчик на 100 мл вносят 5- 10 г кала и постепенно разбавляют насыщенным раствором натрия хлорида. Клетчатку, которая всплывает, немедленно удаляют фильтровальной бумагой. Стаканчик с содержимым оставляют в вытяжном шкафу на 30 мин -1ч, на поверхности образуется пленка, в которой находятся яйца гельминтов, всплывшие в гипертоническом растворе. Проволочкой или платиновой петлей снимают пленку, наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. Методом Фюллеборна хорошо определяют яйца всех круглых гельминтов, кроме неоплодотворенных яиц аскарид, и карликового цепня. Яйца сосальщиков и крупных ленточных гельминтов всплывают плохо, поэтому целесообразно просматривать 2-4 препарата со дна сосуда.

Для накопления яиц по методу Телеманна необходимы эфир и соляная кислота. В пробирку наливают 1-1,5 мл эфира и 5-6 мл разведенной соляной кислоты, к раствору. добавляют небольшую часть экскрементов (1-2 г), взбалтывают, процеживают через густое ситечко в фарфоровую чашечку, сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1 мин. В пробирке образуется три слоя: верхний содержит экстрагированные жиры, средний - соляную кислоту, в которой растворились белковые вещества, и нижний - нерастворенные частицы и яйца гельминтов. Два верхних слоя сливают и из осадка готовят 1-2 препарата, которые рассматривают под микроскопом. Недостатком метода является вредное действие соляной кислоты на оптическую систему микроскопа и деформирующее влияние ее на яйца гельминтов.

По способу Калантаря н 5 г фекалий размешивают в 10-кратном объеме насыщенного раствора нитрата натрия. Полученную эмульсию процеживают через редкую марлю. Через 10 мин готовят 5-6 препаратов из пленки с поверхности жидкости и исследуют их под микроскопом.

При описторхозе для определения интенсивности инвазии и эффективности проведенной терапии применяют метод количественного определения яиц в кале по Столлу. С этой целью в специальную стеклянную колбочку наливают 56 мл децинормального раствора едкого натра. Добавляют 4 г кала (до уровня жидкости в колбочке 60 мл) и взбалтывают со стеклянными бусами. Для исследования пипеткой набирают 0,075 мл (0,005 г) смеси, перенося на предметное стекло, накрывают покровным стеклом (22 х 23 мм) и под микроскопом считают количество яиц (содержащихся в 0,075 см3 смеси). Полученное число умножают на 200, в результате получают число яиц в 1 г кала. Ниже приводим краткую характеристику яиц гельминтов.

Оплодотворенное яйцо аскариды овальной формы с толстой многослойной оболочкой. Наружная белковая оболочка крупнобугристая, окрашена в темно-желтый цвет. Внутри яйца шаровидный бластомер. Размеры яйца 50-70х40-50 мкм. Неоплодотворенное яйцо аскарид удлиненной формы, белковая оболочка тонкая, мелкобугристая, желтого цвета. Внутри яйца крупные полигональные желтые клетки. Размеры 50-100х40- 50 мкм. Иногда яйца могут быть без белковой оболочки - прозрачные, бесцветные и покрыты ровной толстой оболочкой (рис. 20, 1, 2, 3).

Яйца власоглава овальной формы с толстой многослойной оболочкой золотисто-желтого или коричневого цвета. На полюсах - пробковидные образования. Внутри яйца - мелкозернистое содержимое. Размеры 50- 54х22-23 мкм (рис. 20, 4).

Яйца острицы неправильной овальной формы с тонкой гладкой бесцветной многослойной оболочкой. Одна сторона уплощена, другая - выпукла. Внутри яйца - зародыш на разной степени развития, вплоть до личинки. Размеры 50-60х20-30 мкм (рис. 20, 5).

Яйца анкилостом правильной овальной формы с тонкой прозрачной бесцветной оболочкой. Внутри свежевы-деленных яиц - 4 бластомера. Размеры 54-70х36- 40 мкм (рис. 20,6).

Яйца бычьего и свиного цепня одинакового строения, шаровидной формы; оболочка с 1-2 нитями. Внутри яйца онкосфера (зародыш) с толстой радиально исчерченной оболочкой темно-коричневого цвета, с шестью эмбриональными крючочками внутри. Размеры онкосферы 31х40 мкм. В испражнениях человека встречаются не яйца, а онкосферы (рис. 20, 7).

Яйца карликового цепня овальной формы, имеют тонкую бесцветную оболочку с лимоноподобной онкосферой внутри, от полюсов которой отходят длинные нитевидные придатки (филаменты). Размеры 40х50 мкм. В онкосфере 6 зародышевых крючечков (рис. 20,8).

Яйца широкого лентеца яйцевидной формы с толстой гладкой серого цвета оболочкой. Внутри яйца крупнозернистое содержимое, на верхнем полюсе - крышечка, на противоположном - бугорок. Размеры 68-71х45 мкм (рис. 20, 9).

Яйца кошачьей двуустки имеют тонкую гладкую оболочку бледно-желтого цвета с крышечкой на верхнем полюсе и шипиком на противоположном. Нижняя половина яйца расширена, внутреннее содержимое яйца мелкозернистое. Размеры 26-32X11-15 мкм.

Для обнаружения личинок анкилостомы, угрицы кишечной пользуются методом Бермана. 5 г фекалий на металлическом ситечке помещают над стеклянной воронкой, прикрепленной к штативу. На носик воронки одевают резиновую трубку с зажимом. В воронку наливают нагретую До 50° С воду так, чтобы нижняя часть ситечка с фекалиями была приближена к воде. Личинки активно переходят из кала в воду, скопляясь в нижней части резиновой трубки. Через 2 ч медленно открывают зажим, спускают воду с личинками в центрифужные пробирки, центрифугируют, из осадка на предметном стекле готовят препараты, которые рассматривают под покровным стеклом.

Для определения в крови личинок трихинелл взятую из вены кровь гемолизируют дистиллированной водой, центрифугируют и из осадка готовят препараты, которые исследуют под микроскопом.

Исследование дуоденального содержимого проводят так: желчь смешивают с равным объемом этилового эфира, центрифугируют; осадок микроскопируют. Кроме осадка, исследуют плавающие в жидкости хлопья, в которых могут быть яйца гельминтов.

При цистицеркозе и трихинеллезе исследуют также ткани. Кусочек биопсированной ткани - мышцы подкожной клетчатки, кожи - осматривают сначала невооруженным глазом для определения пузырька-цистицерка, длина которого 6-20 мм, ширина - 5-10 мм. При подозрении на цистицерк пузырек раздавливают между двумя предметными стеклами и рассматривают под микроскопом. Для цистицеркоза характерно наличие сколекса с четырьмя присосками и венчиком крючьев.

Чтобы обнаружить трихинеллы, асептически вырезанный кусочек мышцы (икроножной и др.) измельчают в 50% растворе глицерина на тонкие волоконца с помощью препаровальных игл. Эти волоконца сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Личинки трихинелл свернуты в мышцах в виде спирали и находятся в капсулах (рис. 21).

Рентгенологический метод исследования применяют при эхинококкозе, циетицеркозе, трихинеллезе (после обызвествления личинок) и аскаридозе.

В ряде случаев используют иммунологические методы диагностики.

Гельминты, а также продукты их жизнедеятельности обладают антигенными свойствами для организма человека. В результате пребывания гельминтов в организме человека происходит аллергическая перестройка, которая может быть выявлена специальными внутрикожными аллергическими пробами. Кроме того, в организме инвазированных образуются различные антитела - комплементсвязывающие преципитины. Методы иммунодиагностики приобретают особую ценность в тех случаях, когда не может быть использована овоскопия, в частности при трихинеллезе, эхинококкозе, цистицеркозе, аскаридозе в миграционной стадии и при инвазии только мужскими особями.

При эхинококкозе и трихинеллезе ставят реакцию латекс-агглютинации, Калюса, цистицеркозе - пробу с антигеном, приготовленным Бобровым и Возной. При некоторых гельминтозах возможно применение серологических исследований: реакция преципитации личинок аскарид с сывороткой крови больного в миграционной стадии аскаридоза, реакция преципитации сыворотки крови больного трихинеллезом с антигеном из личинок трихинелл, РСК при эхинококкозе, трихинеллезе, описторхозе, цистицеркозе.

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и косвенные. Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани. Косвенные методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, серологическими реакциями, общим исследованием крови, мочи. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтоовоскопические и протозооскопические. При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления. В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов. Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе. При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия. Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта. Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы. Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде "лапши"), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов (в виде "белых обсечек") или они активно выползают из анального отверстия. Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом). Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий. Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом. При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде "розетки"). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо. При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.

Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.

К сложным методам относятся методы обогащения:

а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);

б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).

Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.

Прежде чем проводить лечебно-профилактические мероприятия при определенных гельминтозах сельскохозяйственных и промысловых животных, необходимо своевременно поставить точный диагноз болезни. Существуют две группы методов диагностики гельминтозов - прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.

Прижизненная диагностика гельминтозов

Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на основании результатов лабораторных методов исследований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунобиологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют данные исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические и эпизоотологические наблюдения. Основные методы диагностики - лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах (кусочках кожи), в содержимом пунктатов и абсцессов.

Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях). В зависимости от целевого назначения лабораторные исслелования подразделяют на гельминтоовоскопические, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические методы исследований.

Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктиокаул, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий по методам Бермана-Орлова и Вайда.

Гельминтоскопические или макрогельминтоскопические исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников нестод). В практических условиях этим способом устанавливают диагноз на аскаридоз свиней, дрепанидотениоз гусей и другие гельминтозы.

Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют: а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий); б) исследование выделений других органов; в) исследование тканей.

Гельминтокопрологические исследования

Для этих же целей предложен специальный прибор, состоящий из стальных браншей, переходных ветвей и двух прикрепленных к ветвям полусферических поверхностей. Взятие фекалий из прямой кишки животных при помощи этого прибора облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.

У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается взятие проб фекалий с пола, если они свежие и известно, от какого животного. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).

Все пробы фекалий этикетируют: по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) простым карандашом пишут номер пробы (иногда и кличку коров). К пробам фекалий прилагают опись, в которой указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых - кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб. В сопроводительной желательно указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации). Необходимо стараться быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16-20 часов из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза и протостронгилидозов, а также других гельминтозов.

Если пробы фекалий в день взятия не исследуют, то их помещают в холодильник или подвал при температуре не выше 10°. Дезинфицирующие средства не приостанавливают развитие личинок внутри яиц гельминтов. Результаты исследования фекалий регистрируют в специальном журнале.

Оборудование для гельминтокопрологических исследований. Достоверность гельминтокопрологических исследований в значительной степени зависит от качества лабораторного оборудования. В 1968 г. на Украине разработан набор стандартного оборудования для массового исследования фекалий на гельмннтозы. Он состоит из предметов, изготовленных преимущественно из ударопрочного полистерола двух цветов, которые легко моются и обезвреживаются (выдерживают кипячение), а также удобны при транспортировке. В состав набора входят стаканчики различной емкости, воронки, конические пробирки, ситечки разных размеров, штатив с пятью планками (каждая на шесть воронок), кювет (по размерам штатива), коробки для хранения посуды, а также резиновые груши, стеклянные палочки и металлические петли (рис. 1).

В отличие от ранее применявшегося разнородного оборудования новый набор повышает эффективность лабораторных исследований фекалий и производительность труда ветеринарных работников, позволяет шире проводить количественные гельминтокопрологические исследования стандартизированными методами (контроль дегельминтизаций), а также улучшает эстетическую сторону этой работы.

Различают качественные и количественные методы исследований фекалий.

Качественные гельминтокопрологические исследования

Качественные методы исследований позволяют установить, какими гельминтами заражены животные.

Гельминтоовоскопические методы. Для прижизненной диагностики гельминтозов предложено большое количество методов гельминтоовоскопии, из которых рассмотрим только те, которыми чаще пользуются в ветеринарной практике.

Большинство гельминтокопрологических методов диагностики основано на разнице удельного веса яиц, личинок гельминтов или их фрагментов, с одной стороны, и жидкости, в которой взвешены исследуемые фекалии, - с другой. В зависимоти от соотношения удельного веса этих компонентов различают методы флотации, осаждения и комбинированные.

Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют жидкости (насыщенные растворы солей), удельный вес которых больше веса яиц гельминтов. В лабораторной практике наиболее широко применяют насыщенный раствор поваренной соли (удельный вес 1,18). Для приготовления такого раствора в кастрюлю с кипящей водой постепенно добавляют при помешивании хлорид натрия до образования на дне небольшого осадка (на 1 л воды берут около 400 г поваренной соли). Горячий раствор фильтруют в бутыль через несколько слоев марли или вату и применяют после остывания (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).

Реже в ветеринарных лабораториях используют насыщенные растворы сульфата магния с удельным весом 1,35 (920 г на 1 л горячей воды), гипосульфита натрия с удельным весом от 1,37 до 1,41, в зависимости от температуры окружающей среды (1750 г на 1 л горячей воды) и азотнокислого натрия с удельным весом 1,4 (соотношение селитры и горячей воды 1:1).

Метод Фюллеборна характеризуется простотой выполнения и высокой эффективностью при большинстве нематодозов и цестодозов животных, поэтому он занимает первое место среди других, гельминтокопрологических методов диагностики. В стеклянный, полистероловый или пластмассовый стаканчик емкостью 50-100 мл помещают 3-5 г фекалий и при помешивании стеклянной палочкой постепенно добавляют насыщенный раствор поваренной соли (хлорида натрия) из расчета на одну часть фекалий 15-20 частей флотационной жидкости. Плотные фекалии овец предварительно можно растереть с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив необходимое количество раствора хлорида натрия. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют палочкой, а взвесь фекалий целесообразно профильтровать в другой стаканчик через сито (иногда употребляют молочные ситечки). После отстаивания заряженной пробы в течение 45-60 минут металлической петлей снимают три капли поверхностной пленки, помещают их на предметное стекло и микроскопируют без покровного стекла. После каждой пробы петли промывают в стакане с водой (вместо рекомендуемых в некоторых руководствах прожиганий их на спиртовке).

Метод Калантарян - видоизмененный метод Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор азотнокислого натрия. Время отстаивания взвеси 15-30 минут. Применяют для диагностики и акантоцефалезов.

Методы осаждения. При методах осаждения используют жидкости с меньшим удельным весом, чем удельный вес яиц.

Метод последовательного промывания. Небольшое количество фекалий (5 г) размешивают в стаканчике с 10-кратным количеством воды. Смесь фильтруют в большой стакан и доливают воду, после чего фильтрат отстаивают 5 минут. Затем сливают или отсасывают спринцовкой верхний слой жидкости до осадка; к осадку добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают снова 5 минут. Эти манипуляции повторяют до просветления верхнего слоя жидкости в стакане. Жидкость последний раз сливают, а осадок наносят на стекло или в бактериологическую чашку и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики большинства трематодозов и акантоцефалезов.

Метод Горшкова основан на принципе осаждения с последующей концентрацией яиц гельминтов. 150-300 г фекалий лошади помещают на металлическое сито или марлю в большую стеклянную воронку диаметром в верхней части 15-20 см. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10-15 см с зажимом на конце. Фекалии разрыхляют и заливают доверху теплой водой. Фекалии в воронке выдерживают от 4 часов до одних суток, после чего зажим осторожно открывают, часть жидкости выпускают в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 минуты. Затем жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом. Этим методом диагностируют драшейоз и габронематоз лошадей.

Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы имеют сравнительно ограниченное применение в производственных условиях.

Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (3-5 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 минуты, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и поваренной соли. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором поваренной соли.

Метод Щербовича. Техника исследования фекалий напоминает предыдущий метод. Отличается от него тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенный раствор гипосульфита натрия (при макраканторинхозе свиней) или сернокислой магнезии (). По сравнению с методом Дарлинга этот метод более эффективен.

Флотационно-седиментационный метод Демидова рекомендуют для диагностики фасциолеза, а также других трематодозов жвачных. Пробу фекалий (3 г от овец и 5 г от крупного рогатого скота) помещают в стакан емкостью 200 мл и наливают в него доверху насыщенный раствор поваренной соли и тщательно размешивают стеклянной палочкой, после чего взвесь отстаивают 15-20 минут. Всплывшие на поверхность грубые частицы удаляют бумажным совочком, а надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой (при исследовании большого количества проб жидкость можно сливать), оставляя на дне 20-30 мл осадка. К осадку доливают воду до полного объема стакана и тщательно размешивают. Смесь фильтруют в обычный стакан через марлю или металлическое сито и отстаивают 5 минут. Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя на дне 15-20 мл осадка, который переносят в конический стаканчик, пропаласкивают обычный стакан и выливают смыв в маленький. Взвесь отстаивают в коническом стаканчике 3-5 минут, а жидкость в последующем отсасывают (эту процедуру повторяют). Просветленный осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Этот метод эффективнее метода последовательного промывания.

Гельминтоларвоскопические методы. Метод Бермана-Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки (пластмассовой, полистероловой или стеклянной), резиновой трубки (10-15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (35-38°). 10-15 г свежих фекалий кладут на сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку. Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2-4 часа, а от телят - не менее 6-7 часов. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют в течение 2-3 минут. После этого верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами, поэтому во многих ветеринарных лабораториях нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость не центрифугируют.

Фекалии жвачных можно исследовать на легочные нематодозы (особенно в экспедиционных условиях) упрощенным методом гельминтоларвоскопии (без использования воронок). Для этой цели применяют небольшие полуконические стаканчики (50 мл). Пробы фекалий помещают на ситечки или завертывают в марлю и опускают в стаканчики с водой. Через несколько часов фекалии удаляют, жидкость из стаканчика отсасывают или сливают, а осадок микроскопируют.

Метод Вайда. Несколько шариков фекалий от мелких жвачных помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды. Через 10-20 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под малым увеличением микроскопа. Эффективность этого метода значительно ниже в сравнении с предыдущим методом, поэтому его реже применяют для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов овец.

Метод дифференциальной диагностики стронгилятозов по инвазионным личинкам. Возбудители большинства кишечных стронгилятозов имеют почти одинаковое строение яиц, поэтому при гельминтоовоскопии можно поставить только групповой диагноз (например, стронгилятозы).

Для установления более точного диагноза (родового) в ветлабораториях иногда получают культуру инвазионных личинок стронгилят. Около 5 г фекалий помещают в бактериологическую чашку, закрывают крышкой и ставят ее в термостат при температуре 25-30° на одну неделю. Затем фекалии с личинками исследуют по методу Бермана-Орлова (для выделения инвазионных личинок из фекалий).

Инвазионные личинки разных родов кишечных стронгилят отличаются по величине тела, строению хвостового конца чехлика и по количеству кишечных клеток. Например, личинки эзофагостом более крупные (до 1 мм длины), нитевидный хвостовой конец чехлика длинный, а кишечник имеет 20-32 клетки; личинки гемонхов средней длины (около 0,8 мм), с нитевидным хвостовым концом чехлика, кишечник имеет 16 клеток.

Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления верхнего слоя. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок малыми порциями просматривают в кюветках с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консервирующую жидкость. Чтобы выявить мелких нематод, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10-20-кратным увеличением.

Количественные гельминтокопрологические исследования

Стандартизированный метод Фюллеборна менее точен в сравнении с методом Столла, но в виду простоты выполнения его широко применяют в ветеринарной практике для контроля эффективности дегельминтизаций животных. По технике выполнения стандартизированный метод напоминает другие методы качественных гельминтоовоскопических исследований. Однако у него имеется ряд особенностей, основными из которых являются следующие: 1) навески фекалий должны быть равными; 2) посуда одного обьема; 3) время отстаивания водных взвесей фекалий одно и то же; 4) петли одинакового диаметра, исследование равного количества капель.

Для ориентировочного учета интенсивности диктиокаулезной и прогостронгилидозной инвазии у жвачных можно применить стандартизированный метод Бермана-Орлова. Достоверность результатов повышается при увеличение количества и кратности исследований.

Исследование выделений других органов

Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота (возбудитель - Thelazia rhodesi). Из спринцовки орошают конъюнктивальные полости водным раствором йода; вытекающую жидкость собирают в кюветку или почковидный тазик и осматривают на наличие телязий. В данном случае водный раствор йода оказывает и лечебное действие.

Исследование истечений из клоаки проводят для прижизненной диагностики . Вытекающую слизь помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом с целью обнаружений яиц возбудителя болезни.

Исследование соскоба с перианальных складок - основной метод диагностики . Лопатковидной палочкой или спичкой, смоченной смесью равных частей глицерина и воды, делают соскоб с перианальных складок промежности и внутренней поверхности корня хвоста. Соскоб переносят на предметное стекло в каплю глицерина с водой, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Обнаружение яиц оксиур подтверждает клинический диагноз.

Исследование соскобов кожи из «летних язв» рекомендуется для диагностики кожной формы драшейоза и габронематоза. Соскоб берут со свежеизъязвленной поверхности кожи и помещают в каплю разведенной соляной кислоты (1:1000). Затем препарат расщепляют препаровальными иглами, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом для обнаружения личинок драшей или габронем.

Исследование тканей

Исследование кожи крупного рогатого скота (по Гнединой) применяют для диагностики онхоцеркоза. На нижней брюшной стенке у животного после подготовки операционного поля вырезают небольшой кусочек кожи толщиной 2 мм (с небольшое овсяное зерно), а ранку смазывают настойкой йода. В ветеринарной лаборатории этот кусочек кожи помещают на предметное стекло в физиологический раствор, расщепляют препаровальными иголками, а затем все сливают в центрифужную пробирку и ставят ее на несколько часов в термостат при температуре 37-38°. Затем волокна кожи удаляют, жидкость центрифугируют, а осадок микроскопируют с целью обнаружения подвижных микроонхоцерков.

Исследование кусочков мышц на часто проводят посмертно. Иногда для прижизненной диагностики трихинеллеза используют метод биопсии. Путем оперативного вмешательства вырезают кусочек мышцы (например, из наружных мышц уха), из которых готовят мелкие срезы (с овсяное зерно). Последние помещают на нижнее стекло компрессория, покрывают верхним стеклом и сближают их винтами до полного расплющивания. Просматривают срезы под трихинеллоскопом, малым увеличением микроскопа, с помощью проекционного трихинеллоскопа или проекционной камеры КТ-3.

Диагностические дегельминтизации

Для диагностической дегельминтизации отбирают несколько животных, изолируют от остального поголовья и задают им антгельминтик в терапевтической дозе. Выделенные в течение одних-двух суток фекалии от этих животных собирают и подвергают гельминтоскопическому исследованию на предмет обнаружения возбудителя болезни. В производственных условиях диагностические дегельминтизации нередко проводят для прижизненной диагностики мониезиоза жвачных, дрепанидотениоза гусей, цестодозов плотоядных, аскаридоза свиней и аскаридиоза кур.

Иммунологические реакции

Аллергические кожные реакции предложены для прижизненной диагностики фасциолеза овец, описторхоза плотоядных, и , мониезиоза овец, гемонхоза и диктиокаулеза овец, онхоцеркоза крупного рогатого скота и лошадей и трихинеллеза свиней.

Из серологических методов следует указать на реакцию сколексопреципитации, позволяющую диагностировать ранние стадии эхинококкоза и реакцию преципитации с использованием живых личинок аскарид и трихинелл для выявления соответствующих гельминтозов.

Исследование промежуточных хозяев гельминтов

Результаты гельминтологического обследования животных всегда должны дополняться данными исследований на гельминтозы промежуточных хозяев. Они позволяют выяснять гельминтологическую ситуацию, прогнозировать появление гельминтозов. Промежуточными хозяевами гельминтов могут быть моллюски (пресноводные и сухопутные), ракообразные (циклопы, дафнии, бокоплавы, водяные ослики), дождевые черви, насекомые (мухи, мошки, мокрецы, стрекозы, муравьи, жуки), почвенные клеши.

Эпизоотологическое значение имеет плотность (количественный состав) отдельных видов промежуточных хозяев. Чем она выше, тем больше имеется возможностей для заряжения животных гельминтозями. Наземные промежуточные хозяева находятся в разных местах (в навозных кучах, на выгулах, пастбищных участках и др.). Водные промежуточные хозяева в огромном количестве обитают у берегов стоячих мелких водоемов, в зарослях растений. В этих местах животные (особенно ) часто заражаются гельминтозами.

Промежуточных хозяев на наличие личинок гельминтов надо исследовать в свежем (лучше живом) состоянии под бинокулярной лупой или малым увеличением микроскопа. Личиночные стадии гельминтов в теле промежуточных хозяев находятся на разных стадиях развития, но наиболее заметными являются инвазионные личинки. В итоге исследований определяется экстенсивность (процент) и интенсивность (количество) инвазированности промежуточных хозяев личинками определенных видов гельминтов.

Орибатидные или панцирные, клещи (до 1 мм длины). Обитают в верхних слоях почвы. Это промежуточные хозяева мониезий жвачных и других гельминтов. Для обнаружения личинок ленточных червей (цистицерроидов) предварительно в капле воды на предметном стекле (под контролем лупы) расщепляют на части панцирь орибатидного клеща, затем препарат покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Цистицеркоиды мониезий округлой формы (0,15-0,19 мм в диаметре), снабжены четырьмя присосками и хвостовым придатком. Они очень нежные, поэтому не следует применять метод компрессорного исследования клещей.

Дождевые черви других родов (Criodrilus, Eophila) обитают в водоемах с топкими, илистыми берегами. Они зарегистрированы в качестве промежуточных хозяев возбудителей гистрихоза и порроцекоза уток. Личинка гистрихиса очень крупная (до 3 см длины), беловатого цвета, просвечивает сквозь кожные покровы червя в виде волнистой полосы. Личинки порроцекумов в десять раз меньше предыдущей личинки (2,5-3 мм); они обнаруживаются в кровеносных сосудах при компрессорном исследовании дождевых червей под микроскопом.

Исследование бокоплавов. Бокоплавы достигают длины до 2 см, обитают в морских и пресноводных водоемах. Зарегистрированы они в качестве промежуточных хозяев возбудителей полиморфоза. стрептокароза и тетрамероза птиц. Личинок обнаруживают при компрессорном исследовании этих рачков. Личинки (акантеллы) полиморфуса овальной формы, оранжевого цвета, до 1 мм длины, заметны макроскопически.

Исследование водяных осликов. Водяные ослики от 1 до 1,5 см длины, живут в пресноводных водоемах, являются промежуточными хозяевами возбудителя филиколлеза птиц. При компрессорном исследовании можно выявить личинку (акантеллу) белого цвета, овальной формы, 0,7 мм длины.

Можно также исследовать и других промежуточных хозяев (мошек, мокрецов, мух, стрекоз, жуков, муравьев).

Люминесцентная микроскопия

Метод люминесцентной микроскопии (по В. Г. Эврановой) - новый метод диагностики гельминтозов. Он позволяет дифференцировать однотипные яйца разных видов гельминтов, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых. Предварительно яйца трематод, цестод и нематод обрабатывают растворами акридина оранжевого и другими флуорохромами. Жизнеспособные яйна и личинки нематод не люминесцируют или слабо люминесцируют, в то время как мертвые ярко светятся и окрашены в оранжевый, желто-зеленый или желтый цвет.

При люминесцентной микроскопии можно дифференцировать яйца главнейших цестод плотоядных, яйца возбудителей и гетеракидоза кур, имеющих, как известно, сходное строение по величине, форме и окраске, а также различать жизнеспособные и мертвые ооцисты кокцидий.

Препараты просматривают под микроскопом МУФ-3 или МЛ-2. Методика люминесцентной микроскопии сравнительно проста и может быть использована в производственных условиях (ветеринарных лабораториях).

Из других исследований, имеющих подсобное значение в установлении диагноза на гельминтозы. можно указать на такие, как выяснение морфологического состава крови (учет эозинофилии), метод определения фракции белков.

Краткая характеристика яиц гельминтов

Яйца представителей разных классов различаются по величине, цвету, форме, строению оболочек и внутреннего содержимого.

Яйца трематод. Чаще овальной формы с крышечкой на одном полюсе. Оболочка гладкая. У некоторых видов оболочка снабжена филаментами (отростками), бугорками. Окраска яиц от светло-серой до коричневой (чаще желтая).

Яйца цестод. Бывают двух типов: лентецов и цепней. У лентенов они напоминают яйца трематод (овальные с крышечкой). Яйца цепней резко отличаются по строению от яиц гельминтов других классов: они чаще средней величины, округлой формы, серого цвета, зрелые (внутри зародыш - онкосфера с тремя парами эмбриональных крючьев).

Яйца нематод. Отличаются от яиц трематод отсутствием крышечки; от яиц цестод - отсутствием онкосферы.

Размеры, форма, строение и цвет оболочек яиц нематод очень разнообразны. Наружная оболочка бывает гладкой, бугристой, ячеистой: толщина оболочек варьирует от тонкой (у стронгилят) до толстой (у трихоцефал). У большинства нематод яйца овальной формы, симметричные, у некоторых - получилиндрические (у драшей). Большинство нематод выделяют наружу незрелые яйца на предсегментационной стадии или нескольких шаров дробления, меньшинство - зрелые (внутри яйца сформирована личинка).

Яйца скребней. Они имеют овальную, эллипсоидную и веретенообразную формы: размер их от среднего до крупного. Выделяемые во внешнюю среду яйца содержат внутри личинку - акантор с десятью эмбриональными крючьями (зрелые).

Клинические наблюдения

Эпизоотологические данные

При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйственных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.). Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасциолеза. Заболевание гусят летом с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предполо-жительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3-4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом. Необходимо также учитывать зональные особенности гельминтозов домашних животных, желательно в комплексе с клиническими наблюдениями.

Исследование фекалий

Микроскопирование вначале проводят при слабом увеличении (Х80). Простейших можно заменить по более сильной преломляемости света, а некоторые виды - по их движению или изменению формы. Объект, замеченный при малом увеличении, рассматривают при увеличении 400 или 600. При отсутствии опыта просмотр мазков следует производить сразу при большом увеличении, что, однако, значительно увеличивает время на изучение препарата. Просмотр мазков при большом увеличении следует производить при более сильном освещении, регулируя его с помощью конденсора.

Дифференциальными признаками отдельных видов амеб в нативном мазке являются форма и размер тела, видимость ядра, характер образования псевдоподий, движение, деление цитоплазмы на экто- и эндоплазму, характер включений (фагоцитированные эритроциты и др.). При дифференцировке видов жгутиконосцев - размер и форма тела, количество жгутиков, характер передвижения, наличие или отсутствие ундулирующей мембраны. Специфическими признаками балантидиев являются размер, форма тела, движение, реснички, цитостом и др.

Основным отличительным признаком вегетативных форм простейших в живом состоянии служит движение. В мазках встречаются различного рода неподвижные образования - растительная клетчатка, мышечные волокна, споры, грибки и т.д. Они не должны приниматься во внимание при протозоологической диагностике.

Метод нативного мазка прост и доступен для любой лаборатории. Он позволяет при нахождении тканевых форм дизентерийных амеб с фагоцитированными эритроцитами поставить совершенно точный диагноз амебной дизентерии, а при обнаружении балантидиев и лямблий - диагноз балантидиаза и лямблиоза.

Окраска мазков раствором Люголя . Эта окраска применяется для диагностики простейших по цистам. Ею пользуются при исследовании оформленного, полуоформленного и кашицеобразного кала.

Для приготовления мазка конец деревянной палочки пачкается в фекалиях и обмывается в капле йодного раствора (J - 1,0 г, KJ - 2 г, дистиллированная вода - 100 мл), нанесенного на предметное стекло, до получения равномерной эмульсии. Препарат накрывают покровным стеклом и через 3 – 5 мин. микроскопируют. Мазок должен быть достаточно прозрачным для изучения его в проходящем свете.

Среди остатков непереваренной пищи, спор, грибков, йодофильных бактерий цисты простейших, окрашенные в коричневый или зеленовато-желтый цвет, выделяются строго определенной, характерной для каждого вида формой, размером, отчетливыми очертаниями краев, наличием гладкой, прозрачной, двухконтурной оболочки, содержимым цитоплазмы, а также наличием ядер с нечетко выраженной структурой. В цистах амеб заметны окрашенные в коричневый (темно-бурый) цвет гликогеновые вакуоли. Степень окраски этих вакуолей и очертания их границ варьируют в цистах простейших одного и того же вида в зависимости от их зрелости.