Методика определения групп крови. Антиглобулиновый тест. Прямая и непрямая реакция Кумбса Анализ проба кумбса

29.06.2020

В норме антитела к эритроцитам в крови отсутствуют.

Прямая проба Кумбса - антиглобулиновый тест (агглютинация в геле, позволяет выявить полные двухвалентные антитела), с помощью которого определяют антитела класса IgG и С3-компонент комплемента на поверхности эритроцитов. Обычно антитела, выявляемые прямой пробой Кумбса, имеют широкую специфичность, не ассоциированную с хорошо установленным антигеном. Положительная прямая проба Кумбса чётко указывает на наличие у больного гемолитической анемии, хотя не все больные с положительным прямым антиглобулиновым тестом страдают этим заболеванием. Приблизительно у 10% больных антитела или компоненты комплемента на мембране эритроцитов не удаётся определить прямой пробой Кумбса (тест отрицательный), но тем не менее они страдают аутоиммунной гемолитической анемией. Для уточнения специфичности антител в таких случаях используют тесты с их элюцией. Прямая проба Кумбса, положительная только к комплементу, обычно имеет отношение к холодовым антителам типа IgM. В этом случае антитела IgM не присутствуют на эритроцитах при базальной температуре тела. Однако вследствие того, что антитела IgM активно фиксируют комплемент, и комплемент остаётся на эритроцитах, при данной форме аутоиммунной гемолитической анемии (болезнь холодовых аггютининов) проба Кумбса будет положительна только к комплементу.

Прямая проба Кумбса положительна при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой тепловыми антителами, аутоиммунной лекарственной анемии (при приёме метилдофа до 20% больных имеют положительную реакцию), лекарственно-адсорбционном типе гемолитической анемии, иммунокомплексном типе гемолитической анемии (проба положительна только по отношению С3), при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой холодовыми антителами - болезни холодовых агглютининов (проба положительна только по отношению С3). При пароксизмальной холодовой гемоглобинурии прямая проба Кумбса отрицательная.

Непрямая проба Кумбса - непрямой антиглобулиновый тест (обнаруживает неполные антитела) позволяет выявить атипичные антитела в крови, в том числе аллоантитела, к чужим антигенам эритроцитов. Свое название (непрямая) она получила вследствие того, что протекает в 2 этапа. Первоначально сыворотка крови больного, содержащая неполные антитела, взаимодействует с добавленным корпускулярным Аг-диагностикумом без видимых проявлений. На втором этапе внесённая антиглобулиновая сыворотка взаимодействует с неполными антителами, адсорбированными на антигенах, с появлением видимого осадка. Переливание гомологичных (аллогенных) эритроцитов или беременность - наиболее частые причины образования этих антиэритроцитарных антител. Сочетание положительной непрямой пробы Кумбса с отрицательной прямой пробой ничего не даёт для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии. Положительная непрямая проба Кумбса вызывает определённые трудности при подборе крови для переливания и проведении перекрёстной пробы на совместимость с консервированной кровью, но не имеет другого диагностического значения.

Или растворенных в плазме.

Синонимы: антиглобулиновый тест, Coombs test, AGT, indirect/direct antiglobuline test, IAT, NAT, DAT, indirect/direct Coombs test

Проба Кумбса – это

анализ, с помощью которого выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам.

Виды пробы Кумбса

прямая проба Кумбса – определяет антитела зафиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию , гемолиз при аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин), после переливания крови и гемолитической болезни новорожденных .

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

непрямая проба Кумбса – выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, выполняют перед переливанием крови и при беременности .

Антиэритроцитарные антитела - разновидность аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами . Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп - по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи . Самые известные и значимые в работе врача - AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – гемолизирует .

Показания к проведению прямого антиглобулинового теста

первичная аутоиммунная гемолитическая анемия
гемолитическая анемия при аутоиммунных, опухолевых, инфекционных заболеваниях
лекарственная аутоиммунная гемолитическая анемия
посттрансфузионная гемолитическая анемия (дни - месяцы)
гемолитическая болезнь новорожденного (несовместимость по одной из групп крови)

Показания к проведению непрямого антиглобулинового теста

перед переливанием крови
при беременности резус-отрицательной женщины

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Предполагают нарушение в процессе взаимодействия на уровне иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. Клетки продуцируют антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу .

Симптомы гемолитической анемии

усталость, общая слабость, раздражительность
одышка
боль в животе, тошнота
темный цвет мочи
боли в спине
желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
увеличение печени, селезенки
снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат - не дает возможностиснять диагноз.

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

системная красная волчанка
синдром Эванса
макроглобулинемия Вальденстрема
пароксизмальная холодовая гемоглобинурия
хронический лимфолейкоз
лимфомы
инфекционный мононуклеоз
инфицирование микоплазмой пневмонии
сифилис

Положительность антиглобулинового теста при данных заболеваниях не служит диагностическим критерием, а является одним из симптомов заболевания.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных - несовместимостьгрупп крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных - по системе АВ0, казуистично - по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов , абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки - роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но вот последующие - чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного

желтушность кожи
анемия
бледность кожи и слизистых
увеличение печени и селезенки
нарушения дыхания
отек всего тела
возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса - после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, озноб, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы гемолитической реакции после переливания крови

повышение температуры тела
сыпь на коже
боли в спине
красная окраска мочи
тошнота
головокружение

Расшифровка пробы Кумбса

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие - расположение антител - в крови или уже на красной клетке крови - на эритроците.

если прямая проба Кумбса отрицательна – это значит что на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов нужно искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность может длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней - 3 месяца)
положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании может длится месяцы и даже годы

Нормы пробы Кумбса

прямая проба Кумбса - отрицательно
непрямая проба Кумбса - отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде - 1:16, 1:256 и т.д.

4 факта о пробе Кумбса

предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
порог чувствительности - не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
число антител запускающих гемолиз - индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

Недостатки антиглобулинового теста

нельзя определить силу связывания антигена с антителом
неизвестно количество связанных антител
не определяет вид антитела
положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

В последние годы среди пациентов различного возраста увеличилось количество заболеваний крови и для их диагностики используются различные методы и средства. Проба Кумбса является клиническим исследованием крови, и цель ее проведения заключается в выявлении в организме определенных , представляющих угрозу для здоровья человека.

Может произойти приклеивание антител к и результатом этого может стать нарушение состояния иммунной системы. Прямая проба Кумбса представляет собой антиглобулиновый тест, который проводится для выявления антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов.

Обычно специалисты прибегают к проведению теста на антитела в следующих ситуациях:

Необходимость переливания крови. Из курса школьной анатомии известно, что у человека может быть одна из четырех групп крови. Проведение антиглобулинового теста позволяет определить возможность переливания крови в другой организм. Говорить о том, что пациент может стать донором для переливания можно лишь в том случае, если его кровь соответствует типу больного, то есть в ней присутствуют одинаковые антигены. В том случае, если у пациента и донора существует различие антигенов, то это может привести к тому, что произойдет разрушение иммунной системой перелитых клеток. Результатом этого может стать развитие тяжелых заболеваний и осложнений, и даже летальный исход. Именно по этой причине важную роль придается поиску нужного типа крови при появлении необходимости ее переливания.
Определение риска резус-сенсибилизации. Современная медицина определяет резус как антиген, а его полным определением является понятие «резус-фактор». Благодаря тесту Кумбса удается диагностировать присутствие антител к резус-фактору в крови женщин во время . В том случае, если будущая мамочка имеет отрицательный резус-фактор, а отец положительный, то будущий ребенок может унаследовать любой из них. При выявлении у будущего ребенка положительного резус-фактора повышается опасность развития резус-сенсибилизации — это процесс смешения крови и матери во время беременности или родовой деятельности.

В том случае, если наблюдается несовместимость группы матери и ребенка, то иммунная система женского организма начинает воспринимать плод как чужеродный предмет и оказывает на него всевозможную атаку. Результатом этого может стать развитие тяжелой патологии у ребенка, которая получила название эритробластоза. В некоторых случаях при отсутствии эффективного лечения наблюдается гибель плода в утробе матери либо сразу же после его рождения.

В некоторых случаях проба Кумбса проводится с целью выявления аутоиммунной гемолитической .

Такое заболевание встречается довольно редко и проявляется в образовании к антигенам эритроцитов своего собственного организма.

Специалисты выделяют две разновидности проб Кумбса, каждая из которых применяется для определенных целей.

Прямая проба. Прямая проба в медицинской практике еще называется прямой антиглобулиновый тест и с его помощью удается диагностировать антитела, прикрепленные к поверхности . В некоторых случаях производство таких антител в организме человека происходит как результат прогрессирования различных либо приема таких лекарственных препаратов, как:

Хинидин
Метилдоп
Прокаинамид

Опасность таких антител кроется в том, что они могут становиться причиной развития и оказывать разрушающее воздействие на . Иногда к проведению теста Кумбса прибегают в том случае, когда необходимо выявить причины развития таких патологий, как анемия и .

У нормой считается отрицательная реакция пробы Кумбса.

Непрямая проба. Часто специалисты прибегают к проведению непрямой пробы Кумбса, которая имеет второе название «непрямой антиглобулиновый тест». Основной целью такого является выявление антител к эритроцитам, которые присутствуют в сыворотке крови. Благодаря такой пробе удается определить, совпадает ли кровь донора с кровью пациента при необходимости ее переливания. Такой анализ является своеобразной пробой на совместимость и благодаря его проведению удается избежать развития неблагоприятной реакции на донорскую кровь.

Обычно такое исследование рекомендуется проходить женщинам во время . У некоторых мамочек в организме могут присутствовать антитела определенного класса, способные проникать через плаценту в кровь будущего ребенка. Результатом такого процесса может стать гемолитическая болезнь плода, а также развитие различных во время беременности.

Подготовка к процедуре и ее проведение

Обычно к проведению процедуры не требуется какая-либо специальная подготовка, а провести можно совершенно в любое время.

Подготовка к диагностике включает в себя следующие моменты:

в том случае, если анализ будет проводиться у новорожденного, то родителям следует объяснить, что с его помощью удастся диагностировать гемолитическое заболевание
при присутствии подозрения на развитие у пациента гемолитической болезни ему необходимо разъяснить, что проведение такого анализа поможет определить причины ее развития
подготовка к анализу не требует каких-либо ограничений в еде и режиме питания
при проведении анализа у новорожденного, следует сообщить родителям о том, что понадобится забор крови из вены, а также уточнить время проведения процедуры
необходимо известить пациента о том, что во время наложения жгута и забора крови могут возникать неприятные ощущения
прием лекарственных препаратов может искажать результаты пробы Кумбса, поэтому за некоторое время до ее проведения их следует отменить

При проведении прямой пробы Кумбса из вены с помощью шприца берется кровь. Перед началом проведения процедуры выполняется тщательная дезинфекция места прокола, а после забора материала для исследования налаживается вата либо стерильная марля. В том случае, если анализ проводится у новорожденных, то кровь берется из пуповины.

При появлении гематомы после забора крови назначается прилаживание согревающих компрессов на место прокола. После проведения процедуры пациент может возобновить прием лекарственных препаратов.

В лаборатории проводится очищение полученной крови и параллельно с этим выполняется отделение красных кровяных телец.

Специалистом проводиться исследование образца с использованием различных реагентов сыворотки и Кумбса, противопоставляемых глобулину человека. В том случае если не происходит слипания эритроцитов и не развивается агглютинации, то можно говорить о положительном результате.

Во время проведения могут возникать следующие осложнения:

развитие из места забора крови во время исследования
головная боль, головокружения либо обморок
развитие кровоизлияния под кожные покровы
при плохой антимикробной обработке кожных покровов в месте инъекции повышается риск проникновения инфекции в организм

Результаты исследования

Расшифровка — возможные заболевания

У здорового человека в организме отсутствуют антитела к , то есть в норме их не должно быть. В том случае, если проведенное исследование покажет положительную пробу, то это может обозначать присутствие в организме антител на красных кровяных клетках.

Результатом такого патологического состояния может стать разрушение эритроцитов, и обычно оно развивается:

при системной
при микоплазменной инфекции
при инфекционном мононуклеозе
при гемолитическом заболевании новорожденных
при медикаментозной гемолитической анемии
при лимфолейкозе хронического характера
при аутоиммунной гемолитической анемии
при несовместимости крови плода и матери

Прямая проба Кумбса часто назначается женщинам во время беременности для определения совместимости крови матери и плода. В том случае, если наблюдается несовместимость материнского организма и будущего ребенка по эритроцитарным агентам, то повышается опасность развития гемолитического заболевания новорожденного.

Резус-положительный ребенок у резус-отрицательной женщины становится причиной развития резус-конфликта.

При такой патологии происходит разрушение эритроцитов будущего ребенка антирезусными телами материнского организма. Попадая в женский организм, красные кровяные тельца плода оказывают стимулирующее действие на иммунную систему матери, и результатом этого становится производство антител к ребенку.

Полезное видео — гемолитические анемии.

Образование в материнском организме таких приводит к агглютинационному тромбозу капилляров и ишемическому некрозу плодных тканей. В результате гемолиза эритроцитов и распада гемоглобина наблюдается образование токсического непрямого в организме плода. Резкое снижение содержания эритроцитов у плода по причине их гемолиз приводит к развитию у ребенка такого заболевания, как анемия.

Низкий уровень и высокая концентрация билирубина значительно осложняют течение болезни. Во время беременности диагностируется множество таких осложнений как:

угроза выкидыша
развитие кровотечения
гестозы
малокровие
преждевременная родовая деятельность

Антирезусные тела защищают мать, но в то же время представляют серьезную угрозу для развивающегося плода. Благодаря проведению пробы Кумбса удается вовремя диагностировать такое патологическое состояние женского организма и назначить своевременное лечение. Кроме этого, такой анализ помогает выявлять различные заболевания крови, прогрессирование которых могут привести к смерти пациента.

Антиглобулиновый тест, предназначенный для выявления неполных антиэритроцитарных антител, был предложен Кумбсом, Морантом, Рейс в 1945 г. и получил в дальнейшем название пробы Кумбса . Суть данного метода заключается в том, что антиглобулиновая сыворотка, содержащая антитела к иммуноглобулинам человека, при реакции с эритроцитами, сенсибилизированными неполными антителами, приводит к их агглютинации.

В зависимости от того, фиксированы ли антитела на поверхности эритроцитов или находятся в свободном состоянии в плазме крови, применяется прямая или непрямая проба Кумбса.

Прямая проба Кумбса ставится в тех случаях, когда есть основания предполагать, что исследуемые красные кровяные клетки уже in vivo подверглись сенсибилизации соответствующими антителами, т.е. первая фаза реакции — фиксация антител на поверхности эритроцитов — произошла в организме и последующее добавление антиглобулиновой сыворотки вызывает агглютинацию сенсибилизированных клеток.

С помощью непрямой пробы Кумбса выявляют неполные антитела, присутствующие в исследуемой сыворотке. В данном случае реакция протекает в два этапа. Первый этап — инкубация тест-эритроцитов с исследуемой сывороткой, во время которой происходит фиксация на эритроцитарной поверхности антител, содержащихся в исследуемом образце сыворотки. Второй этап — добавление антиглобулиновой сыворотки.

До настоящего времени проба Кумбса широко применяется в лабораторной практике для диагностики иммунопатологических состояний, в частности при аутоиммунных гемолитических анемиях, характеризующихся деструкцией эритроцитов вследствие связывания клеточной мембраны с антителами и (или) компонентами системы комплемента. С его помощью выявляют присутствие на эритроцитарной мембране Ig G (обычно Ig G1 и Ig G3), которые могут активировать комплемент, а иногда и комплемента (С3d). Однако в остром периоде заболевания в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса .

Необходимо подчеркнуть, что непрямая проба Кумбса остается наилучшим методом индивидуального подбора трансфузионных сред, так как позволяет наиболее точно установить индивидуальную совместимость донора и реципиента по эритроцитарным антигенам.

Дополнительное выполнение прямого антиглобулинового теста на наличие аутоантител рекомендуется при обследовании всех реципиентов органов и тканей в предтрансплантационном периоде и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток также и после трансплантации .

Кроме иммуногематологии и трансфузиологии антиглобулиновые пробы широко применяются при диагностике целого ряда патологических состояний: при гематологических заболеваниях, включая лимфопролиферативные, при системных заболеваниях соединительной ткани, болезни Шегрена, хроническом активном гепатите и др.

Активно используются пробы Кумбса в медицинской генетике и судебной медицине для определения поверхностных эритроцитарных антигенов.

Проба Кумбса относится к достаточно трудоемким методам исследования, требующим особой тщательности в выполнении. При ее использовании встречаются некоторые затруднения, связанные, в частности, с интерпретацией слабоположительных реакций. Известно, что ложные слабоположительные или отрицательные реакции при выполнении проб Кумбса могут быть следствием недостаточно эффективной отмывки эритроцитов, нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки, а также контакта с необезжиренной поверхностью, на которой может фиксироваться антиглобулин, теряя при этом свою активность . Еще один недостаток пробы Кумбса — нестойкость антиглобулинового реагента, получение и хранение которого имеют определенные особенности, что также делает затруднительной количественную оценку реакции гемагглютинации с антиглобулиновой сывороткой.

Кроме того, исследования, проведенные А. Holburn , D. Voak et al. , показали, что причиной ложноотрицательных результатов может быть чрезмерное встряхивание при ресуспендировании взвеси эритроцитов. Ошибочные результаты при выполнении антиглобулиновых тестов могут также обусловливаться присутствием в антиглобулиновом реагенте примеси антикомплементарных антител, в частности к С3d-, С3c-, С4c- и С4d- компонентам комплемента, которые адсорбируются на поверхности тест-эритроцитов в процессе инкубации и создают видимость положительного результата .

Указанные недостатки легко устраняются при тщательной отмывке исследуемых образцов и контроле за условиями проведения реакции.

В последнее десятилетие для сокращения времени проведения непрямой пробы Кумбса и повышения ее чувствительности используют изотонический раствор с низкой ионной силой (LISS) .

Неоспоримым преимуществом антиглобулиновых проб, по мнению ряда авторов, является их высокая чувствительность, значительно превосходящая разрешающую способность альтернативных методов исследования, которые используются для выявления неагглютинирующих антител .

Нами было проведено сравнение разрешающей способности методов исследования сывороток крови на наличие неполных антител с применением полиглюкина, желатина и антиглобулиновой сыворотки . В ходе исследования был осуществлен контроль титров неполных анти-D-антител в 140 образцах сывороток крови изоиммунных доноров с применением желатинового, полиглюкинового и непрямого антиглобулинового тестов. Постановка данных методов осуществлялась в соответствии с общепринятыми методиками .

Было установлено, что по своей разрешающей способности методы выявления сенсибилизации эритроцитов анти-D-антителами располагаются следующим образом: наиболее чувствительный — непрямая проба Кумбса, затем желатиновый тест и наименее информативный — полиглюкиновый. Полученные в этой серии опытов результаты в полной мере соответствуют литературным данным, что позволяет сделать вывод о достаточно высоком уровне чувствительности проб Кумбса, позволяющем с большой степенью достоверности идентифицировать присутствие в организме антиэритроцитарных антител, не вызывающих агглютинации красных кровяных клеток.

Тем не менее, при постановке проб Кумбса в практике встречаются случаи, когда неполные антитела не выявляются, хотя клиническая картина заболевания или предшествующая иммунизация указывает на возможное их присутствие. В таких случаях можно предположить, что количества антител недостаточно для того, чтобы они преципитировались антителами антиглобулиновой сыворотки.

Сделанный вывод подтвержден собственным экспериментом, в котором с помощью метода аналитического микроэлектрофореза клеток было установлено наличие на тест-эритроцитах анти-D-антител, не определяемых в непрямой пробе Кумбса. В этой серии опытов антиглобулиновая сыворотка добавлялась к эритроцитам, предварительно инкубированным с сыворотками, полученными из крови иммунизируемых доноров, в период антителогенеза в ходу, т.е. в период, когда известными методами, в том числе пробой Кумбса, антитела в них не определялись.

В проведенных исследованиях доказательством присутствия неполных антител на поверхности эритроцитов служило статистически значимое изменение величины электрофоретической подвижности сенсибилизированных красных кровяных клеток после добавления антиглобулиновой сыворотки. Необходимо отметить, что в последующем у всех иммунизированных доноров в непрямой пробе Кумбса в сыворотке крови определялись анти-D-антитела.

Gillerand et al. также показали, что для антиглобулиновых тестов характерен определенный порог чувствительности: положительный результат отмечается лишь тогда, когда на поверхности одного эритроцита фиксируются не менее 500 молекул Ig G.

Кроме того, в литературе приводятся данные в пользу того, что возможный отрицательный результат пробы Кумбса может быть связан с низкой аффинностью антител, сенсибилизирующих эритроциты, вследствие чего они легко элюируют с поверхности красных кровяных клеток в процессе отмывания .

С учетом вышесказанного можно сделать вывод, что в ряде случаев отрицательный результат пробы Кумбса еще не есть доказательство отсутствия фиксированных на поверхности эритроцитов антител.

Известно, что реакции Кумбса обладают высокой специфичностью и позволяют обнаружить большинство разновидностей неполных антител. Однако, как показывают некоторые экспериментальные данные, антиглобулиновые пробы могут оказаться положительными и при неиммунологических состояниях. E. Muirhead et al. на второй день после введения фенилгидразина собакам наблюдали положительную пробу Кумбса. Столь быстрое появление положительной реакции свидетельствует против ее иммунологической природы и, скорее, связано с неспецифической адсорбцией белка на поверхности эритроцитов.

M. Williams et al. установили, что клавулановая кислота также может быть причиной положительной реакции, что, по мнению авторов, связано с неспецифической адсорбцией плазменных белков на эритроцитарной поверхности. Аналогичный эффект наблюдался и при лечении цефалоспориновыми антибиотиками .

Авторы вышеприведенных исследований подчеркивают неиммунологический характер полученных положительных результатов проб Кумбса и настаивают на том, что указанные вещества способны вызывать модификацию мембран красных кровяных клеток, в результате которой эритроциты могут адсорбировать белки (в частности, альбумин), в норме присутствующие в плазме крови и не обладающие свойствами антител. Кроме того, возможно, именно ксенобиотик, адсорбируясь на клеточной поверхности, служит связующим звеном между мембраной клетки и белками плазмы.

Для правильного толкования результатов постановки антиглобулиновых проб следует учитывать и количественное соотношение между молодыми и зрелыми эритроцитами в периферической крови. Было установлено, что ретикулоциты, выделенные из организма в период усиленной регенерации эритрона, могут агглютинироваться антиглобулиновой сывороткой .

Положительный результат прямого антиглобулинового теста отмечается и при различных патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями иммунной системы, воспалительными процессами, ведущими к неспецифической адсорбции антител разной специфичности на мембранах эритроцитов. Это дает основание полагать, что молекулы Ig G не взаимодействуют со специфическими антигенами эритроцитов, а только фиксируются на поверхности исследуемых клеток .

Следует учитывать, что при постановке пробы Кумбса в случаях заболеваний, характеризующихся развитием диспротеинемии или появлением парапротеинов, положительный результат обусловлен присутствием на поверхности эритроцитов белков, не обладающих свойствами антител , что также свидетельствует о недостаточной специфичности антиглобулиновых проб относительно природы выявляемого с их помощью белка.

Таким образом, как показали многочисленные исследования , положительные результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов не являются абсолютным доказательством наличия антител, поскольку положительные реакции могут наблюдаться и при различных патологических состояниях, не связанных с изосенсибилизацией или аутосенсибилизацией организма. Поэтому только сопоставление результатов нескольких иммуносерологических методов с клинической картиной заболевания позволяет в полной мере судить о развивающемся патологическом процессе.

Положительный непрямой антиглобулиновый тест при отрицательной прямой пробе обычно указывает на присутствие в исследуемой сыворотке аллоантител в свободном состоянии, связанное с предшествующими переливаниями крови или беременностями.

Проба Кумбса часто бывает положительной при обострении пароксизмальной ночной гемоглобинурии; позитивная проба Кумбса с анти-С3 и анти-С3dg является маркером холодовой агглютининовой болезни .

В случаях, когда велик риск развития гемолитической болезни новорожденных, большое значение для постановки диагноза (чаще всего во время беременности) и при необходимости динамического наблюдения за появлением и изменением титра антител имеют результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов . Чаще всего гемолитическая болезнь новорожденных связана с несовместимостью матери и плода по антигену D, реже — по антигенам системы АВ0 и еще реже — по другим антигенам (С, с, К и др.). Образующиеся при этом антитела, будучи, как правило, неполными антителами класса Ig G, четко выявляются в непрямом антиглобулиновом тесте. При данном заболевании большое значение имеют правильно установленные титр и специфичность выявленных антител, поскольку существует определенная корреляция между уровнем антиэритроцитарных антител в крови беременной женщины и возможным прогнозом тяжести гемолитической болезни .

Непрямая проба Кумбса также необходима в клинической практике в целях обеспечения проведения безопасной трансфузионной терапии . Ее выполнение является обязательной составляющей иммуногематологических исследований доноров и различных категорий реципиентов, а также плановых обследований всех пациентов лечебно-профилактических учреждений, которым может потребоваться переливание крови и ее компонентов.

Непрямой антиглобулиновый тест применяется в следующих случаях:

Для более точного установления резус-принадлежности (антиген D) при нечетких результатах определения резус-фактора другими методами (полиглюкиновый, желатиновый и др.);

Для выявления слабых эритроцитарных антигенов (системы Келл, Даффи, Кидд, Льюис и др.) и антител к этим антигенам;

Для обнаружения и идентификации аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела, вызывающие гемолитические посттрансфузионные реакции;

Для определения наличия иммунных антител системы АВ0 при трансфузионных гемолитических осложнениях;

В качестве пробы на совместимость при индивидуальном подборе переливаемой крови и ее компонентов.

Таким образом, проба Кумбса является важным диагностическим тестом, применяемым в различных областях медицины (гематология, акушерство, ревматология, трансфузиология, клинико-лабораторная диагностика и др.). Знание особенностей постановки пробы Кумбса поможет повысить достоверность полученных результатов и будет способствовать правильной трактовке лабораторных данных.

Литература

1. Антитела. Методы / под ред. Д. Кэтти. — М.: Мир, 1991.

2. Байрамалибейли И.Э., Рагимов А.А., Гаджиев А.Б . // Трансфузионная терапия анемий: учеб. пособие для врачей. — М.: Практ. медицина, 2005. — С. 105—106.

3. Волкова О.Я., Фрегатова Л.М., Левченко Л.Б. // Трансфузиология. — 2006. — №2 . — С. 39—62.

4. Донсков С.И. // Группы крови системы Rhesus: теория и практика. — М.: ВИНИТИ РАН, 2005. — С. 180—186, 195.

5. Иммуносерология (нормативные документы) / сост. А.Г. Башлай, С.И. Донсков. — М.: ВИНИТИ РАН, 1998.

6. Исследование системы крови в клинической практике / под ред. Г.И. Козинца, В.А. Макарова. — М.: Триада-Х, 1997.

7. Левин В.И . К механизму эритродиереза и эритропоэза в период острой постгеморрагической анемии: автореф. дис. …канд. мед. наук. — Минск, 1968.

8. Рагимов А.А., Байрамалибейли И.Э . // Основы диагностики, профилактики и лечения анемий. — М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. — С. 204—209.

9. Чумакова Е.Д . // Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии: м-лы VI съезда гематологов и трансфузиологов Республики Беларусь, Минск, 24—25 мая 2007 г. / под ред. А.И. Свирновского, М.П. Потапнева. — Минск: РНПЦ гематологии и трансфузиологии, 2007. — С. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R . // Lancet. — 1945. — Vol. 2. — P. 15.

11. Freedman J . // J. Clin. Pathol. — 1979. — Vol. 32. — P. 1014—1018.

12. Holburn A.M . Quality Control. Methods in Hematology /ed. I. Cavill. — Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. — Vol. 4. — P. 34—50.

13. Khan S. // CMAJ. — 2006. — Vol. 175, N 8. — P. 919.

14. Komatsu F. // Nippon Rinsho. — 2005. — Vol. 63 (suppl. 7). — P. 719—721.

15. Komatsu F. // Nippon Rinsho. — 2005. — Vol. 63 (suppl. 7). — P. 716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F. // New Engl. J. Med. —1976. — Vol. 277. — P. 123—125.

17. Muirhead E.E., Groves M., Brian S . // J. Lab. Clin. Med. —1954. — Vol. 44. — P. 902—903.

18. Rosse W.F. // Hosp. Prac. — 1995. — N 105.

19. Voak D., Downie D., Moore B. et al. //Biotests Bull. — 1986. — Vol. 1. — P. 41—52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Cell Washing machines for antiglobulin tests. Replicate testing — a new method demonstrating the inefficiency of one widely used machine — the Sorvall CW1-AF2: report to the DHSS Technical Branch, February 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C. P . et al. //Antimicrobial Agents and Chemotherapy. —1985. — P. 125—127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H . // CMAJ. — 2006. — Vol. 174, N 3. — P. 305—307.

Медицинские новости. - 2008. - №3. - С. 33-36.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.

Средняя цена в вашем регионе: 2645 от 2645 … до 2645

1 лабораторий делают данный анализ в вашем регионе

Описание исследования

Подготовка к исследованию: Кровь берут из вены, а затем получают сыворотку (плазма крови без фибриногена) путем естесственного свертывания или путем осаждения фибриногена. Исследуемый материал: Взятие крови

На поверхности эритроцитов находится большое количество антигенов. В зависимости от вида этих антигенов выделяют группы крови, самые изученные группы - АВО, Rh, Kell, Duffy и многи другие системы. В норме в крови существуют антитела к антигенам другой группы, но при переливании крови, беременности, аутоиммунных заболеваниях и др. обнаруживаются антитела к своим антигенам.Неполные антитела к эритроцитам

Метод

Непрямая реакция Кумбса основана на выявлении агглютинации (слипания) эритроцитов, у которых на поверхности имеются неполные антитела, которая появляется при добавлении антиглобулиновой сыворотки.

На первом этапе в одну пробирку вносят донорские эритроциты (O(I) группа, Rh+) и исследуемую сыворотку. Если неполные антитела к эритроцитам присутствуют в исследуемой сыворотке, то они фиксируются на поверхности донорских эритроцитов.

На втором этапе на стекло наносят донорские эритроциты с антителами (если они были) и стандартную антиглобулиновую сыворотку с антителами к человеческим иммуноглобулинам. Если на первом этапе антитела к эритроцитам зафиксировались на поверхности эритроцитов, то при добавлении стандартной сыворотки эритроциты склеиваются из-за взаимодействие антител.

Референсные значения - норма
(Реакция Кумбса непрямая (антиглобулиновый тест, выявление неполных антиэритроцитарных антител), кровь)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

Норма:

В норме антител к собственным эритроцитам не должно быть, при постановке реакции Кумбса агрегации эритроцитов не происходит.

Показания

Исследование гуморального специфического иммунитета при подозрении на аутоиммунные реакции в организме, резус-конфликт между матерью и плодом, определение совместимости крови донора и реципиента