Cercetare de baza. celule stelate celule stelate

07.03.2020

Curge nasul

A fost efectuată o analiză ultrastructurală, imunohistochimică și morfometrică a populației de celule stelate hepatice în dinamica dezvoltării fibrozei și cirozei de origine virală infecțioasă. A fost dezvăluită activarea fibrogenică a celulelor stelate hepatice, care se caracterizează prin reducerea picăturilor de lipide și expresia sincronă a caracteristicilor asemănătoare fibroblastelor - o reacție imunohistochimică pozitivă la α-actina mușchilor netezi, hiperplazia reticulului citoplasmatic granular și formarea pericelulară a numeroase fibrile de colagen. S-a demonstrat că, în ciuda scăderii progresive a densității numărului de celule stelate care conțin lipide în timpul dezvoltării fibrozei, rămâne nevoia de a menține funcția de depunere a retinoizilor - în ciroza hepatică, celulele stelate care conțin lipide au fost găsite în septuri fibroase și în interiorul lobulilor. S-a ajuns la concluzia că celulele stelate hepatice sunt o populație eterogenă polimorfă, cu un spectru larg de activitate funcțională.

fibrogeneza

celule stelate ale ficatului

ultrastructură

imunohistochimie

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. Rolul celulelor stelate hepatice în regenerarea ficatului // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – P. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Ciroză hepatică și celule stelate hepatice // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - Vol. 21. – P. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Clasificarea hepatitei cronice: Diagnostic, gradare și stadializare // Hepatologie. - 1994. - Vol. 19. - P. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Fibroza hepatică: Semnale care conduc la amplificarea celulei stelate hepatice fibrogene // Front. Biosc. - 2003. - Vol. 8. – P. 69–77.

5. Geerts A. Despre originea celulelor stelate: mezodermice, endodermice sau neuro-ectodermice? // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – P. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Fibroza ficatului: căutarea răspunsurilor modelului celular // Liver Intern. - 2007. - Vol. 10. – P. 434–439.

7. Kisseleva T., Brenner D.A. Rolul celulelor stelate hepatice în fibrogeneza și inversarea fibrozei // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - Vol. 22.–P. S73–S78.

8. Ryder S.D. Progresia fibrozei hepatice la pacienții cu hepatită C: un studiu prospectiv de biopsie hepatică repetă // Gut. - 2004. - Vol. 53. – P. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. ciroză hepatică // Lancet. - 2008. - Vol. 371. - P. 838-851.

10. Senoo H. Structura și funcția celulelor stelate hepatice // Med. electron. microsc. - 2004. - Vol. 37. – P. 3–15.

Celulele stelate hepatice (lipocite, celule Ito, celule hepatice acumulatoare de grăsime) sunt localizate în spațiile Disse dintre hepatocite și căptușeala endotelială a sinusoidelor și joacă un rol principal în reglarea homeostaziei retinoide, depunând până la 80% din vitamina A. . Spațiul Disse este zona de cea mai mare responsabilitate funcțională, oferind schimb transsinusoidal. Folosind modele experimentale și în cultura celulară, s-a demonstrat că celulele stelate hepatice se diferențiază în picături mari de lipide citoplasmatice care conțin vitamina A; acest fenotip este interpretat ca „repaus”.

O importanță tot mai mare se acordă rolului celulelor stelate în dezvoltarea fibrozei și cirozei hepatice. La primirea stimulilor fibrogenici, celulele stelate „repaus” „se transdiferențiază”, dobândind un fenotip asemănător miofibroblastului și încep să producă colagen, proteoglicani și alte componente ale matricei extracelulare. Fibroza la nivelul venelor centrale, sinusoidelor sau vaselor porte limitează hemodinamica normală a ficatului, ceea ce duce la reducerea parenchimului eficient metabolic, în continuare - hipertensiunea portală și șuntarea porto-sistemică. Acumularea de țesut conjunctiv în spațiile Disse perturbă traficul metabolic normal dintre sânge și hepatocite, interferând cu clearance-ul macromoleculelor circulante, modificând interacțiunile intercelulare și conducând la disfuncția celulelor hepatice.

Există opinii contradictorii cu privire la faptul dacă celulele stelate activate sunt capabile să revină la un fenotip de repaus. S-a obținut dovezi că celulele stelate fibrogenice ale ficatului pot nivela parțial procesul de activare, de exemplu, atunci când sunt expuse la retinoizi sau când interacționează cu componente ale matricei extracelulare, inclusiv colagen fibrilar de tip I sau componente ale membranei bazale. Soluția acestei probleme stă la baza problemei reversibilității fibrozei și a dezvoltării abordărilor terapeutice pentru tratamentul cirozei hepatice.

Scopul studiului- să efectueze un studiu cuprinzător al caracteristicilor structurale și funcționale ale celulelor stelate hepatice în dinamica modificărilor fibrotice într-un model de infecție cronică cu VHC.

Material și metode de cercetare

A fost efectuat un studiu cuprinzător, optic-optic, electron-microscopic și morfometric al specimenelor de biopsie hepatică în infecția cronică cu VHC în diferite stadii ale modificărilor fibrotice (100 de probe împărțite în 4 grupuri egale în funcție de severitatea fibrozei). Este important de reținut că celulele stelate care conțin lipide sunt cel mai bine vizualizate pe secțiuni semisubțiri, celule stelate fibrogenice - numai pe secțiuni ultra-subțiri sau folosind imagistica imunohistochimică.

Probele de ficat au fost fixate într-o soluție 4% de paraformaldehidă răcită la 4°C, preparată în tampon fosfat Millonig (pH 7,2-7,4); Secțiunile de parafină au fost colorate cu hematoxilină și eozină în combinație cu reacția Perls, conform lui van Gieson, cu colorare suplimentară a fibrelor elastice cu resorcinol fuchsin Weigert și a fost efectuată o reacție PAS. Secțiunile semi-subțiri au fost colorate cu reactiv Schiff și azur II. Studiul a fost realizat cu un microscop universal Leica DM 4000B (Germania). Micrografiile au fost realizate folosind o cameră digitală Leica DFC 320 și software-ul Leica QWin. Secțiuni ultrasubțiri contracolorate cu acetat de uranil și citrat de plumb au fost examinate într-un microscop electronic JEM 1010 la o tensiune de accelerare de 80 kW.

Stadiul fibrozei hepatice a fost determinat pe o scară de 4 puncte, variind de la fibroza portală (stadiul I) până la ciroza cu formarea de septuri vascularizate porto-centrale și transformarea nodulară a parenchimului. Celulele stelate hepatice și alte elemente celulare producătoare de matrice au fost detectate în dinamica fibrozei prin expresia α-actinei musculare netede.

Expresia α-actinei musculare netede în celulele hepatice producătoare de matrice a fost testată utilizând o metodă de imunoperoxidază indirectă în două etape cu un sistem de imagistică cu control negativ streptavidină-biotină pentru produsele de reacție. Anticorpii primari utilizați au fost anticorpi monoclonali de șoarece împotriva a-actinei musculare netede (NovoCastra Lab. Ltd, UK) diluați 1:25; ca anticorpi secundari – anticorpi universali biotinilati. Produșii reacției imunohistochimice au fost vizualizați folosind diaminobenzidină, apoi secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină Mayer. Densitatea numărului de celule stelate care conțin lipide a fost evaluată pe secțiuni semisubțiri într-o unitate de câmp vizual de 38.000 µm2. Pentru prelucrarea datelor statistice a fost folosit testul t Student; diferențele dintre parametrii comparați au fost considerate semnificative dacă probabilitatea de eroare P a fost mai mică de 0,05.

Rezultatele cercetării și discuții

Cu modificări fibrotice minime în ficat la pacienții cu hepatită cronică C, de regulă, se găsește un număr destul de mare de celule stelate, care sunt vizibile clar numai pe secțiuni semisubțiri și ultrasubțiri și sunt diferențiate în spațiile Disse. prin prezenţa unor picături mari de lipide în citoplasmă. Transformarea celulelor stelate din „repaus”, care conțin retinoizi, în cele fibrogenice este însoțită de o scădere treptată a numărului de picături de lipide. În acest sens, numărul real de celule stelate poate fi determinat folosind un studiu cuprinzător la microscop electronic și imunohistochimic.

În stadiile inițiale ale fibrozei (0, I) în hepatita cronică C, la studierea secțiunilor semi-subțiri, populația de celule stelate hepatice se distingea printr-un polimorfism pronunțat - dimensiunea, forma, numărul de picături de lipide și proprietățile lor tinctoriale variau brusc. : diferențe în osmiofilitatea materialului care conține lipide în diferite celule. Densitatea numărului de celule stelate hepatice, vizualizată în preparate prin prezența picăturilor de lipide citoplasmatice, a fost de 5,01 ± 0,18 pe unitatea de câmp vizual.

Caracteristicile ultrastructurii celulelor stelate sunt asociate cu eterogenitatea densității electronice a picăturilor de lipide nu numai în cadrul aceleiași celule, ci și între diferite lipocite: o margine marginală mai osmiofilă s-a evidențiat pe fundalul unui substrat lipidic transparent la electroni; în plus, nucleii sunt puternic polimorfi, iar lungimea proceselor citoplasmatice a variat. Printre caracteristicile ultrastructurale ale celulelor stelate care conțin lipide, alături de prezența picăturilor de lipide, se poate observa o cantitate foarte mică de matrice citoplasmatică, săracă în organele membranare, inclusiv mitocondrii și, prin urmare, aparent, acest fenotip al lipocitelor se numește " repaus" sau "pasiv" .

În stadiile fibrozei II și III, ultrastructura celor mai multe celule stelate a dobândit așa-numitul fenotip mixt sau de tranziție - prezența simultană a caracteristicilor morfologice atât ale celulelor care conțin lipide, cât și ale celulelor asemănătoare fibroblastelor. În astfel de lipocite, nucleii au avut invaginări profunde ale nucleolemei, un nucleol mai mare și un volum crescut de picături de lipide care rețin citoplasmă. În același timp, numărul de mitocondrii, ribozomi liberi, polizomi și tubuli ai reticulului citoplasmatic granular a crescut brusc. De regulă, a existat un contact membranar al picăturilor de lipide și al mitocondriilor, indicând „utilizarea” lipidelor. În multe celule, degradarea picăturilor de lipide a fost realizată prin formarea de autofagozomi, care sunt apoi eliminați prin exocitoză. În unele cazuri, a fost observată proliferarea celulelor stelate cu un fenotip mixt.

Celulele stelate producătoare de matrice, cele mai numeroase în stadiul de ciroză hepatică, s-au caracterizat prin absența completă a granulelor lipidice, o formă asemănătoare fibroblastelor, un compartiment dezvoltat de sinteză a proteinelor și formarea structurilor fibrilare contractile în citoplasmă; pericelular în spaţiile lui Disse au fost localizate numeroase mănunchiuri de fibrile de colagen cu o striaţie transversală specifică.

În general, în cursul progresiei hepatitei cronice C, însoțită de fibrogeneza perisinusoidală intralobulară, au existat semne morfologice de activare a celulelor stelate hepatice, transformarea lor din așa-numitele „pasive”, acumulatoare de vitamina A, în celule fibrogenice și proliferante.

În stadiul de transformare în ciroză hepatică, a existat o scădere semnificativă a densității numerice a celulelor stelate care conțin lipide, indicând transformarea lor fibrogenă. Cu toate acestea, în cazul cirozei hepatice formate, în cazuri izolate, au existat zone ale parenchimului hepatic cu celule stelate perisinusoidale care conţin lipide. În plus, într-o probă, în țesutul fibros periportal au fost găsite numeroase lipocite, ceea ce indică probabil rolul important al celulelor stelate în metabolismul retinoizilor din organism, chiar și în stadiul de ciroză de organ. În plus, celulele stelate par să aibă o serie de alte funcții, ele se găsesc și în organe extrahepatice, cum ar fi pancreasul, plămânii, rinichii și intestinele și există o opinie că celulele stelate hepatice și extrahepatice formează un sistem de celule stelate diseminate de corpul, similar cu sistemul APUD. De exemplu, în ciuda asocierii celulelor stelate fibrogenice cu ciroza hepatică, activarea acestora poate juca un rol benefic în cazurile de leziune acută, deoarece rezultatul este un circuit stromal adecvat pentru regenerarea celulelor parenchimatoase.

Severitatea fibrozei perihepatocelulare în infecția cronică cu VHC, conform analizei morfometrice, a avut o corelație inversă semnificativă cu densitatea numerică a celulelor stelate care conțin lipide - în stadiul de fibroză III și cu ciroza de organ, aceasta a fost de 0,20 ± 0,03 pe câmp vizual. unitate, care este semnificativ mai puțin (p< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

Activitatea fibrogenică a celulelor hepatice producătoare de matrice a fost testată de noi folosind un studiu imunohistochimic asupra expresiei alfa-actinei musculare netede. Produse ale reacțiilor imunohistochimice de intensitate variabilă au fost găsite în citoplasma celulelor stelate activate localizate în interiorul lobulilor hepatici. Expresia deosebit de semnificativă a α-actinei mușchilor netezi a fost observată în citoplasma fibroblastelor și miofibroblastelor din zonele porte, celulele musculare netede ale vaselor și miofibroblastele din jurul venelor centrale.

Majoritatea datelor privind mecanismele celulare ale fibrogenezei provin din studiile efectuate pe celule stelate hepatice, cu toate acestea, este clar că diferite celule producătoare de matrice (fiecare cu o localizare specifică, fenotip imunohistochimic și ultrastructural) contribuie la dezvoltarea fibrozei hepatice. Acestea includ fibroblaste și miofibroblaste ale tractului portal, celule musculare netede vasculare și miofibroblaste din jurul venelor centrale, care sunt activate în cazul leziunilor hepatice cronice.

Concluzie

A fost demonstrat rolul celulelor stelate hepatice în dezvoltarea fibrozei de organ în hepatita cronică C. Odată cu progresia fibrozei, densitatea numerică a celulelor stelate care conțin lipide scade semnificativ, în timp ce o parte a populației păstrează așa-numita „repaus”. "fenotip pentru funcția metabolică. Celulele stelate hepatice „asemănătoare miofibroblastelor” în stare de activare fibrogenă se caracterizează prin următoarele caracteristici structurale și funcționale: scăderea numărului și dispariția ulterioară a picăturilor de lipide, hiperplazia reticulului citoplasmatic granular și a mitocondriilor, proliferarea focală, expresia imunohistochimică. de caracteristici asemănătoare fibroblastelor, inclusiv α-actina musculară netedă și formarea fibrilelor de colagen pericelular în spațiile Disse.

Astfel, celulele stelate hepatice nu sunt o populație statică, ci dinamică, care este direct implicată în remodelarea matricei perihepatocelulare intralobulare.

Recenzători:

Vavilin V.A., doctor în științe medicale, profesor, șef. Laboratorul de metabolizare a medicamentelor, Institutul de Cercetare de Biologie Moleculară și Biofizică, Filiala Siberiană a Academiei Ruse de Științe Medicale, Novosibirsk;

Kliver E.E., doctor în științe medicale, cercetător principal, Laboratorul de patomorfologie și microscopie electronică, Institutul de Cercetare de Patologie Circulatorie din Novosibirsk, numit după academicianul E.N. Meshalkin de la Ministerul Sănătății și Dezvoltării Sociale al Federației Ruse, Novosibirsk.

Lucrarea a fost primită de redactori pe 15 august 2011.

Link bibliografic

Postnikova O.A., Nepomnyashchikh D.L., Aidagulova S.V., Vinogradova E.V., Kapustina V.I., Nokhrina Zh.V. CARACTERISTICI STRUCTURALE ȘI FUNCȚIONALE ALE CELULELE HEPATICE STELATE ÎN DINAMICA FIBROZEI // Cercetare fundamentală. - 2011. - Nr. 10-2. – P. 359-362;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28817 (data accesului: 30/01/2020). Vă aducem la cunoștință jurnale publicate de editura „Academia de Istorie Naturală”

Cuvinte cheie

FICAT / CELULELE STELE ITO/ MORFOLOGIE / CARACTERISTICI / VITAMINA A / FIBROZA

adnotare articol științific despre medicina fundamentală, autor al lucrării științifice - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Introducere. Rolul celulelor stelate Ito (ISC) este definit ca fiind unul dintre cele mai importante în dezvoltarea fibrozei în ficat, cu toate acestea, vizualizarea intravitală a structurii ITO în practica clinică este utilizată minim. Scopul lucrării: prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale HCI pe baza rezultatelor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală. Materiale și metode. Au fost utilizate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a specimenelor de biopsie și tehnici originale folosind secțiuni ultrasubțiri, fixare și colorare. Rezultate. Foto-ilustrările de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C arată caracteristicile structurale ale HSC în diferite stadii (repaus, activare) și în procesul de transformare în miofibroblaste. Constatări. Utilizarea metodelor originale de identificare morfologică clinică și evaluare a stării funcționale a HCI va îmbunătăți calitatea diagnosticului și predicției fibrozei hepatice.

Subiecte asemănătoare lucrări științifice despre medicina fundamentală, autorul lucrărilor științifice - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Citologie hepatică clinică: celule Kupffer
2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.
Monitorizarea efectelor morfologice ale celulelor stem mezenchimale autologe transplantate în ficat în ciroza virală (observare clinică)
2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.
Morfologia clinică a ficatului: necroză
2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.
Polimorfismul celulelor stelate hepatice și rolul lor în fibrogeneză
2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.
Structura celulelor hepatice sinusoidale la pacienții cu co-infecție cu virusul HIV/hepatitei C
2013 / Matievskaya N. V., Tsyrkunov V. M., Kravchuk R. I., Andreev V. P.
Celulele stem mezenchimale ca metodă promițătoare pentru tratamentul fibrozei/cirozei hepatice
2013 / Lukashik S. P., Aleinikova O. V., Tsyrkunov V. M., Isaykina Ya. I., Romanova O. N., Shimansky A. T., Kravchuk R. I.
Izolarea și cultivarea miofibroblastelor hepatice de șobolan prin explantare
2012 / Miyanovich O., Shafigullina A. K., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.
Aspecte patologice ale formării fibrozei hepatice în infecția cu VHC și alte leziuni hepatice: concepte moderne
2009 / Lukashik S. P., Tsyrkunov V. M.
Analiza miofibroblastelor de șobolan obținute din structurile tractului portal al ficatului prin explantare
2013 / Miyanovich O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.
Celulele stelate hepatice transplantate sunt implicate în regenerarea organelor după hepatectomie parțială fără riscul de a dezvolta fibroză hepatică
2012 / Shafigullina A. K., Gumerova A. A., Trondin A. A., Titova M. A., Gazizov I. M., Burganova G. R., Kaligin M. S., Andreeva D. I., Rizvanov A. A., Mukhammedov A. R., Kiyasov A. P.

introducere. Rolul celulelor stelate Ito (Hepatic Stellate Cells, HSC) a fost identificat ca fiind unul dintre liderii în dezvoltarea fibrozei hepatice, dar utilizarea vizualizării intravitale a structurilor HSC în practica clinică este minimă. Scopul lucrării este de a prezenta caracteristicile structurale și funcționale ale HSC pe baza constatărilor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală. Materiale și metode. Au fost aplicate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie în tehnica originală de utilizare a secțiunilor ultrasubțiri, fixare și colorare. rezultate. Caracteristicile structurale ale HSC ale probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C sunt prezentate pe ilustrații foto ale microscopiei luminoase și electronice. HSC-urile sunt descrise în diferite etape (repaus, activare) și în timpul procesului de transformare în miofibroblaste. Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare și evaluare clinică și morfologică a stării funcționale a HSC permite îmbunătățirea calității diagnosticului și prognosticului fibrozei hepatice.

Textul lucrării științifice pe tema „Citologie hepatică clinică: celule stelate Ito”

UDC 616.36-076.5

CITOLOGIE CLINICĂ A FICATULUI: Celule stelate ITO

Tsyrkunov V. M. ( [email protected]), Andreev V.P. ( [email protected]), Kravchuk R. I. ( [email protected]), Kondratovici I. A. ( [email protected]) EE „Universitatea Medicală de Stat din Grodno”, Grodno, Belarus

Scopul lucrării: prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale HCI pe baza rezultatelor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală.

Materiale și metode. Au fost utilizate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie și tehnici originale folosind secțiuni ultrasubțiri, fixare și colorare.

Rezultate. Foto-ilustrările de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C arată caracteristicile structurale ale HSC în diferite stadii (repaus, activare) și în procesul de transformare în miofibroblaste.

Constatări. Utilizarea metodelor originale de identificare morfologică clinică și evaluare a stării funcționale a HCI va îmbunătăți calitatea diagnosticului și predicției fibrozei hepatice.

Cuvinte cheie: ficat, celule stelate Ito, morfologie, caracteristici, vitamina A, fibroză.

Introducere

Un rezultat nefavorabil al majorității leziunilor hepatice difuze cronice de diferite etiologii, inclusiv hepatita cronică C (CHC), este fibroza hepatică, în a cărei participanți principali sunt fibroblastele activate, a căror sursă principală sunt celulele stelate Ito (SSC) activate. .

HSC, sinonim - celule stelate ale ficatului, celule care depozitează grăsime, lipocite perisinusoidale, celule stelate (în engleză Hepatic Stellate Cell, HSC, Cell of Ito, Ito cell). ZKI au fost descrise pentru prima dată în 1876 de K. Kupffer și numite de el celule stelate ("Stemzellen"). T. Ito, după ce a găsit în ele picături de grăsime, le-a desemnat la început absorbanți de grăsime („shibo-sesshusaibo”), apoi, după ce a stabilit că grăsimea este produsă de celulele înseși din glicogen, celule care depozitează grăsime („shibo -chozosaibo”) . În 1971, K. Wake a dovedit identitatea celulelor stelate Kupffer și a celulelor Ito care depozitează grăsimi și că aceste celule „stochează” vitamina A.

Aproximativ 80% din vitamina A din organism se acumulează în ficat, iar până la 80% din toți retinoizii hepatici se depun în picături grase HKI. Esterii de retinol din compoziția chilomicronilor pătrund în hepatocite, unde sunt transformați în retinol, formând un complex de vitamina A cu proteina de legare a retinolului (RBP), care este secretată în spațiul perisinusoidal, de unde este depus de către celule.

Legătura strânsă a HCI cu fibroza hepatică, stabilită de K. Popper, a demonstrat mai degrabă funcția lor dinamică decât statică - capacitatea de a participa direct la remodelarea matricei perihepatocelulare intralobulare.

Principala metodă de examinare morfologică a ficatului, care este efectuată pentru a evalua modificările probelor de biopsie intravitală, este microscopia cu lumină, care în practica clinică face posibilă stabilirea activității de reproducere.

arderea şi stadiul de cronicizare. Dezavantajul metodei este rezoluția scăzută, care nu permite evaluarea caracteristicilor structurale ale celulelor, organitelor intracelulare, incluziunilor și caracteristicilor funcționale. Examinarea microscopică electronică pe tot parcursul vieții a modificărilor ultrastructurale ale ficatului face posibilă completarea datelor microscopiei cu lumină și creșterea valorii lor diagnostice.

În acest sens, identificarea HSC hepatice, studiul fenotipului acestora în procesul de transdiferențiere și determinarea intensității proliferării lor reprezintă cea mai importantă contribuție la prezicerea rezultatelor bolilor hepatice, precum și la patomorfologia și fiziopatologia fibrogenezei.

Scop - prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale HCI pe baza rezultatelor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală.

Materiale și metode

O biopsie hepatică intravitală a fost obținută prin biopsie hepatică aspirativă la pacienții cu CHC (ARN HCV+), de la care s-a obținut consimțământul informat scris.

Pentru microscopia luminoasă a secțiunilor semisubțiri, probele de biopsie hepatică ale pacienților cu dimensiunea de 0,5 × 2 mm au fost fixate prin dublă fixare: mai întâi, conform metodei Sato Taizan, apoi probe de țesut au fost fixate suplimentar timp de 1 oră într-un 1% fixativ de osmiu preparat pe tampon fosfat Sorensen 0,1 M, pH 7,4. Dicromat de potasiu (K2Cr2O7) sau cristale de anhidridă cromică (1 mg/mL) au fost adăugate la tetroxid de osmiu 1% pentru a dezvălui mai bine structurile intracelulare și substanța interstițială în secțiuni semisubțiri. După deshidratarea probelor într-o serie de soluții alcoolice de concentrație crescândă și acetonă, acestea au fost plasate într-un amestec prepolimerizat de metacrilat de butii și stiren și polimerizate la 550C. Secțiunile semi-subțiri (1 um grosime) au fost colorate secvenţial

azur II-fuchsin bazic. Micrografiile au fost obținute folosind o cameră video digitală (Leica FC 320, Germania).

Un studiu microscopic electronic a fost efectuat pe probe de biopsie hepatică cu dimensiunea de 0,5x1,0 mm, fixate cu o soluție 1% de tetroxid de osmiu în tampon Millonig 0,1 M, pH 7,4, la +40C timp de 2 ore. După deshidratare în alcooli ascendenți și acetonă, probele au fost turnate în araldit. Secțiuni de semitină (400 nm) au fost preparate din blocurile obținute pe un ultramicrotom Leica EM VC7 (Germania) și colorate cu albastru de metilen. Preparatele au fost examinate la microscop optic și a fost selectat un loc de tip unic pentru studiul ulterioar al modificărilor ultrastructurale. Secțiunile ultrasubțiri (35 nm) au fost contracolorate cu 2% acetat de uranil în 50% metanol și citrat de plumb conform E. S. Reynolds. Preparatele microscopice electronice au fost studiate folosind un microscop electronic JEM-1011 (JEOL, Japonia) la măriri de 10.000–60.000 la o tensiune de accelerare de 80 kW. Pentru a obține imagini, s-a folosit un complex dintr-o cameră digitală Olympus MegaViewIII (Germania) și software de procesare a imaginilor iTEM (Olympus, Germania).

rezultate si discutii

HSC-urile sunt localizate în spațiul perisinusoidal (Disse) în buzunarele dintre hepatocite și celulele endoteliale; au procese lungi care pătrund adânc între hepatocite. În majoritatea publicațiilor dedicate acestei populații de HSC, este dată reprezentarea lor schematică, permițând doar desemnarea afilierii „teritoriale” a HSC-urilor în ficat și în raport cu „vecinii” din jur (Figura 1).

HSC sunt în contact strâns cu celulele endoteliale prin componentele unei membrane bazale incomplete și fibrele interstițiale de colagen. Terminațiile nervoase pătrund între SC și celulele parenchimatoase, motiv pentru care spațiul lui Disse este definit ca spațiul dintre plăcile celulelor parenchimatoase și

un complex de HCI și celule endoteliale.

Se crede că HSC-urile provin din celule mezenchimale slab diferențiate din septul transvers al ficatului în curs de dezvoltare. Experimentul a constatat că celulele stem hematopoietice sunt implicate în formarea HSC și că acest proces nu se datorează fuziunii celulare.

Celulele sinusoidale (SC), în primul rând HSC, joacă un rol principal în toate tipurile de regenerare a ficatului. Regenerarea fibrozată a ficatului are loc ca urmare a inhibării funcțiilor stem ale HSC și ale celulelor stem ale măduvei osoase. În ficatul uman, HSC alcătuiesc 5-15%, fiind una dintre cele 4 varietăți de SC de origine mezenchimală: celule Kupffer, endoteliocite și celule Pb. Rezervorul SC conține, de asemenea, 20-25% de leucocite.

În citoplasma HCI există incluziuni grase cu retinol, trigliceride, fosfolipide, colesterol, acizi grași liberi, a-actină și desmină. ZKI este vizualizat folosind colorarea cu clorură de aur. S-a descoperit în experiment că markerul diferențierii HKI de alte miofibroblaste este expresia lor a proteinei reelin.

HSC-urile există într-o stare repaus („HSC inactivă”), tranzitorie și activată pe termen lung, fiecare dintre acestea fiind caracterizată prin expresia genică și fenotip (α-IgMA, ICAM-1, chemokine și citokine).

HSC-urile în stare inactivă au o formă rotunjită, ușor alungită sau neregulată, un nucleu mare și un semn vizual luminos - incluziuni lipidice (picături) care conțin retinol (Figura 2).

Numărul de picături de lipide într-un HSC inactiv ajunge la 30 sau mai mult, ele sunt apropiate ca mărime, adiacente una cu cealaltă, apăsând în nucleu și împingându-l la periferie (Figura 2). Incluziunile mici pot fi situate între picături mari. Culoarea picăturilor depinde de fixativ și de culoarea materialului. Într-un caz, sunt deschise (Figura 2a), în celălalt sunt de culoare verde închis (Figura 2b).

Figura 1. Schema locației ICH (stelatecell, lipocyte perisinusoidal) în spațiul perisinusoidal al Disse (spațiul Disse), resursă Internet

Figura 2. - CCI care sunt în stare inactivă

a - HCI de formă rotundă cu un conținut ridicat de picături lipidice de culoare deschisă (săgeți albe), hepatocite (Hz) cu citoplasmă devastată (săgeată neagră); b - HCI cu picături de lipide închise în contact strâns cu un macrofag (Mf); a-b - secțiuni semisubțiri. Colorare azure II - magenta de bază. Micrografii. A crescut 1000; c - HCI cu o abundență de picături de lipide (mai mult de 30), având o formă neregulată (magnitudine 6.000); d-componentele ultrastructurale ale HCI: picături l-lipidice, mitocondrii (săgeți portocalii), GRES (săgeți verzi), complex Golgi (săgeată roșie), sw. 15.000; c-d - electronograme

Cu microscopia electronică, se formează o margine marginală mai osmiofilă pe fundalul unui substrat lipidic ușor (Figura 5a). În majoritatea HSC-urilor „de repaus”, împreună cu incluziuni lipidice mari, există o cantitate semnificativ mică de matrice citoplasmatică, săracă în mitocondrii (Mx) și reticul endoplasmatic granular (GRES). În același timp, compartimentele unui complex Golgi moderat dezvoltat sunt clar vizibile sub forma unui teanc de 3-4 cisterne aplatizate cu capete ușor lărgite (Figura 2d).

În anumite condiții, HSC-urile activate dobândesc un fenotip mixt sau de tranziție, combinând caracteristicile morfologice atât ale celulelor care conțin lipide, cât și ale celulelor asemănătoare fibroblastelor (Figura 3).

Fenotipul de tranziție al HCI are, de asemenea, propriile sale caracteristici morfologice. Celula capătă o formă alungită, numărul incluziunilor lipidice scade, iar numărul invaginărilor nucleolemei scade. Volumul citoplasmei crește, conținând numeroase cisterne GRES cu ribozomi legați și ribozomi liberi, Mx. Există hiperplazie a componentelor complexului lamelar Golgi, reprezentată de mai multe stive de 3-8 cisterne turtite, o creștere a numărului de lizozomi implicați în degradare.

Figura 3. - ZKI, care se află în stare de tranziție

a - ZKI (săgeți albe). Tăiat pe jumătate. Colorare azure II - magenta de bază. Micrografie. A crescut 1000; b - ZKI de formă alungită și cu o cantitate mică de picături de lipide; uv. 8000; c - HCI în contact cu celulele Kupffer (CC) și limfocitele (Lc), SW. 6000. (Hz - hepatocit, l - picături lipidice, E - eritrocit); d - mitocondrii (săgeți portocalii), GRES (săgeți verzi), c. Goldji (săgeți roșii), lizozomi (săgeți albastre), magn. b, c, d - modele de difracție a electronilor

picături de lipide (Figura 3d). Hiperplazia componentelor GRES și a complexului Golgi este asociată cu capacitatea fibroblastelor de a sintetiza molecule de colagen, precum și de a le modela prin hidroxilare și glicozilare post-translațională în reticulul endoplasmatic și elemente ale complexului Golgi.

Într-un ficat intact, HCI, fiind în stare calmă, acoperă capilarul sinusoidal cu procesele lor. Procesele HCI sunt împărțite în 2 tipuri: perisinusoidale (subendoteliale) și interhepatocelulare (Figura 4).

Primele părăsesc corpul celular și se extind de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, acoperindu-l cu ramuri subțiri asemănătoare degetelor. Sunt acoperite cu vilozități scurte și au microproeminențe lungi caracteristice care se extind și mai departe de-a lungul suprafeței tubului endotelial capilar. Excrescențele interhepatocelulare, după ce au depășit placa de hepatocite și ajung la sinusoidul vecin, sunt împărțite în mai multe excrescențe perisinusoidale. Astfel, FQI acoperă în medie mai mult de două sinusoide învecinate.

Cu afectarea ficatului, are loc activarea HSC și procesul de fibrogeneză, în care se disting 3 faze. Acestea sunt denumite inițiere, prelungire și rezoluție (rezolvarea țesutului fibros). Acest proces de transformare a HSC „în repaus” în miofibroblaste fibrozante este inițiat de citokine (^-1, ^-6,

Figura 4. - Procese perisinusoidale (subendoteliale) și interhepatocelulare (excrescențe) ale HCI

(a) procesul ZKI (săgeți galbene) care iese din corpul celular, uv. 30.000; b - un proces al HCI, situat de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, care conține o picătură de lipide, SW. 30.000; (c) procese localizate subendotelial ale HCI. Procese ale celulelor endoteliale (săgeți roz); d - procesul interhepatocelular al HCI; zona de distrugere a membranelor HCI și hepatocitelor (săgeți negre), umflate 10 000. Electronograme

TOT-a), produse metabolice suboxidate, specii reactive de oxigen, oxid nitric, endotelină, factor de activare a trombocitelor (PDGF), activator de plasminogen, factor de creștere transformator (TGF-1), acetaldehidă și multe altele. Activatorii direcți sunt hepatocitele aflate în stare de stres oxidativ, celulele Kupffer, endoteliocitele, leucocitele, trombocitele producătoare de citokine (semnale paracrine) și ZKI în sine (stimularea autocrină). Activarea este însoțită de exprimarea (includerea în lucru) a unor noi gene, sinteza de citokine și proteine din matricea extracelulară (colageni I, III, Y).

În această etapă, procesul de activare a HSC-urilor poate fi finalizat prin stimularea formării de citokine antiinflamatorii în HSC, care inhibă producția de TOT-a de către macrofage în zona afectată. Ca urmare, numărul de HSC este redus drastic, acestea suferă apoptoză și procesele de fibroză în ficat nu se dezvoltă.

În a doua fază (prelungită), cu expunere constantă prelungită paracrină și autocrină la stimuli activatori, în HSC este „menținut” un fenotip activat, caracterizat prin transformarea HSC în celule contractile asemănătoare miofibroblastelor care sintetizează colagenul fibrilar extracelular.

Fenotipul activat se caracterizează prin proliferare, chemotaxie, contractilitate, pierderea depozitelor de retinoizi și formarea de celule asemănătoare celulelor miofibroblastice. HSC-urile activate arată, de asemenea, niveluri crescute de noi gene, cum ar fi a-SMA, ICAM-1, chemokine și citokine. Activarea celulară indică debutul unui stadiu incipient al fibrogenezei și precede producția crescută de proteine ECM. Țesuturile fibroase rezultate suferă o remodelare datorită clivajului matricei cu ajutorul metaloproteinazelor matriceale (matrixmetaloproteinases - MMPs). La rândul său, defalcarea matricei este reglată de inhibitorii de țesuturi ai MMP-urilor (inhibitorii de țesuturi ai metaloproteinazelor de matrice - TIMP). MMP-urile și TIMP-urile sunt membri ai familiei de enzime dependente de zinc. MMP-urile sunt sintetizate în HSC ca proenzime inactive care sunt activate la scindarea propeptidei, dar sunt inhibate la interacțiunea cu TIMP-urile endogene, TIMP-1 și TIMP-2. HSC-urile produc 4 tipuri de MMP-uri de tip membrană care sunt activate de IL-1 p. Printre MMPs, MMPs-9, o metaloproteinază de matrice neutră, are o importanță deosebită, care are activitate împotriva colagenului de tip 4, care face parte din membrana bazală, precum și împotriva colagenului de tip 1 și 5 parțial denaturat.

O creștere a populației HCI cu diferite tipuri de leziuni hepatice este apreciată de activitatea unui număr semnificativ de factori mitogeni, receptorii tirozin kinazei înrudiți și alți mitogeni identificați care provoacă cea mai pronunțată proliferare a HKI: endotelina-1, trombina, FGF - factor de creștere a fibroblastelor, PDGF - vase cu factor de creștere endotelial, IGF - factor de creștere asemănător insulinei. Acumularea de HSC în zonele cu afectare hepatică are loc nu numai datorită proliferării acestor celule, ci și datorită migrării lor direcționate către aceste zone prin chemotaxie, cu participarea chimioatractanților precum PDGF și chemoatractantul leucocitar-MCP (monocyte chemotactic protein-). 1) .

În HSC-urile activate, numărul picăturilor de lipide este redus la 1-3 cu localizarea lor la polii opuși ai celulei (Figura 5).

HSC-urile activate capătă o formă alungită, zone semnificative ale citoplasmei sunt ocupate de complexul Golgi și sunt dezvăluite destul de multe cisterne GRES (un indicator al sintezei proteinelor pentru export). Numărul altor organele este redus: se găsesc puțini ribozomi și polizomi liberi, mitocondrii unice și lizozomi neregulați (Figura 6).

În 2007, HSC-urile au fost denumite pentru prima dată celule stem hepatice, deoarece exprimă unul dintre markerii celulelor stem mezenchimale hematopoietice, CD133.

Figura 5. - CCI în starea activată

a, b - HCI (săgeți albastre) cu incluziuni lipidice simple localizate la polii opuși ai nucleului. Țesutul conjunctiv perisinusoidal (Fig. 6a) și stratul de matrice intercelulară din jurul hepatocitei (Fig. 6b) sunt colorate în roșu. Limfocite citotoxice (săgeți violete). Celula endotelială (săgeată albă). Contact strâns între o plasmă (săgeată roșie) și un hepatocit. Tăieturi semi-subțiri. Colorare azure II - magenta de bază. Micrografii. A crescut 1000; c, d - componente ultrastructurale ale HCI: mitocondrii (săgeți portocalii), complex Golgi (săgeată roșie), cisterne ale părții sale cis mai osmiofile îndreptate către elementele extinse ale reticulului endoplasmatic granular (săgeți verzi), lizozom (săgeată albastră) (magn 10.000, respectiv 20.000); c, d - modele de difracție a electronilor

Miofibroblastele, care sunt absente în ficatul normal, au trei surse potențiale: în primul rând, în timpul dezvoltării intrauterine a ficatului, în tracturile porte, miofibroblastele înconjoară vasele și canalele biliare în timpul maturizării lor, iar după dezvoltarea completă a ficatului, acestea dispar. si sunt inlocuite in tracturile porte cu fibroblaste portal; al doilea - cu afectare hepatică, se formează din cauza celulelor mezenchimatoase portal și a HSC-urilor în repaus, mai rar din cauza celulelor epitelio-mezenchimatoase de tranziție. Ele sunt caracterizate prin prezența CD45-, CD34-, Desmin+, proteine fibrilare gliale asociate cu (GFAP)+ și Thy-1+.

Studii recente au arătat că hepatocitele, colangiocitele și celulele endoteliale pot deveni miofibroblaste prin tranziție epitelială sau endotelială la mezenchimală (EMT). Aceste celule includ markeri precum CD45-, albumina+ (adică hepatocitele), CD45-, CK19+ (adică colangiocitele) sau Tie-2+ (celule endoteliale).

Figura 6. - Activitate fibrotică ridicată a HSC

a, b - miofibroblast (Mfb), celula conține un nucleu mare, elemente GRES (săgeți roșii), numeroși ribozomi liberi, vezicule și granule polimorfe, mitocondrii unice și un semn luminos de vizualizare - un mănunchi de filamente de actină în citoplasmă (galben săgeți); condus departe. 12.000 și 40.000; c, d, e, f - activitate fibrotică ridicată a HSC cu reținerea picăturilor de lipide care conțin retinoizi în citoplasmă. Numeroase mănunchiuri de fibrile de colagen (săgeți albe) au reținut (a) și au pierdut (d, e, f) striația transversală specifică; condus departe. 25.000, 15.000, 8.000, 15.000. Electronograme

În plus, celulele măduvei osoase, formate din fibrocite și celule mezenchimale circulante, se pot transforma în miofibroblaste. Acestea sunt CD45+ (fibrocite), CD45+/- (celule mezenchimale circulante), colagen tip 1+, CD11d+ și MHC clasa 11+ (Figura 7).

Datele din literatură confirmă nu numai relația strânsă dintre proliferarea celulelor ovale și proliferarea celulelor sinusoidale, ci și datele privind posibila diferențiere a HSC în epiteliul hepatic, care a fost numită transformarea mezenchimato-epitelială a celulelor perisinusoidale.

În starea de activare fibrogenă, HSC-urile asemănătoare miofibroblastelor, împreună cu scăderea numărului și dispariția ulterioară a picăturilor de lipide, sunt caracterizate prin proliferare focală (Figura 8), expresia imunohistochimică a markerilor asemănătoare fibroblastelor, inclusiv α-actina musculară netedă. , și formarea de fibrile de colagen pericelular în spațiile Disse.

În faza de dezvoltare a fibrozei, hipoxia în creștere a țesutului hepatic devine un factor de supraexpresie suplimentară în celulele stem a moleculelor de adeziune proinflamatorii - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proinflamatorii

Interacțiunea celulelor progenitoare hepatice ductale cu miofibroblastele hepatice

HSC asemănătoare miofibroblastelor în stare de activare fibrogenică.

Figura 7. - Participanți la activarea miofibroblastică a HSC

chimioatractanți puternici - M-CSF, MCP-1 (proteina chemotactică monocitară-1) și SGS (chemoatractant neutrofil mediat de citokine) și altele care stimulează formarea de citokine proinflamatorii (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) și îmbunătățesc procesele de fibrogeneză în ficat, creând condiții pentru inducerea auto-susținută a activării continue a HSC și a proceselor de fibrogeneză.

La preparatele microscopice, fibroza pericapilară se manifestă sub formă de colorare intensă a țesutului conjunctiv perisinusoidal și a stratului de matrice intercelulară din jurul hepatocitelor (deseori pe moarte) în roșu. Pe preparatele microscopice electronice, modificările fibrotice sunt vizualizate fie sub formă de mănunchiuri mari formate de fibrile de fibre de colagen care au păstrat striații transversale, fie sub forma unui masiv.

depozitele în spațiul de masă fibroasă Disse, care sunt fibre de colagen umflate care și-au pierdut striația periodică (Figura 9).

Conform conceptelor moderne, fibroza este un proces dinamic care poate progresa și regresa (Figura 10).

Recent, au fost propuși câțiva markeri specifici ai ICD: vitamina A (VA) înflorește în picături de lipide, GFAP, receptorul p75 NGF și sinaptofizina. Se efectuează studii privind implicarea HCI hepatic în proliferarea și diferențierea celulelor stem hepatice.

Am studiat conținutul de proteină de legare a retinolului (RBP-4), care formează un complex cu VA, a cărui concentrație în plasma sanguină se corelează în mod normal cu furnizarea organismului cu VA, din care 80% se află în HCI. .

Relația dintre conținut

Figura 8. - Proliferarea focală a HSC în starea de activare fibrogenă

a - hiperplazia HCI (săgeți albe) în lumenul sinusoidelor dilatate; b - proliferarea HSC-urilor transdiferențiate (săgeți albe), celule endoteliale (săgeată roz). Tăieturi semi-subțiri. Colorare azure II - magenta de bază. Micrografii. A crescut 1000

Figura 9. - Etapa finală a activării miofibroblastice a HSC

a, b - fibroza perisinusoidală (săgeți albe). Țesutul conjunctiv perisinusoidal și stratul de matrice intercelulară din jurul hepatocitelor (b) sunt colorate în roșu cu fuchsină bazică. HSC-urile activate și transformate în fibroblaste (săgeți albastre). Hz în fig. a - hepatocit cu citoplasmă devastată. Tăieturi semi-subțiri. Colorare azure II - magenta de bază. Micrografii. A crescut 1000; c, d - fibroza perisinusoidală și perihepatocelulară în lobul hepatic, creșterea densității electronice a fibrilelor de fibre de colagen; condensarea matricei mitocondriale în hepatocit (săgeată portocalie). Boost 8.000 și, respectiv, 15.000. electronograme

Tabel 1. Indicatori ai conținutului de RBP-4 la pacienții cu ciroză hepatică (LC) și hepatită cronică (CH) de diverse etiologii, ng/ml (M±m)

Grupa n M±m p

Ciroză hepatică 17 23,6±2,29<0,05

CG, AsAT norma 16 36,9±2,05* >0,05

CG, ASAT >2 norme 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT norma 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 norme 21 35,9±2,25* >0,05

Control 15 31,2±2,82

Notă: p - diferențe semnificative cu controlul (p<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Lobul fals înconjurat de un sept fibros cu un sept fibros. Colorarea după Masso - un cerc de lobul fals. Colorare conform u.Uv.x50 Masson. Creșteți x200

Figura 10 - Dinamica evenimentelor în lobul fals al unui pacient cu ciroză virală la 6 luni după transplantul de celule stem mezenchimale autologe în ficat

Mănânc RBP-4 și fibroză în stadiul 4 (ciroză), spre deosebire de hepatita cronică, la care nu s-a observat o astfel de dependență, indiferent de markerii biochimici ai activității inflamatorii la nivelul ficatului.

Acest fapt trebuie luat în considerare la fundamentarea terapiei de substituție pentru eliminarea deficienței de VA din organism, care se poate datora epuizării potențialului TIC din cauza progresiei fibrozei la nivelul ficatului.

1. Eficacitatea maximă a evaluării stării structurale și funcționale a HCI este asigurată de un studiu morfologic al unui specimen de biopsie intravitală cu utilizarea simultană a unui complex de tehnici de vizualizare celulară (microscopie ușoară, electronică a secțiunilor ultrasubțiri și metode originale de fixare și colorare).

2. Rezultatele studiului morfologic al HCI permit îmbunătățirea calității diagnosticului in vivo al fibrozei, monitorizarea acesteia și prezicerea rezultatelor leziunilor hepatice cronice difuze la un nivel modern superior.

3. Rezultatele concluziilor morfologice vor permite clinicianului să includă suplimentar date rafinate cu privire la stadiul de cronicizare (stabilizare, progresie sau rezoluție a fibrozei) în cursul terapiei în formularea diagnosticului final.

Literatură

1. Ivashkin, V. T. Simptome clinice ale modificărilor pre-fibrotice: o transcriere a prelegerii Congresului de internet al specialiștilor în boli interne din All-Russian / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: Societatea Națională de Internet a Specialiștilor de Medicină Internă. - 2013. - Mod de acces: http://internist. ru/publications/detail/6569/. - Data accesului: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A.P. Celule ovale - presupuse celule stem hepatice sau hepatoblaste? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Transplantologie celulară și ingineria țesuturilor. - 2006. - V. 2, Nr. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: Nacional "noe Internet-Obshchestvo specialist - httpov poshchestvo. : Rezhipa 20 do13.- //internist.ru/publications/detail/6569/ - Date accesate: 21/11/2016.

2. Kiyasov, A. P. Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni sau gepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006 - S.. - 5 T..2006,. - 58.

3. Despre rolul celulelor hepatice sinusoidale și ale celulelor măduvei osoase în furnizarea unei strategii regenerative pentru un ficat sănătos și deteriorat / A. V. Lundup [et al.] // Buletin de transplantologie și organe artificiale. -2010. - T. XII, Nr. 1. - S. 78-85.

4. Serov, V. V. Criterii morfologice de apreciere a etiologiei, gradului de activitate și stadiului procesului în hepatitele cronice virale B și C / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhivele de Patologie. - 1996. - Nr 4. - S. 61-64.

5. Caracteristicile structurale și funcționale ale celulelor stelate hepatice în dinamica fibrozei / OA Postnikova [et al.] // Cercetare fundamentală. - 2011. - Nr. 10.

6. Studiu ultrastructural și imunohistochimic al celulelor stelate hepatice în dinamica fibrozei și cirozei genezei infecțio-virale / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Buletin de biologie și medicină experimentală. - 2006. - T. 142, nr. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Caracteristicile structurale și metabolice ale celulelor hepatice sinusoidale / AI Shcheglev, OD Mishnev // Succesele biologiei moderne. - 1991. - V. 3, Nr. 1. - S. 73-82.

10. Efectele retinoidului și trigliceridelor dietetice asupra compoziției lipidice a celulelor stelate ale ficatului de șobolan și a picăturilor de lipide ale celulelor stelate / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Fibroza hepatică 2006: Raportul celei de-a treia conferințe cu subiect unic AASLD / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologie. - 2006. - Vol. 45(1). - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Comportamentul celulelor stelate hepatice în timpul rezolvării leziunilor hepatice / J. P. Iredale // Semin. FicatDis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Exprimarea reelinei în celulele stelate hepatice și în timpul reparării țesutului hepatic: un nou marker pentru diferențierea HSC de alte miofibroblaste hepatice / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36(5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblastele hepatice umane în timpul dezvoltării și bolile cu accent pe portal (myo)

3. O roli sinusoidal "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - T. HII, No. 71.-85 S. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii processa pri virusnyh chrononicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - Nr. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcional "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - Nr. 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "nojologii i mediciny. - 20.. 62. - . 686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, No. 1. - S. 73.

8. Celulele stelate hepatice CD34 sunt celule progenitoare / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Uzual. - 2007. -Vol. 352(2). - P. 410-417.

9. Degradarea proteinelor matricei în fibroza ficatului / M. J. Arthur // Pathol. Res. Practică. - 1994. - Vol. 190(9-10).

11. Ficatul fetal este format din celule în tranziție epitelial-mezenchimală / J. Chagraoni // Sânge. - 2003. - Vol. 101. - P. 2973-2982.

12. Fixarea, deshidratarea și înglobarea specimenelor biologice / A. M. Glauert // Practical Methods in Electron Microscopy. - New York: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, partea 1.

13. Friedman, S. Fibroza hepatică 2006: Raportul celei de-a treia conferințe cu subiect unic AASLD / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologie. - 2006. - Vol. 45(1). - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Celulele stelate umane și rathepatic produc factor de celule stem: un posibil mecanism pentru recrutarea mastocitelor în fibroza hepatică / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Vol. 30, nr 5. - P. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite ca mediu de încorporare pentru microscopie electronică / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochim. Cytol. - 1958. - Vol. 4. - P. 409-414.

16. Celulele stelate hepatice și fibroblastele portale sunt sursele celulare majore de colagen și lizil oxidaze în ficatul normal și la începutul leziunii / M. Perepelyuk // Am. J Physiol. gastrointestinal. Ficat Physiol. - 2013. - Vol. 304(6). - P. 605614.

17. Miezul virusului hepatitei C și proteinele nestructurale induc efecte fibrogenice în celulele stelate hepatice / R. Bataller // Gastroenterology. - 2004. - Vol. 126, iss. 2. - P. 529-540.

18. Iredale, J. P. Comportamentul celulelor stelate hepatice în timpul rezolvării leziunilor hepatice / J. P. Iredale // Semin. FicatDis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

20. Lepreux, S. Miofibroblastele ficatului uman în timpul dezvoltării și bolile cu accent pe fibroblastele portal (mio) / S. Lepreux, A. Desmoulière

fibroblaste / S. Lepreux, A. Desmoulière // Front. fiziol. - 2015. - Mod de acces: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Data accesului: 31.10.2016.

22. Transplantul de celule stem derivate din măduva osoasă mezenchimală la pacienții cu ciroză hepatică legată de HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Transl. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, iss. 4. - P. 217-221.

23. Millonig, G. A. Avantajele unui tampon fosfat pentru soluții de tetroxid de osmiu în fixare / G. A. Millonig // J. Appl. Fizică. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

Vol. 24. - P. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Vol. 14. - P. 1213-1217.

30. Evoluții recente în biologia miofibroblastelor: paradigme pentru remodelarea țesutului conjunctiv / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - P. 1340-1355.

35. Mezoteliul derivat din sept transvers dă naștere la celule stelate hepatice și la celule mezenchimale perivasculare în ficatul de șoarece în curs de dezvoltare / K. Asahina // Hepatologie. -2011. - Vol. 53.-P. 983-995.

Vol. 50.-P. 66-71.

38. Thabut, D. Angiogeneza intrahepatică și remodelarea sinusoidală în boala hepatică cronică: noi ținte pentru tratamentul hipertensiunii portale? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - P. 976-980.

39. Wake, K. Celulele stelate hepatice: structură tridimensională, localizare, eterogenitate și dezvoltare / K.

// față. fiziol. - 2015. - Mod de acces: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Data accesului: 31.10.2016.

21. Liganzi ai receptorului activat de proliferator de peroxizomi gama modulat acțiuni profibrogenice și proinflamatorii în celulele stelate hepatice / F. Marra // Gastroenterology. -2000. - Vol. 119. - P. 466-478.

23. Millonig, G. A. Avantajele unui tampon fosfat pentru soluții de tetroxid de osmiu în fixare / G. A. Millonig // J. Appl. Rizică. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

24. Originea și evoluția structurală a celulelor ovale cu proliferare timpurie din ficatul de șobolan / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

25. Originea miofibroblastelor în fibroza hepatică / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Vol. 5 suppl. 1. - S. 17.

26. Originile și funcțiile miofibroblastelor hepatice / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. acta. - 2013. - Vol. 1832(7). - P. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF și transducția semnalului în celulele stelate hepatice / M. Pinzani // Front. biosci. - 2002. - Vol. 7. - P. 1720-1726.

28. Popper, H. Distribuția vitaminei A în țesut, așa cum este evidențiată de microscopia cu fluorescență / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Vol. 24.-R. 205-224.

30. Evoluții recente în biologia miofibroblastelor: paradigme pentru remodelarea țesutului conjunctiv / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Utilizarea citratului de plumb la pH ridicat ca colorant electronopac în microscopie electronică / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Vol. 17. - P. 208-212.

32. Safadi, R. Stimularea imună a fibrogenezei hepatice de către celulele CD8 și atenuarea prin interleukina-10 transgenică din hepatocite / R. Safadi // Gastroenterologie. - 2004. - Vol. 127(3). - P. 870-882.

33. Sato, T. Un studiu microscopic electronic al specimenului fixat pentru perioade mai lungi în formalină tamponată cu fosfat / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Vol. 31, nr 4. - P. 423-428.

34. Senoo, H. Vitamina A-Storing Cells (Stellate Cells) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Vol. 75.

36. Stanciu, A. Date noi despre celulele ITO / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei, Rev. Med. Chir. soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, nr 2. - P. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesorul Toshio Ito: a clarvoyant in pericyte biology / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Vol. 50.-R. 66-71.

39. Wake, K. Celulele stelate hepatice: Structura tridimensională, localizare, eterogenitate și dezvoltare / K. Wake // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Fiz. Biol. sci. - 2006. - Vol.

Trezire // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Fiz. Biol. sci. - 2006. - Vol. 82(4). - P. 155-164.

82(4). - P. 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic Sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Olanda). - 1986. - Vol. 1. - P. 215-220.

41. Watson, M. L. Colorarea secțiunilor de țesut pentru microfon electronic cu metale grele / M. L. Watson // J. Biophys. Biochim. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - P. 475-478.

CITOLOGIA CLINICĂ A FICATULUI: CELULELE STELLATE ITO (CELULELE STELLATE HEPATICE)

Tsyrkunov V. M., Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovich I. A. Instituția de învățământ „Universitatea de Stat Medicală din Grodno”, Grodno, Belarus

Scopul lucrării este de a prezenta caracteristicile structurale și funcționale ale HSC pe baza constatărilor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală.

Materiale și metode. Au fost aplicate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie în tehnica originală de utilizare a secțiunilor ultrasubțiri, fixare și colorare.

rezultate. Caracteristicile structurale ale HSC ale probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C sunt prezentate pe ilustrații foto ale microscopiei luminoase și electronice. HSC-urile sunt descrise în diferite etape (repaus, activare) și în timpul procesului de transformare în miofibroblaste.

Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare și evaluare clinică și morfologică a stării funcționale a HSC permite îmbunătățirea calității diagnosticului și prognosticului fibrozei hepatice.

Comunicarea intercelulară poate fi realizată prin secreție paracrină și contacte directe de la celulă la celulă. Se știe că celulele perisinusoidale hepatice (HPC) stabilesc nișa de celule stem regionale și determină diferențierea acestora. În același timp, HPC rămâne slab caracterizată la nivel molecular și celular.

Scopul proiectului a fost de a studia interacțiunile dintre celulele perisinusoidale hepatice de șobolan și diferite celule stem, cum ar fi fracțiunea de celule mononucleare a sângelui ombilical ombilical (UCB-MC) și celulele stromale mezenchimale multipotențiale derivate din măduva osoasă de șobolan (BM-MMSC).

Materiale și metode. Celulele BM-MSC și HPC de șobolan, UCB-MC umane au fost derivate folosind tehnici standard. Pentru a studia reglarea paracrină HPC, am co-cultivat celule UCB-MC sau BM-MMSC cu HPC folosind camere Boyden și medii de celule HPC condiționate. Celulele marcate diferențial au fost co-cultivate și interacțiunile lor au fost observate prin microscopie fluorescentă cu contrast de fază și imunocitochimie.

rezultate. În prima săptămână de cultură a existat autofluorescență a vitaminei A din cauza capacității de depozitare a grăsimilor a PHC. BM-MMSC a demonstrat o viabilitate ridicată în toate modelele de co-cultură. După 2 zile de incubare în mediu condiționat de co-cultură a BM-MMSC cu HPC, am observat modificări ale morfologiei MMSC - acestea au scăzut în dimensiune și mugurii lor au devenit mai scurti. Expresia actinei α-musculare netede și a desminei a fost similară cu miofibroblastul - o formă intermediară a culturii de celule Ito in vitro. Aceste modificări ar putea fi datorate stimulării paracrine de către HPC. Cel mai profund efect al HPC asupra celulelor UCB-MC a fost observat în co-cultura de contact, prin urmare este important ca celulele UCB-MC să creeze contacte directe de la celulă la celulă pentru menținerea viabilității lor. Nu am observat nicio fuziune celulară între celulele HPC /UCB și HPC /BM-MMSC în co-culturi. În experimentele noastre ulterioare intenționăm să studiem factorii de creștere produși de HPC pentru diferențierea hepatică a celulelor stem.

Introducere.

De interes deosebit printre varietatea de celule hepatice sunt celule hepatice perisinusoidale (celule Ito). Datorită secreției de factori de creștere și componente ale matricei extracelulare, acestea creează un micromediu al hepatocitelor, iar o serie de studii științifice au demonstrat capacitatea celulelor stelate hepatice de a forma un micromediu pentru celulele progenitoare (inclusiv cele hematopoietice) și de a influența diferențierea acestora în hepatocite. Interacțiunile intercelulare ale acestor populații de celule pot fi realizate prin secreția paracrină a factorilor de creștere sau prin contacte intercelulare directe, cu toate acestea, baza moleculară și celulară a acestor procese rămân neexplorate.

Scopul studiului.

Studiul mecanismelor de interacțiune Celulele Ito cu celule stem hematopoietice (HSC) și mezenchimale (MMSC).în condiţii in vitro.

Materiale și metode.

Celulele Ito de ficat de șobolan au fost izolate prin două metode enzimatice diferite. În același timp, MMSC-urile stromale au fost obținute din măduva osoasă a șobolanilor. Fracția mononucleară a celulelor stem hematopoietice izolată din sângele ombilical ombilical. Efectele paracrine ale celulelor Ito au fost studiate prin cultivarea MMSC și HSC în mediul în care au crescut celulele Ito și prin co-cultivarea celulelor separate printr-o membrană semipermeabilă. Influența contactelor intercelulare a fost studiată în co-cultivarea celulelor. Pentru o mai bună vizualizare, fiecare populație a fost etichetată cu o etichetă fluorescentă individuală. Morfologia celulară a fost evaluată prin microscopie cu contrast de fază și fluorescență. Caracteristicile fenotipice ale celulelor cultivate au fost studiate prin analiză imunocitochimică.

Rezultate.

În termen de o săptămână după izolarea celulelor perisinusoidale, am observat capacitatea lor de autofluorescență datorită capacității lor de acumulare de grăsime. Apoi celulele au trecut într-o fază intermediară a creșterii lor și au căpătat o formă stelată. În etapele inițiale ale cocultivării celulelor Ito cu MMSC-uri de măduvă osoasă de șobolan, viabilitatea MMSC-urilor a fost menținută în toate variantele de cultivare. În a doua zi, în timpul cultivării MMSC-urilor în mediul de cultură al celulelor Ito, a avut loc o schimbare a morfologiei MMSC-urilor - acestea au scăzut în dimensiune, iar procesele s-au scurtat. Expresia actinei și desminei musculare alfa-netede în MMSC a crescut, indicând asemănarea lor fenotipică cu miofibroblastele, o etapă intermediară de creștere a celulelor Ito activate in vitro. Datele noastre indică efectul factorilor paracrini secretați de celulele Ito asupra proprietăților MMSC-urilor din cultură.

Pe baza co-cultivarii celulelor stem hematopoietice cu celulele Ito, s-a demonstrat că celulele stem hematopoietice rămân viabile numai atunci când co-cultivarea de contact cu celulele Ito. Conform analizei fluorescente a culturilor mixte, nu a fost dezvăluit fenomenul de fuziune a celulelor din diferite populații.

Constatări. Pentru a menține viabilitatea celulelor stem hematopoietice, prezența contactelor intercelulare directe cu celulele Ito este un factor decisiv. Reglarea paracrină a fost observată numai atunci când MMSC-urile au fost cultivate într-un mediu nutritiv în care au crescut celulele Ito. Studiul influenței factorilor specifici produși de celulele Ito asupra diferențierii HSC și MMSC în cultura celulară este planificat să fie realizat în studii viitoare.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE „Universitatea Medicală de Stat Kazan a Agenției Federale pentru Sănătate și Dezvoltare Socială”

Structura celule endoteliale, celule Kupffer și Ito, vom lua în considerare exemplul a două figuri.

Figura din dreapta textului arată capilare sinusoidale (SC) ale ficatului- capilare sinusoidale intralobulare, crescând de la venulele de intrare la vena centrală. Capilarele sinusoide hepatice formează o rețea anastomotică între lamele hepatice. Căptușeala capilarelor sinusoidale este formată din celule endoteliale și celule Kupffer.

Figura din stânga textului arată placa hepatică (LP) și două capilarele sinusoidale (SC) ale ficatului tăiate vertical și orizontal pentru a arăta celulele perisinusoidale Ito (CI). Figura prezintă, de asemenea, căile biliare tăiate (LC).

Celulele endoteliale (EC)- celule scuamoase puternic turtite, cu un nucleu mic alungit, organite subdezvoltate si un numar mare de vezicule micropinocitare. Citomembrana este punctată cu găuri nepermanente (O) și fenestra, adesea grupate în plăci cribriforme (RP). Aceste deschideri permit plasmei sanguine să treacă, dar nu celulelor sanguine, permițându-i accesul la hepatocite (D). Celulele endoteliale nu au membrană bazală și nu posedă fagocitoză. Ele sunt conectate între ele folosind complexe de conectori mici (nu sunt prezentate). Împreună cu celulele Kupffer, celulele endoteliale formează granița interioară a spațiului Disse (PD); marginea sa exterioară este formată din hepatocite.

celule Kupffer (CC)- celule stelate mari, instabile, în interiorul capilarelor sinusoidale hepatice, parțial la bifurcațiile lor.

Procesele celulelor Kupffer trec fără dispozitive de conectare între celulele endoteliale și traversează adesea lumenul sinusoidelor. Celulele Kupffer conțin un nucleu oval, multe mitocondrii, un complex Golgi bine dezvoltat, cisterne scurte ale reticulului endoplasmatic granular, mulți lizozomi (L), corpuri reziduale și plăci inelare rare. Celulele Kupffer conțin și fagolizozomi mari (PL), care conțin adesea eritrocite învechite și materii străine. De asemenea, pot fi detectate incluziuni de hemosiderină sau fier, în special la colorarea supravitală.

Suprafața celulelor Kupffer prezintă pliuri citoplasmatice neregulate aplatizate numite lamellipodia (LP) - tulpini lamelare, precum și procese numite filopodii (F) și microvilli (MV) acoperite cu glicocalix. Plasmalema formează corpuri vermiforme (CT) cu o linie densă situată central. Aceste structuri pot reprezenta un glicocalix condensat.

celule Kupffer- Acestea sunt macrofage, foarte probabil formând un gen independent de celule. De obicei provin din alte celule Kupffer din cauza diviziunii mitotice a acestuia din urmă, dar pot proveni și din măduva osoasă. Unii autori cred că sunt celule endoteliale activate.

Ocazional, o fibră nervoasă autonomă aleatorie (NF) trece prin spațiul lui Disse. În unele cazuri, fibrele au contact cu hepatocitele. Marginile hepatocitelor sunt delimitate de depresiuni interhepatocite (MU) punctate cu microvilozități.

Acestea sunt celule stelate localizate în spațiile lui Disse (PD). Nucleii lor sunt bogați în cromatină condensată și sunt de obicei deformați de picături mari de lipide (LA). Acestea din urmă sunt prezente nu numai în pericarion, ci și în procesele celulei și sunt vizibile din exterior ca proeminențe sferice. Organelele sunt slab dezvoltate. Celulele perisinusoidale prezintă activitate endocitară slabă, dar lipsesc fagozomii. Celulele au mai multe procese lungi (O) care sunt în contact cu hepatocitele învecinate, dar nu formează complexe de legătură.

Ramurile acoperă capilarele sinusoidale ale ficatului iar în unele cazuri trec prin laminele hepatice, venind în contact cu sinusoidele hepatice adiacente. Procesele nu sunt constante, ramificate și subțiri; pot fi, de asemenea, turtite. Acumulând grupuri de picături de lipide, acestea se lungesc și capătă aspectul unei perii de struguri.

Se crede că perisinusoidal Ito celule sunt celule mezenchimale slab diferențiate care pot fi considerate celule stem hematopoietice, deoarece se pot transforma în condiții patologice în celule adipoase, celule stem din sânge active sau fibroblaste.

În condiții normale, celulele Ito sunt implicate în acumularea de grăsime și vitamina A, precum și în producția de fibre intralobulare reticulare și de colagen (KB).

Principala sursă de endotoxină din organismeste o floră intestinală Gram-negativă. În prezent, nu există nicio îndoială că ficatul este organul principal curățarea endotoxinei. Endotoxina este preluată mai întâi de celulă Kami Kupffer (KK), interacționând cu receptorul membranar CD 14. Se poate lega de receptor ca el însuși lipopolizaharidă(LPS), și complexul său cu proteina de legare a lipidelor A bulgăre de plasmă. Interacțiunea LPS cu macrofagele hepatice declanșează o cascadă de reacții, care se bazează pe producerea și eliberarea de ion de citokine și alte active biologic mediatori.

Există multe publicații despre rolul macro-uluial ficatului (LK) în absorbția și eliminarea LPS bacteriană, cu toate acestea, interacțiunea endoteliului cu alte mezenchimatoase celulele, în special perisinusoidal de celulele Ito, practic nu este studiat.

METODĂ DE CERCETARE

Șobolani masculi albi cu o greutate de 200 g au fost injectați intraperitoneal în 1 ml de soluție salină sterilă foarte purificat liofilizat LPS E. coli tulpina 0111 în doze de 0,5,2,5, 10, 25 și 50 mg/kg. La perioade de 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 ore și 1 săptămână, organele interne au fost îndepărtate sub anestezie și plasate în formalină tamponată 10%. Materialul a fost încorporat în blocuri de parafină. Secțiunile de 5 um grosime au fost colorate imunohistochimicstreptavidină-biotină prin metoda anticorpilor la desmină, α - neted- actina musculară (A-GMA) și antigenul nuclear celule care proliferează bine ( PCNA, " Dako"). Desmin a fost folosit ca marker perisinusoidalCelulele Ito, A-GMA - as marker ve miofibroblaste, PCNA - celule în proliferare. Pentru a detecta endotoxina în celulele hepatice, anti-Re-glicolipideanticorpi (Institutul de Patologie Generală și Clinică KDO, Moscova).

REZULTATELE STUDIULUI

La o doză de 25 mg/kg și peste, șocul fatal a fost observat la 6 ore după administrarea LPS. Expunerea acută la LPS pe țesutul hepatic a determinat activarea celulelor Ito, care s-a manifestat printr-o creștere a numărului acestora. Număr desminpozitiv celulele au crescut de la 6 ore după injectarea LPS și au atins un maxim ma la 48-72 h (Fig. 1, a, b).

Orez. 1. Secțiuni de ficat de șobolan sy, procesat LSAB -pe mine- chennymianticorpi la des A mea(o bandă α - neted actina cervicală (c), x400 (A, b) x200 (c).

a - înainte de introducerea endotoxineipe, singur desminpozitivcelule Ito în zona periportală; b- 72 oredupă administrarea de endotoxină pe: numeroase desminpozitiv celule Ito; în- la 120 de ore de la introducerea en dotoxina: α - musculatura neteda ny actina este prezentă numaico în celulele musculare netede vase kah.

În 1 numărul săptămânii desminpozitiv celulele au scăzut, dara fost mai mare decât valorile de referință. La În acest caz, nu am observat apariția A-GMA-pozitiv celulele din sinus dah ficat. pozitiv intern control atunci când este colorat cu anticorpi la A-GMA a servit la identificarea celulelor musculare netedevasele venoase ale căilor porte care conțin A-GMA (Fig. 1, în). Prin urmare, în ciuda creșterii numărului de celule Ito, o dată Impactul LPS nu duce la transformare ( transdiferențiere) acestea în miofibroblaste.

Orez. 2. Secțiuni ale ficatuluisobolani, tratati LSAB -anticorpi marcati la PCNA. a - înainte de introducerea lui en dotoxină: singurproliferarea genelor patocite, x200; b - 72 ore de la introducerea endotoxinei: numeroase hepatocite proliferante, x400.

Creșterea cantității desminpozitiv celulele au început în zona portală. De la 6 ore la 24 ore după administrarea LPS perisinusoidal celulele au fost găsite numai în jurul tracturilor portal, adică. în zona 1 aci noosa. La momentul de 48-72 ore, când s-a observat maccantitate maxima desminpozitiv lipici actuale, au apărut și în alte zone ale acinului; cu toate acestea, majoritatea celulelor Ito erau încă localizate periportal.

Poate că acest lucru se datorează faptului că periportalCC-urile localizate sunt primele care captează endotoxina provenita din intestin prin vena porte sau din circulatia sistemica. Ak tivated QC produce o gamă largă citokinele, despre care se crede că declanșează activarea celulelor Ito și transdiferențiere ele în miofibroblaste. Evident, acesta este motivul pentru care celulele Ito situate în apropierea macrofagelor hepatice activate (în zona 1 a acinului) sunt primele care răspund la eliberarea de citokine. Cu toate acestea, nu le-am observat în studiul nostru. transdiferențiereîn miofibroblasteși acest lucru sugerează că citokinele secretate de CK și hepatocite pot servi ca un factor care susține procesul care a început deja transdiferențiere, dar probabil că nu sunt capabili să o declanșeze cu o singură expunere a ficatului la LPS.

O creștere a activității proliferative a celulelor a fost observată și în principal în zona 1 a acinului. Acest lucru înseamnă probabil că toate (sau aproape toate) procesele vizează despre- şi reglarea paracrină a interacţiunilor intercelulare, se desfăşoară în zonele periportale. O creștere a numărului de celule în proliferare a fost observată de la 24 de ore după administrarea LPS; numărul de celule pozitive a crescut până la 72 de ore (activitate proliferativă maximă, Fig. 2, a, b). Au proliferat atât hepatocitele, cât și celulele sinusoide. Cu toate acestea, colorarea PCNA nu dă capacitatea de a identifica tipul de proliferi antrenarea celulelor sinusoidale. Conform literaturii de specialitate, acțiunea endotoxinei duce la o creștere a numărul de QC. Ei cred că este vorba decurge atât datorită proliferării macrofagelor hepatice, cât și datorită migrării monocitelor din alte organe. Citokinele eliberate de CK pot crește capacitatea de proliferare a celulelor Ito. Prin urmare, este logic să presupunem că celulele în proliferare sunt reprezentate de perisinusoidal Ito celule. Creșterea numărului lor înregistrată de noi este aparent necesară pentru a crește sinteza factorilor de creștere și a restabili matricea extracelulară în condiții de deteriorare. Aceasta poate fi una dintre verigile reacțiilor compensatorii-regenerative ale ficatului, deoarece celulele Ito sunt sursa principală a componentelor matricei extracelulare, factorul de celule stem și factorul de creștere a hepatocitelor, care sunt implicate în reparare și diferențiere. celulele epiteliale rovka ale ficatului. Absent aceeași transformare a celulelor Ito în miofibroblaste indică faptul că un episod de agresiune a endotoxinelor nu este suficient pentru dezvoltarea fibrozei hepatice.

Astfel, expunerea acută la endotok sina determină o creștere a numărului desminpozitiv Celulele Ito, care este un semn indirect de afectare a ficatului. Cantitate perisinusoidal celulele crește, aparent ca urmare a proliferării lor. Un singur episod de agresiune cu endotoxine determină inversarea activarea mea perisinusoidal Ito celule si nu duce la transdiferențiereîn miofibroblaste. În acest sens, se poate presupune că în mecanismele de activare și transdiferențiereÎn celulele Ito sunt implicate nu numai endotoxina și citokinele, ci și alți factori ai interacțiunilor intercelulare.

LITERATURĂ

1. Mayansky D.N., Wisse E., Decker K. // Noi frontiere hepatologie. Novosibirsk, 1992.

2. Salahov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Succese moderne, biol. 1998. Vol. 118, Numărul. 1. S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan . m unități revistă 1988. Nr 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arc. [b]. 1992. Vol. 61.P. 343-349.

5. Gressner A. M. // Hepatogastronerologie. 1996 Vol. 43. P. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Natură. 1995 Vol. 373, nr. 6516. P. 699-702.

7. înțelept E., Braet F., Luo D. şi colab. // Toxicol. Pathol. 1996. Vol. 24, nr 1. P. 100-111.